一、利用非胰岛细胞进行1型糖尿病基因治疗的研究进展（论文文献综述）
刘叶美,张维,吕爱玲,安民民,季学磊[1]（2021）在《人脐带间充质干细胞治疗1型糖尿病的远期疗效观察》文中提出目的探讨人脐带间充质干细胞（HUC-MSCs）移植治疗1型糖尿病的远期疗效。方法收集2009年9月至2011年12月芜湖市第二人民医院内分泌科收治住院行HUC-MSCs移植治疗的15例1型糖尿病患者的临床资料, 包括移植前及移植后10年时空腹血糖、HbA1C、平均血糖波动幅度（MAGE）、空腹C肽、胰岛素使用剂量及谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）。结果移植后, 发现1例患者（6.67%）合并肿瘤（乳腺癌）, 所有1型糖尿病患者均在1周后因低血糖频发而出现日胰岛素总量减少, 半年后有4例（26.67%）停用胰岛素治疗, 其中1例（6.67%）至今未使用胰岛素且GADA转阴, 剩余3例（20.00%）均在移植后3～5年内再次使用胰岛素, 但是日胰岛素总量较移植前显着减少[（18.00±1.00）U对（29.00±1.73）U,P<0.01]。未停用胰岛素的11例（73.33%）患者日胰岛素总量亦较移植前显着减少[（18.09±0.83）U对（29.64±0.89）U,P<0.01]。所有患者移植后的MAGE较移植前明显减少[（6.14±0.25）mmol/L对（9.72±0.32）mmol/L,P<0.01], 空腹C肽水平较移植前明显改善[（0.91±0.03）nmol/L对（0.11±0.01）nmol/L,P<0.01]。而移植前后空腹血糖、HbA1C无明显差异。结论 HUC-MSCs能更好地恢复胰岛细胞分泌功能, 减少胰岛素用量, 减少血糖波动, 对1型糖尿病可能具有远期疗效, 虽然具体机制尚不清楚, 但有望成为治疗1型糖尿病的一种有效策略。
中华医学会糖尿病学分会[2]（2021）在《中国2型糖尿病防治指南（2020年版）》文中研究指明随着国内外2型糖尿病的研究取得了重大进展, 获得了更多关于糖尿病及其慢性并发症预防、诊断、监测及治疗的循证医学新证据。中华医学会糖尿病学分会特组织专家对原有指南进行修订, 形成了《中国2型糖尿病防治指南（2020年版）》, 旨在及时传递重要进展, 指导临床。本指南共19章, 内容涵盖中国糖尿病流行病学、糖尿病的诊断与分型、2型糖尿病的三级预防、糖尿病的筛查和评估、糖尿病的教育和管理、2型糖尿病综合控制目标和高血糖的治疗路径、医学营养、运动治疗和体重管理、高血糖的药物治疗、糖尿病相关技术、糖尿病急性和慢性并发症、低血糖、糖尿病的特殊情况、代谢综合征和糖尿病的中医药治疗等。本指南的颁布将有助于指导和帮助临床医师对2型糖尿病患者进行规范化综合管理, 改善中国2型糖尿病患者的临床结局。
冯静怡[3]（2021）在《SETD4调控的静息β细胞的功能研究》文中研究表明1型糖尿病是一种自身免疫性疾病,大量β细胞丢失导致永久性的内分泌缺陷。增强或诱导内分泌胰岛的内在再生能力,并设计新的策略来产生分泌胰岛素的细胞,是糖尿病治疗研究的重要方向。小鼠成体胰腺中存在静息细胞应对损伤,并且细胞静息作为体内一种成体干细胞的保守机制存在于一些组织中,在稳态维持和应对组织损伤中发挥重要作用。前期实验发现了Setd4蛋白调控的细胞静息的进化保守机制,在链脲佐菌素诱导的1型糖尿病损伤中,Setd4阳性细胞响应胰岛的损伤,但Setd4阳性细胞具体的特征和功能还不清楚。本研究进一步探讨了Setd4阳性细胞对于Pdx1阳性细胞的再生的功能。我们发现胰岛中Setd4阳性的细胞主要表达在Pdx1阳性的细胞中,并且不表达增殖指标Ki67,即处于静息状态。基于Setd4蛋白调控细胞静息的机制,我们构建了SETD4基因条件性敲除小鼠,实现了在成年小鼠胰岛Pdx1阳性细胞中SETD4基因的条件性敲除。在成年小鼠SETD4基因条件性敲除一周后,增殖的Pdx1阳性细胞增多。在链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠中,发现Setd4阳性细胞数量保持不变并且处于静息状态。为了进一步研究β细胞损伤模型中SETD4基因的功能,在1型糖尿病模型中,特异性敲除SETD4基因后,发现增殖的Pdx1阳性细胞增多,但是血糖、胰岛素含量、胰岛的组织形态及有功能性的β细胞数量并没有显着差异。联合GAD65治疗后,发现SETD4基因敲除后血糖下降、胰岛素含量升高、胰岛的组织形态得以改善,并且增殖的Pdx1阳性细胞数量及有功能性的β细胞数量增多。综上所述,胰岛中存在一类Setd4阳性的静息的Pdx1阳性的细胞。在敲除SETD4基因后,可以促进Pdx1阳性细胞的增殖。在链脲佐菌素诱导的1型糖尿病模型中,Setd4阳性细胞通过维持静息来应对损伤,并且特异性敲除SETD4基因后可以促进Pdx1阳性细胞的再生以抵抗损伤。我们的研究为1型糖尿病提供了新的治疗靶点,为胰腺内分泌细胞再生的机制提供了新的可能。
