香蕉提取dna论文
问:如何用香蕉提取DNA
- 答:CTAB法
其原理是:采用机械破碎植物细胞,然后加入CTAB分离缓冲液将DNA溶解出来,再经氯仿-异戊醇抽提除去蛋白质,最后得到DNA。
1.将植物组织洗净,用75%的酒精表面消毒4-5min,用去离子水冲洗3次;
2.
将样品放在灭过菌的研钵中,加入液氮捣碎,迅速转入1.5ml离心管中,加入600mlCTAB(或同时加入石英砂和CTAB研磨,然后转入1.5ml离心管中);
3.
65℃水浴1h(每20min反转摇匀一次);
4.
加等体积的氯仿-异戊醇(体积比24:1),或加入苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),颠倒混匀;
5.
6500rpm离心30min,取上清于新管中;
6.
重复4,5步骤;
7.
向上清中加入2倍体积的无水乙醇(或2/3体积的异丙醇)沉淀DNA,-20℃放置20min或更长时间,或过夜;
9.
加75%的乙醇清洗DNA,每次12000rpm
2min,去上清;
10.
风干后加入40ul的TE缓冲液溶解DNA;
11.
取2ul溶液电泳检测
CTAB溶液
CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)中加入2-巯基乙醇,使终浓度达2%(V/V)。将此溶液及CTAB/NaCl溶液加热至65℃。
问:请问如何从香蕉中提取DNA?步骤要详细,谢谢!
- 答:1. 取30g香蕉,15gNaCl,5ml洗涤剂,一同加入研钵中,充分研磨5min。
2. 用纱布搭在烧杯上,将混合物过滤。滤液加入离心管中。
3. 将离心管放入离心机中,以1500r/min的转速离心3min。分次离心,用吸管吸取离心管中清液,加入小烧杯中,合并离心液。
4. 将离心液在冰箱冷藏室放置5min(若有沉淀,取上清液)
5. 将冷却的95%酒精(大约2倍与上清液)加入烧杯中。沿一个方向轻轻搅拌(注意:玻璃棒不能触碰烧杯底部)有丝状物(即香蕉DNA)出现。静置。有更多絮状物出现,用玻璃棒轻轻缠起。
问:怎么提取dna
- 答:实验开始前,要准备这几样东西,包括一根香蕉、异丙醇、食盐、液体肥皂、玻璃杯,搅拌器,纱布,漏勺和碟子。
一切准备就绪后,先将1汤勺食盐和10滴含有十二烷基硫酸钠的液体肥皂混合在玻璃杯中,加入100毫升热水,搅拌均匀,如下图所示:
取出第二个杯子,放入去皮切成段的香蕉,加入100毫升冷水,再从第一杯中取5汤匙沉淀溶液,彻底混合在一起。
接下来,通过几层纱布过滤混合液,小心地加入200毫升冰冷的异丙醇。
观察杯中形成的白色纤维物质(下图),即为香蕉的DNA。
同样的DNA提取方法也适用于草莓、西红柿或者桃子。
你肯定在想,这种DNA提取方法的原理是什么?
其实,这是因为液体肥皂含有表面活性剂,有助于破坏香蕉的细胞膜和细胞核,而盐中的钠离子与DNA分子的磷酸基团结合,有助于将DNA分离出来。添加冷异丙醇则可降低DNA和钠化合物在水中的溶解度。
本文来源: https://www.lw74.cn/article/11908848169abe4c2349ac92.html