孙琳[4]（2021）在《1型糖尿病患者免疫细胞表面SLAMF分子异常表达与机制研究》文中研究说明研究目的:1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus,T1DM）是一种由遗传因素和环境因素共同诱导,细胞免疫及体液免疫共同介导胰岛β细胞损伤的自身免疫性疾病,在儿童和青少年中更为常见。近年来,流行病学研究表明,我国T1DM发病率明显增加,而患者进行性的胰岛功能下降导致其需要终身应用胰岛素治疗,鉴于其逐年增长的发病率和随之出现的多系统并发症,T1DM已成为重大的公共卫生挑战。目前,T1DM的发病机制尚未完全明确,T细胞相关的研究一直是1型糖尿病的研究热点,而近年来除了CD4+T细胞,越来越多的研究表明CD8+T细胞在1型糖尿病的发病进程中有着重要作用。淋巴细胞活化信号分子家族（signaling lymphocyte activated molecular family,SLAMF）被报道在多种免疫异常疾病中表达异常,并显着影响包括CD8+T细胞在内的免疫细胞分化及功能。然而对T1DM免疫细胞表面SLAMF分子的表达情况未被报道,且对于T1DM中SLAMF分子如何通过影响CD8+T细胞功能仍不明确。为探讨这一问题,本课题通过对T1DM患者及非肥胖的糖尿病小鼠模型（non-obese diabetic,NOD）免疫细胞分化情况及SLAMF分子表达情况进行分析,并进行mRNA测序及相关的体外细胞实验,以期探讨T1DM免疫系统异常分化及SLAMF分子表达对T1DM免疫微环境下CD8+T细胞功能和命运的影响。研究方法:（1）对T1DM患者及健康对照组（health control,HC）的一般临床资料进行统计,利用流式细胞分析法对外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中T细胞及其亚群、NK细胞及其亚群、B细胞等免疫细胞比例进行分析,并检测T细胞、B细胞和NK细胞表面SLAM分子家族的表达情况;（2）利用流式细胞分析法对T1DM患者外周血中T细胞SLAMF4分子表达及促炎性细胞因子IFN-γ和TNF-a的分泌情况进行检测,分析SLAMF4分子与细胞活化状态和细胞因子分泌能力之间的相关性;分析SLAMF4分子表达与1型糖尿病一般临床资料的相关性;（3）对自发性1型糖尿病小鼠模型NOD小鼠进行体重、随机血糖监测及小鼠尾静脉采血,对小鼠胰腺组织留取病理,进行苏木精-伊红（hematoxylin-eosi,HE）染色,观察其组织细胞形态、炎细胞浸润情况;用流式细胞分析法检测小鼠外周血免疫细胞分化及外周血、胰腺引流淋巴结CD8+T细胞表面SLAMF4分子表达情况;（4）采用流式细胞分选技术得到纯化的T1DM患者的SLAMF4+CD8+T细胞和SLAMF4-CD8+T细胞,并进行mRNA转录组测序,分析差异表达基因的分布及临床意义;（5）应用免疫磁珠分选技术分选脐带血细胞中CD8+T细胞,在体外给予抗CD3/CD28单克隆抗体刺激下进行培养,检测作用不同时间CD8+T细胞表面SLAMF4分子表达情况;（6）采用磁珠分选联合流式细胞分选技术正常健康人SLAMF4阳性CD8 T细胞和SLAMF4阴性CD 8 T细胞分别进行分选,在体外给予抗CD3/CD28单克隆抗体的刺激下进行体外扩增,用CFSE标记细胞,检测细胞增殖情况,并于Day6检测两种细胞的凋亡情况。研究结果:（1）T1DM患者外周血PBMC中免疫细胞比例与HCs比较存在异常,表现为CD4+T细胞和B细胞比例增多,Treg细胞的比例降低,总NK细胞及其CD56dim亚群的NK细胞比例减低,CD56bright亚群的NK细胞比例升高。与HCs相比,T1DM患者外周血PBMC中SLAMF4阳性的总T细胞百分比降低,且SLAMF4阳性的CD8+T细胞明显降低;SLAMF3分子表达在B淋巴细胞比例有所降低,SLAMF5在NK细胞表面表达升高,差异均有统计学意义。（2）T1DM患者T细胞表面SLAMF4分子表达与细胞活化的状态有关,且与SLAMF4阴性CD8+T细胞相比,SLAMF4阳性CD8+T细胞具备更强的分泌促炎因子IFN-γ和TNF-a的能力;在与T1DM相关的一般临床指标的分析中,发现SLAMF4阳性CD8+T细胞百分比与糖化血红蛋白水平及T1DM病程呈负相关。（3）与同周龄的Balb/c小鼠相比,NOD小鼠CD4+T细胞及CD4+CD25+的调节性T细胞百分比明显降低,随着NOD小鼠1型糖尿病的发生发展,SLAMF4阳性CD8+T细胞百分比逐渐下降,且明显低于对照Balb/c小鼠。（4）mRNA转录组测序结果表明,1型糖尿病中SLAMF4作用后的CD8+T细胞表现出多个信号通路的异常改变,包括T细胞受体信号相关的信号通路、细胞因子分泌及细胞凋亡通路,差异表达的基因中也有多个与凋亡相关的基因,说明SLAFM4在1型糖尿病中调控CD8+T细胞的活性与命运。（5）通过体外培养人脐带血CD8+T淋巴细胞发现,一定程度的抗原刺激可促进SLAMF4在脐带血na?ve CD8+T细胞表面上调表达,随着免疫活化的时间延长,SLAMF4阳性CD8+T细胞百分比逐渐下调。（6）通过SLAMF4阳性CD8+T细胞和SLAMF4阴性CD8+T细胞经CFSE标记后体外培养,发现SLAMF4阴性CD8+T细胞对抗CD3/CD28单克隆抗体的TCR刺激更敏感、更易扩增,增殖能力强,而SLAMF4阳性CD8+T细胞更容易凋亡。研究结论:（1）T1DM患者外周血PBMC中免疫细胞分化比例与HCs相比存在异常,且外周血T细胞及B细胞表面多种SLAM分子表达水平发生变化,结合课题组前期结果,这在T1DM及T2DM之间存在一定共性和不同之处。（2）与HCs相比,T1DM患者SLAMF4阳性CD8 T细胞百分比显着下降,且SLAMF4分子表达与细胞活化的状态及促炎性细胞因子IFN-γ和TNF-a的分泌有关。在T1DM患者中,SLAMF4+CD8+T细胞百分比与患者的糖化血红蛋白水平和1型糖尿病病程呈负相关。（3）在动物模型中我们发现NOD小鼠也存在外周血T细胞异常分化状态。且随着NOD小鼠1型糖尿病的发生发展,SLAMF4阳性CD8+T百分比逐渐下降,明显低于对照Balb/c小鼠。（4）SLAMF4分子表达与1型糖尿病患者CD8+T细胞功能调控及凋亡显着相关,SLAMF4阳性的CD8+T细胞增殖能力较差且更容易凋亡,故体内持续抗原刺激会导致表达SLAMF4的CD8+T细胞的百分比降低,使其发挥类似调定点作用。综上所述,本课题首次分析了T1DM疾病模型中的SLAMF分子家族的表达谱,为SLAMF分子与T1DM免疫细胞的调控提供了实验证据,证实了在1型糖尿病免疫微环境中SLAMF4表达对CD8+T细胞的功能影响和命运的调控及SLAMF4阳性CD8+T细胞比例变化的具体机制,提示SLAMF4分子可能为T1DM的早期诊断,临床分期或免疫干预提供新靶点。
李晗嘉[5]（2021）在《PDA-PLGA水凝胶生物支架装载脂肪间充质干细胞诱导胰岛β细胞对糖尿病的治疗作用研究》文中研究说明糖尿病（Diabetes mellitus,DM）是一种慢性非传染性疾病,具有较高的发病率和死亡率。糖尿病引发一系列影响大多数组织的血管事件,是肾功能衰竭、视力减退、缺血性心脏疾病、中风和外周动脉闭塞性疾病的主要原因。胰岛β细胞功能衰竭是导致糖尿病发生发展的关键环节,现阶段市场上的一些治疗药物虽能缓解糖尿病的症状,但没有从根本上解决问题。移植胰岛可有效地输送胰岛素并降低体内的血糖水平,因此目前胰岛移植可能是治疗糖尿病最佳手段。但由于胰岛的供应量和质量不足,移植后免疫排斥等问题限制了胰岛移植的广泛应用。近年来,干细胞床临床研究取得的一些成果有望解决这一问题。干细胞能够自我更新,分泌多种重要的细胞因子,是胰岛移植的重要细胞来源。其中脂肪间充质干细胞作为干细胞的重要家族成员,可以在特定的条件下诱导分化为脂肪、骨、胰岛β细胞和心肌等多种细胞,因此在细胞移植治疗糖尿病中具有广阔的前景。临床上大部分胰岛移植都是将细胞移植到肝脏,但移植过程中细胞易丢失,只具有短期效果。因此胰岛细胞移植过程中,移植部位和移植载体的选择也制约着胰岛是否能够成功。有研究发现,骨骼肌部位的微环境可以进行移植,并且便于移植后的血糖监测,这提示我们肌肉组织作为葡萄糖利用来说十分重要的靶器官,有成为胰岛细胞移植部位的巨大潜力。然而成团胰岛细胞在移植过程中可能会因内部缺氧,影响细胞存活,因此制备合适的可降解生物支架十分重要。细胞支架是移植细胞生长及物质交换的重要载体。水凝胶作为高度亲水的聚合物支架,已广泛应用于生物医学工程的各个领域。最近,一些研究表明,水凝胶作为细胞支架负载的干细胞可以促进伤口愈合。此外,人们还致力于开发在生理条件下能自发快速凝胶化的原位可注射水凝胶,并对水凝胶生态位进行改性,以满足不同细胞培养和组织工程应用的需要。海藻酸钠是从褐藻中提取的一种天然多糖,其具有高亲水性、生物降解性、良好的生物相容性,是一种传统的水凝胶材料,可用作细胞支架为细胞移植提供适宜的微环境。目前骨骼肌作为葡萄糖利用的重要靶器官,能够提供适宜细胞增殖的条件,是一个潜在的移植部位。但骨骼肌部位的移植物极易受到内部肌肉的挤压,因此需要我们的移植物具备一定的机械力,能够让细胞在移植部位长期生存。聚乳酸-羟基乙酸共聚物（Poly（lactic-co-glycolic acid）,PLGA）,是一种可降解,无毒无害的高分子材料,目前应用于临床的许多研究,课题组前期发现PLGA支架经过聚多巴胺（Poly dopamine,PDA）涂层后,获得的PDA-PLGA支架除了具备原先的优势外,亲水性和机械性也得到了极大的改善。目前,尚未有报道将PDA-PLGA包裹海藻酸钠水凝胶搭载脂肪间充质干细胞诱导胰岛β细胞进行骨骼肌移植治疗糖尿病。本课题将通过离子交联法制备海藻酸钠水凝胶支架,并对其进行表征,筛选获得含水量高和力学性能良好的支架。通过制备聚多巴胺涂层的PLGA支架并将其包裹海藻酸钠水凝胶,获得机械性能强,生物相容性高的生物支架体系,将PDA-PLGA水凝胶生物支架RINm5f移植到糖尿病鼠骨骼肌中,评价支架的有效性;利用资源丰富且能够满足自体回输的脂肪间充质干细胞作为干细胞来源,通过腺病毒转染过表达胰腺/十二指肠同源盒蛋白（Pancreas/duodenum homeobox protein 1,PDX-1）联合多因子诱导使其定向分化为具有功能的胰岛β细胞,即可持续分泌基础胰岛素且具有葡萄糖依赖胰岛素释放特性。以PDA-PLGA包裹海藻酸钠水凝胶的可降解生物支架为载体将具有功能的胰岛细胞移植于骨骼肌,使其易于监测,适应微环境,获得具有可持续治疗糖尿病的细胞治疗体系。本论文的研究内容如下所述。1.制备PDA-PLGA水凝胶生物支架。本实验部分通过利用机械性能好的合成聚合物PDA-PLGA包裹生物相容性高的天然聚合物海藻酸钠水凝胶制备胰岛移植的生物支架。通过不同浓度海藻酸钠和Ca2+交联制备出海藻酸钠水凝胶,检测不同海藻酸钠浓度水凝胶的力学性能和含水量,筛选出适合体内移植的海藻酸钠水凝胶,结果显示海藻酸钠的浓度和水凝胶的力学性能呈正相关、含水量呈负相关,因此2%海藻酸钠浓度的水凝胶具有较好的力学性能和含水量更适宜用作内部填充物。进一步检测检测海藻酸钠水凝胶的内外结构、溶胀性、细胞生物安全性,结果发现,2%海藻酸钠浓度的水凝胶能够提供胰岛细胞生存环境且不影响胰岛细胞与外界的物质交换。通过将PDA-PLGA支架卷成圆筒状并在内部填充海藻酸钠水凝胶制备得到PDA-PLGA水凝胶生物支架体系。在动物水平,将PDA-PLGA支架和PDA-PLGA水凝胶支架分别搭载ADSCs细胞移植到大鼠体内3天,7天,14天,结果表明,相对于单纯的PDA-PLGA支架,包裹水凝胶的生物支架细胞存活率更高,更适合做细胞移植的载体。将PDA-PLGA水凝胶生物支架搭载RINm5f胰岛细胞移植到糖尿病鼠骨骼肌中,结果发现,移植物能够降低大鼠血糖,对糖尿病有一定的治疗作用,PDA-PLGA水凝胶生物支架体系可以用于细胞移植治疗。2.大鼠间充质干细胞诱导为胰岛细胞体系的建立。本部分实验通过将脂肪间充质干细胞过表达PDX-1并联合多因子定向诱导分化为胰岛素分泌细胞,建立一种高效,简单,重复性好的诱导方法。首先通过分离提取培养大鼠间充质干细胞,流式鉴定其表面标记物,成脂分化鉴定其分化潜能,结果表明,分离提取获得高纯度且具备分化潜能的大鼠间充质干细胞。进一步采用腺病毒转染方法将PDX-1基因转入脂肪间充质干细胞,通过western-blot和免疫荧光检测PDX-1表达,发现与未转染组相比,转染组明显表达PDX-1。最后利用多因子（2%B27,20ng/μL b FGF,20ng/μL EGF,1%BSA,1%ITS,10ng/μL HGF,10m M尼克酰胺,5m M taurine,10ng/μL activin-A,10n M exendin-4,0.1m M taurine）联合诱导使其定向分化为为胰岛素分泌细胞,并检测其形态和功能,结果表明,诱导后的细胞双硫腙染色为猩红色,免疫荧光检测insulin阳性表达,并且在高浓度葡萄糖刺激下的胰岛素分泌增加,且具有葡萄糖依赖胰岛素分泌功能。上述研究表明通过将脂肪间充质干细胞过表达PDX-1并联合多因子诱导,成功制备了脂肪间充质干细胞诱导为胰岛细胞体系,为胰岛移植治疗糖尿病提供了种子细胞来源。3.PDA-PLGA水凝胶生物支架装载脂肪间充质干细胞诱导胰岛细胞移植治疗的应用研究。通过注射链脲佐菌素（Streptozocin,STZ）建立大鼠I型糖尿病模型,将脂肪间充质干细胞诱导的胰岛细胞接种在海藻酸钠水凝胶中,使用PDA-PLGA包裹后,移植于糖尿病大鼠骨骼肌中,监测大鼠的空腹血糖变化,组织切片检测病理形态学变化（HE染色和Masson染色）,免疫荧光检测胰岛素和血管CD31水平,探究脂肪间充质干细胞诱导的胰岛细胞及支架的复合体对糖尿病的治疗作用。结果显示PDA-PLGA水凝胶生物支架搭载胰岛细胞在糖尿病大鼠的骨骼肌部位移植前4周均能降低大鼠空腹血糖,但在治疗5周后,发现支架内胰岛素荧光明显降低,降糖作用消失,HE和Masson染色的结果表明支架内部的水凝胶在移植初期发生了降解,CD31荧光强度不高,表明新生血管不足,这些可能是作用不能维持的原因。综上所述,本课题阐明了1.PDA-PLGA水凝胶生物支架具有较强的抗骨骼肌机械压力性能,较好的生物安全性可应用于胰岛细胞骨骼肌移植,发挥治疗作用;2.过表达PDX-1联合多因子可诱导脂肪间充质干细胞定向分化为胰岛β细胞,持续分泌胰岛素,且具备葡萄糖依赖胰岛素分泌特性,为糖尿病细胞治疗提供丰富胰岛细胞来源;3.胰岛细胞-生物支架复合物在大鼠骨骼肌部位移植,具有持续分泌胰岛素,可生物降解的特性,对糖尿病具有一定的治疗作用,但鉴于治疗持续时间不足,移植尚有待进一步改进。本研究优化了脂肪间充质干细胞定向诱导分化胰岛细胞的制备方法,为干细胞向胰岛细胞定向分化提供新的策略。建立了胰岛细胞-生物支架骨骼肌移植体系,为糖尿病的治疗提供新思路。
张立志[6]（2021）在《电针通过抑制IKK/NF-κB通路改善ZDF大鼠胰岛素抵抗的机制研究》文中研究指明第一部分文献研究胰岛素抵抗本身并不是一种疾病,查阅相关文献,发现在《中医内科学》病名中并无没有“胰岛素抵抗”这样的提法,但这并不影响中医药有效的干预它。在中医的气血与阴阳理论指导下,依然可以指导其辨证论治,从而阻断胰岛素抵抗的演变,打破症候群的恶性循环[1]。胰腺当属中医“脾”的范畴,胰岛素抵抗从脏腑辨证角度而论,属于脾瘅,故治疗上当以健脾为逆转胰岛素抵抗的“抓手”,此外,中医历来讲究五行的相生相克,“见肝之病,知肝传脾”,“土虚木乘”与肝脏胰岛素抵抗紧密相关。而从中医经络论治的角度,脾瘅属阳明经病证的范畴,在东汉时期,张仲景就提出了“针足阳明,使经不传则愈”的治法。而现代医学把胰岛素抵抗作为代谢综合征的核心病理之一,也已被普遍看作是肥胖、高血压、非酒精性脂肪肝、2型糖尿病等众多疾病的共同发病机理[2]。人们认识到胰岛素受体与其靶器官的功能失调以及受体后的功能障碍是其主要发病机理,而对慢性炎症所致胰岛素抵抗的研究相对较少。慢性炎症涉及的靶器官是全身性的,这与中医整体性认识疾病有相通之处,因此,以炎症作为切入点,来探索中医作用的机制是具有可行性的一面。本研究在在既往研究的基础之上,以ZDF（fa/fa）作为胰岛素抵抗模型,以确有疗效的吡格列酮作为参照对象,探究针刺对胰岛素抵抗重要靶器官肝、肾以及胰岛炎症损害的作用机制。第二部分实验研究目的:以特殊诱导饲料Purina#5C08喂养4周的ZDF（fa/fa）大鼠为对象,并以同系非胰岛素抵抗ZDF（fa/+）大鼠作为空白对照,观察针刺对胰岛素抵抗的改善作用,并从炎症反应的角度探讨其分子信号机制,为针刺干预胰岛素抵抗提供有益的循证依据,使其广泛运用于临床各类代谢性疾病的防治。方法:30只ZDF（fa/fa）雄性大鼠使用该模型大鼠特殊诱导饲料Purina#5C08（Labdiet公司,美国）喂养,10只ZDF（fa/+）大鼠则喂以普通饲料。经过4周喂养后,采集空腹时40只大鼠的眼眶静脉窦血,测FINS、C-P,运用HOMA-IR指数与口服葡萄糖耐量实验（OGTT）评估ZDF（fa/fa）大鼠的胰岛素抵抗情况。检测所有大鼠血浆IL-6与INF-α水平,以此评估ZDF（fa/fa）大鼠的炎症因子水平。当与喂养普通饲料的ZDF（fa/+）大鼠相比,喂养Purina#5C08饲料的ZDF（fa/fa）大鼠的上述指标明显降低时（P<0.05）,表明胰岛素抵抗模型造模成功。造模成功后,根据随机数字表法,将30只 ZDF（fa/fa）雄性大鼠随机分为 3 组:ZDF 组（n=10）、ZDF+EA 组（n=10）、ZDF+Pi组（n=10）,ZDF（fa/+）大鼠为control组（n=10）。治疗上,ZDF+EA组大鼠给予电针治疗,ZDF+Pi组大鼠予盐酸吡格列酮混悬液灌胃（10mg/kg/d）,control组与ZDF组大鼠均予等体积蒸馏水灌胃,各组大鼠均连续灌胃8周,每日1次。其中,在电针ZDF组大鼠时,用特制的鼠衣予以束缚。其余3组大鼠仅每日给予同等时间的束缚,不给予电针刺激。腧穴取双侧丰隆穴（ST40）、三阴交穴（SP6）,电针波形用疏密波,20min/次,1次/日,每周5次,连续干预8周。干预期间,每周测量并记录大鼠的体重。干预8周后,使用10%戊巴比妥溶液腹膜内注射麻醉全部大鼠,打开腹腔直接经腹主动脉抽取6ml血液,离心血浆取血清,再次重复测量干预前的指标。此外,检测每组大鼠的C-P、TC、TG、HDL-C、LDL以评估血脂情况,检测所有大鼠血浆CRP、MCP-1、ALT、AST、CREA以及UREA水平以评估肝肾功能。用HE染色法观察电针对ZDF（fa/fa）模型大鼠肝脏、肾脏及胰岛形态学影响并于电镜下观察其超微结构变化。使用RT-PCR及蛋白印迹检测手段,观察电针对ZDF（fa/fa）模型大鼠肝脏、肾脏以及胰岛IKK-I κ B/NF-κ B蛋白与基因的表达水平的影响。免疫荧光双标法分别观察ZDF大鼠肝脏、胰腺的IKK β与IRS-1的蛋白部位及相互关系。用TUNEL检测胰岛β细胞凋亡,评价胰岛素抵抗大鼠β细胞凋亡情况及针刺改善作用。结果:1 ZDF（fa/fa）大鼠模型的评估经过4周的特殊诱导饲料Purina#5C08喂养后,与ZDF（fa/+）大鼠相比,ZDF（fa/fa）大鼠的 FPG、FINS、HOMA-IR 指数、IL-6 及 TNF-α 升高（均P<0.05）。ZDF（fa/fa）大鼠的血糖值在不同时间段的的血糖值均显着高于ZDF（fa/+）大鼠（均P<0.05）,且测试的时间与组别存在交互作用（均P<0.05）。ZDF组在OGTT 2h的血糖值大于11.1。2电针与吡格列酮对大鼠体重的影响与ZDF相比,ZDF+Pi组大鼠体重从干预前到干预结束后均升高（P<0.05）;干预2周后,ZDF+EA组大鼠体重较ZDF+Pi组减少（P<0.05）。到干预的第8周,ZDF+EA组分别与ZDF组、ZDF+Pi组比较,趋势与第5周趋势一致（P<0.05）。control组大鼠体重从干预前到干预结束均明显轻于另外3组（P<0.05）。3电针对ZDF（fa/fa）大鼠胰岛素敏感性与炎症因子水平的影响在干预第8周末,与control组相比,ZDF组、ZDF+EA组大鼠的FPG、FINS、HOMA-IR指数及C-P水平明显降低（P<0.05）,与ZDF组相比,ZDF+Pi组、ZDF+EA组的上述指标也是降低（P<0.05）,且 ZDF+Pi 组优于 ZDF+EA 组（P<0.05）。而 ZDF+Pi 组 control组相比,则无统计学差异（P>0.05）。在降低ZDF（fa/fa）大鼠炎症因子水平方面,与 control 组相比,ZDF 组、ZDF+Pi 组以及 ZDF+EA 组大鼠的 CRP、IL-6、MCP-1 及 TNF-α降低（P<0.05）,而与ZDF组相比较,ZDF+Pi组与ZDF+EA组上述指标的表达水平降低（P<0.05）,且 ZDF+Pi 组低于 ZDF+EA 组（P<0.05）。4电针对ZDF（fa/fa）大鼠血脂的影响干预8周后,与control组比较,ZDF组大鼠的TC、TG以及LDL水平均显着升高（P<0.05）,HDL 水平降低（P<0.05）。与 ZDF 组比较,ZDF+Pi 组和 ZDF+EA 组的 TC、TG水平均降低（P<0.05）,HDL水平升高（P<0.05）,且ZDF+Pi组优于ZDF+EA组（P<0.05）。5电针对ZDF（fa/fa）大鼠肝肾功的影响与control组比较,ZDF组大鼠的ALT、AST、CREA以及UREA水平均升高（P<0.05）。与ZDF组比较,ZDF+Pi组和ZDF+EA组的TC、TG水平均降低（P<0.05）且ZDF+Pi组低于 ZDF+EA 组（P<0.05）。6电针对ZDF（fa/fa）大鼠肝脏组织形态学的影响在高倍数（400倍）光镜下观察肝组织。通过比较ZDF+EA组与ZDF组肝组织的差异,表明电针治疗可改善肝细胞胞浆的脂肪变性,且仅次于吡格列酮。同时,透射电镜示,与ZDF组比较,ZDF+EA组肝细胞线粒体与内质网的损伤明显改善,且仅次于吡格列酮。线粒体呈圆形或哑铃状,分布稀疏,结构清晰,轻度水肿,部分嵴裂。粗面内质网分层包围细胞核和线粒体,表面附着核糖体,未见明显损伤。7电针对ZDF（fa/fa）大鼠肾脏组织形态学的影响在高倍数（400倍）光镜下观察肾组织。通过比较ZDF+EA组与ZDF组肝组织的病理,提示电针治疗可改善肾小管上皮细胞的脂肪变性,且仅次于吡格列酮。同时,透射电镜示,与ZDF组比较,ZDF+EA组肾小管上皮细胞的线粒体与内质网损伤明显改善。线粒体数量较少,呈椭圆形或长条状,中度肿胀,局部空泡化,嵴扩张、断裂、消失;粗面内质网轻度扩张,表面存在核糖体附着;高尔基体少量中度扩张、增生。提示电针在保护线粒体和粗面内质网损伤方面仅次于吡格列酮。8电针对ZDF（fa/fa）大鼠胰岛形态学的影响在高倍（400x）光镜下,观察胰岛组织经过HE染色后的形态学情况,ZDF大鼠胰岛组织中存在低浓度的炎症反应。通过比较ZDF+EA组与ZDF组胰岛的病理该变,ZDF+EA组大鼠胰岛细胞形态、结构较ZDF组有所改善,细胞周围组织虽有少量的淋巴细胞浸润,但胰岛细胞分界清晰,未见明显胰岛细胞的坏死。同时,透射电镜观察各组胰岛β细胞超微结构变化。ZDF+EA组与ZDF+Pi组大鼠胰岛β细胞的线粒体结构均表现为严重肿胀、变大、嵴消失,内腔出现周界不清絮状物。ZDF+EA组大鼠胰岛β细胞粗面内质网（RER）排列整齐,数量丰富、只是轻度的扩张,提示电针和吡格列酮均可能通过降低胰岛组织的炎细胞浸润,且电针主要是通过抑制内质网应激,改善β细胞的内质网功能稳态,而不依赖于线粒体途径。9 电针对ZDF（fa/fa）大鼠肝脏与肾脏NF-κ B p65、I κ B α、IKK β、p-I κ B α、p-NF-κB p65及p-IKKβ蛋白表达水平的影响与control组相比,ZDF组、ZDF+Pi组以及ZDF+EA组大鼠肝脏、肾脏组织中NF-κ B p65、I κ B α、IKK β、p-I κ B α、p-NF-κ B p65 及p-IKK β 的表达增加（P<0.05）,而IRS-1蛋白表达水平降低（P<0.05）。与ZDF组相比,ZDF+EA组与ZDF+Pi组的NF-κ B p65、I κ B α、IKK β、p-I κ B α、p-NF-κ B p65 p-IKK β 的蛋白表达量降低（P<0.05）,ZDF+Pi组与ZDF+EA组相比也有统计学意义（P<0.05）。10电针对ZDF（fa/fa）大鼠胰岛p-NF-κ B p65、p-Iκ B α及p-IKK β蛋白表达水平的影响与control组相比,ZDF组、ZDF+Pi组以及ZDF+EA组大鼠胰岛组织中p-NF-κ B p65、p-I κ B α及p-IKK β蛋白的表达增加（P<0.05）。与ZDF组相比,ZDF+EA组与ZDF+Pi组的p-NF-K B p65、p-Iκ B α及p-IKK β蛋白的表达量降低（P<0.05）,且ZDF+Pi组低于ZDF+EA组（P<0.05）。11电针对ZDF（fa/fa）大鼠肝脏、肾脏以及胰腺NF-κ B p65、IKKβ及IκBα基因表达的影响与control组相比,ZDF组、ZDF+Pi组以及ZDF+EA组大鼠NF-κB p65 mRNA、IκBα mRNA、IKKβ mRNA的表达增加（P<0.05）。与ZDF组相比,ZDF+EA组与ZDF+Pi组的 NF-κB p65 mRNA、Iκ B α mRNA及IKKβ mRNA的表达量降低（P<0.05）,且ZDF+Pi组低于ZDF+EA组（P<0.05）。12免疫荧光双标法分别观察ZDF大鼠肝脏、胰腺的IKK β与IRS-1的蛋白部位及相互关系在高倍镜（400x）下观察到IKKβ和IRS-1蛋白在肝脏、胰腺都有表达,且多为核表达。在部分细胞内存在IKKβ和IRS-1共定位,其共定位在细胞核。control组和ZDF+EA组IRS-1的细胞个数多于IKK β,而ZDF组IRS-1的细胞个数则明显少于IKK β。从IRS-1/IKK β的比值来看,control组和ZDF+EA组大于1,且control组表达差异更为明显,而ZDF组和ZDF+Pi组比值小于1,且ZDF组表达差异更小。13 电针对ZDF（fa/fa）大鼠胰岛β细胞凋亡的影响control组无明显凋亡的胰岛β细胞,细胞核染色质形态正常,核呈均匀蓝色。而ZDF组、ZDF+EA组以及ZDF+Pi组,在荧光显微镜下仅仅可见零星、少量的胰岛β细胞凋亡改变,细胞核染色质浓缩,核呈绿色。三组胰岛β细胞凋亡比例无统计学差异,不具有统计学意义（P>0.05）。结论:本研究发现电针可抑制ZDF（fa/fa）大鼠肝、肾以及胰岛IKK β-Iκ B α/NF-κ B p65信号通路的激活,提高胰岛素底物IRS-1的活性,从而改善ZDF（fa/fa）大鼠的胰岛素抵抗,减轻炎症反应,保护其肝肾功能。其中IKK β可能是电针干预胰岛素抵抗的潜在靶点。这为电针在糖尿病、肥胖以及心血管疾病等胰岛素抵抗相关疾病中的广泛应用提供了有利的证据。
付海超[7]（2021）在《穿山龙薯蓣皂苷对1型糖尿病小鼠胰腺中PDX-1mRNA及Fas蛋白表达的影响》文中研究指明目的:探讨穿山龙薯蓣皂苷对1型糖尿病小鼠胰腺组织中PDX-1mRNA及Fas蛋白表达的影响,以进一步阐释薯蓣皂苷对1型糖尿病小鼠胰岛β细胞的抗凋亡作用及其机制,为中药穿山龙提取物薯蓣皂苷保护胰岛β细胞,改善胰岛功能提供理论依据。材料与方法:选取89只SPF级雄性C57BL/6小鼠,6-8周龄,SPF级动物饲养室正常适应性喂养1周。用随机法选取12只为正常对照组,其余77只小鼠用以造模,禁食12小时后,向小鼠腹腔内注射调配好、低温保存的浓度为1%的STZ溶液（PH=4.2）,注射剂量为50mg/kg,连续5日重复注射,以此来诱发小鼠成为1型糖尿病模型,应用血糖仪于最后一次STZ腹腔注射的72小时后测定小鼠尾静脉的血糖数值,血糖大于16.7mmol/L者视为实验造模成功,将造模成功的小鼠随机分成4组,分别命名为模型组、薯蓣皂苷低剂量组、薯蓣皂苷高剂量组和强的松组。模型组和治疗组均从造模成功后开始灌胃,每日给药1次,直至第12周实验结束,期间观察小鼠的一般状态、血糖、体重情况。运用PCR检测小鼠胰腺中PDX-1mRNA的表达水平,WB技术检测小鼠胰腺中Fas蛋白的表达情况。整个实验期间全部小鼠予普通小鼠生长繁殖饲料喂养,自由活动、进食及饮水。结果:1.模型组小鼠精神状态较差,毛色黯淡无光,身材瘦小,反应迟缓,出现进食、饮水量上升,多尿。给药组小鼠也出现上述症状,但较模型组症状轻,体重较模型组重。2.与正常对照组相比,模型组小鼠血糖水平都有显着升高（P<0.01）;给药第4周开始,薯蓣皂苷治疗组小鼠血糖与模型组相比均出现明显下降（P<0.01）,强的松组与模型组相比无统计学意义。3.造模后4周,与正常对照组小鼠相比,模型组、薯蓣皂苷低剂量组、薯蓣皂苷高剂量组、强的松组小鼠的体重均明显下降（P<0.01）;从8周开始到12周后,高剂量治疗组小鼠的体重水平与模型组相比出现一定的上升（P<0.01）。4.与正常对照组小鼠相比,模型组PDX-1mRNA表达显着降低（P<0.01）;与模型组相比,各治疗组小鼠胰腺中PDX-1mRNA表达有均有明显升高（P<0.01）。5.与正常对照组小鼠相比,模型组小鼠胰腺中Fas蛋白表达显着增加（P<0.01）;与模型组相比,各治疗组小鼠胰腺中Fas蛋白表达量均有下降（P<0.01）,薯蓣皂苷高剂量组小鼠胰中Fas蛋白表达明显降低（P<0.01）。结论:穿山龙薯蓣皂苷能改善1型糖尿病小鼠的精神行为状态,增加小鼠体重,降低血糖,同时可升高小鼠胰腺组织中PDX-1mRNA的表达水平,下调Fas蛋白的表达水平,进而抑制胰岛β细胞凋亡,保护胰岛β细胞功能,减缓糖尿病症状。
张晓宇[8]（2021）在《穿山龙提取物薯蓣皂苷对1型糖尿病小鼠胰腺中Bcl-2/Bax蛋白表达的影响》文中研究表明目的:运用网络药理学的研究方法通过对于中药穿山龙中的活性成分、作用靶点、信号通路进行筛选预测,探究中药穿山龙活性成分对于1型糖尿病的潜在作用机制,为今后的动物学实验奠定理论基础;通过网络药理学预测结果,选定中药穿山龙中的主要成分薯蓣皂苷进行动物实验,深入研究中药穿山龙提取物薯蓣皂苷对于1型糖尿病小鼠胰腺中细胞凋亡相关的Bcl-2、Bax蛋白表达影响,以进一步证实中药穿山龙提取物薯蓣皂苷对于1型糖尿病小鼠胰腺具有保护作用,为中医药防治1型糖尿病提供新的治疗思路。材料与方法:1.网络药理学:通过数据库检索、文献收集参考,整理出中药穿山龙中含有的主要化学成分信息,依据Lipinski类药性的5倍率原则,结合国内外文献资料,筛选出中药穿山龙的有效活性成分。利用Swiss数据库预测出中药穿山龙中潜在活性成分的作用靶点。使用OMIM、Genecards数据库获得疾病作用靶点。使用Venny2.1在线软件作图工具平台绘制韦恩图,获得药物-疾病共同靶点;使用Cytoscape软件,构建“药物-成分-靶点-疾病”网络图;使用String10.5数据库和Cytoscape软件绘制PPI蛋白相互作用网络图,基于PPI蛋白相互作用网络图进行拓扑分析、聚类分析;基于R软件使用Bioconductor生物信息软件对获得的靶点蛋白进行GO生物过程、细胞组分富集分析、KEGG信号通路富集分析。2.动物实验:选取SPF级成年雄性C57BL/6小鼠89只,进行12h的循环光照,自由获取食物和水,7天内对小鼠进行正常的喂养适应,随机地从中选取出12只小鼠作为正常对照组,全部小鼠采用普通饲料进行正常喂养,对剩余的小鼠进行12小时的彻底禁食后,连续5天对剩余小鼠进行腹腔注射,注射物为1%的链脲佐菌素50mg/kg（PH值为4.2）,采血针取小鼠尾静脉血,进行血糖测定,数值>16.7mmol/L者判定为诱发1型糖尿病模型成功。成模后将剩余小鼠进行随机分组,分别标注为1型糖尿病模型组、低剂量薯蓣皂苷组、高剂量薯蓣皂苷组、强的松组。观察治疗前0w、治疗后4w、8w、12w各组小鼠的一般状况（包括毛色、精神状态、行为学特征等）、血糖,观察造模前0w’、治疗后4w、8w、12w。在治疗12w末处死各组小鼠,取其胰腺组织备用。通过蛋白印迹法（Western Blot,WB）对各组小鼠胰腺组织中Bcl-2、Bax蛋白表达水平进行检测。结果:1.穿山龙中共16个活性成分可通过参与细胞凋亡、免疫、氧化应激等过程来发挥治疗T1DM的作用。2.薯蓣皂苷可上调T1DM小鼠胰腺中抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达,下调T1DM小鼠胰腺中促凋亡蛋白Bax的蛋白表达,改善T1DM小鼠胰腺中细胞凋亡情况,从而对T1DM小鼠胰岛β细胞有保护的作用。结论:1.Bcl-2/Bax信号通路是T1DM小鼠胰岛β细胞凋亡的通路之一。2.薯蓣皂苷可能通过上调Bcl-2蛋白水平,下调Bax蛋白水平,来改善T1DM小鼠的胰腺细胞凋亡情况,起到保护T1DM小鼠胰岛β细胞的作用。
李瑜[9]（2021）在《内源性逆转录病毒Gag单克隆抗体制备及检测》文中指出1型糖尿病（Type 1 Diabetes,T1D）是一种好发于儿童和青少年时期的自身免疫性疾病,以胰岛β细胞永久性破坏为特征。目前对于触发T1D发生的自身抗原尚不清楚,尽管可用识别胰岛细胞抗原的抗体来协助T1D诊断,但针对这些抗原进行的免疫耐受治疗并未在临床上取得很好的疗效。为做好T1D的早期诊断,我们需要去寻找诱发T1D的自身免疫反应的始动抗原,进一步去探索T1D发生和胰岛损伤的病理机制,供于T1D的预防、早期诊断和确诊。内源性逆转录病毒（Endogenous retrovirus,ERV）是已整合到基因组的古老逆转病毒的残留物,包含Gag和Env。逆转录病毒元件可能作为新抗原使细胞致敏,从而触发自身免疫反应。课题组前期研究发现:来自于NOD小鼠胰岛的间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）可以释放高度免疫刺激的微泡（Microvesicles,MVs）或外泌体（Exosomes,EXOs）能够诱导自身反应性的B细胞和T细胞。重要的是,EXOs表达ERV Gag抗原。通过构建敲除Gag蛋白(GagKD)的EXOs,发现Gag是激活自身反应性T细胞的核心抗原。因此,Gag抗原很有可能是一种新的自身抗原。非肥胖型糖尿病小鼠（Non-obese diabetic mice,NOD）是一种能自发T1D的模型鼠,发病过程和病理变化与人患T1D过程相似,是T1D研究的重要模型鼠。通过对幼年NOD小鼠、发病前期NOD小鼠胰腺染色观察Gag抗原在胰岛中的表达,找寻Gag抗原与T1D发病的联系。主要得到以下结果:1)分析从NOD雌性小鼠胰岛中克隆出的命名为Gag 194的氨基酸序列,选取了Gag 194 193’-vsrlrgrrdppavdstts-210’多肽为靶点制备ERV Gag单克隆抗体;2)通过KLH偶联Gag多肽免疫小鼠,我们得到了5株单克隆抗体,分别是1F4C8、2D4C6、3C3B9、4D6B3、5F9E4,其抗体亚型均为Ig G2b;3)通过ELISA和蛋白质印迹实验（Western Blot,WB）检测抗体效价和特异性,我们观察到制备的5株单克隆抗体在特异性、敏感性和抗原谱上存在一定的差异。最后,我们选取了3株单克隆抗体（1F4C8、2D4C6、5F9E4）进行生物素化标记;4)通过免疫组织化学实验观察Gag抗原在NOD小鼠和T1D抗性的C57BL/6小鼠胰腺胰岛中的表达情况及与疾病发生的联系。我们使用幼年NOD小鼠、成年NOD小鼠、幼年C57BL/6、成年C57BL/6胰腺冰冻切片进行组织染色。观察到,3株单克隆抗体均能识别表达在NOD小鼠胰岛的Gag抗原,抗原的表达与NOD小鼠的年龄无关,而C57BL/6小鼠胰岛不表达Gag蛋白。另外,Gag抗原在胰岛中的分布多在β细胞区域,而浸润胰岛的淋巴细胞很明显并不表达该抗原。因此NOD小鼠胰腺表达ERV Gag抗原可能受其特异的基因型控制,并且在幼年时期就已经开始表达。以上结果为将来进一步研究Gag蛋白是否是始动抗原诱发自身免疫反应以及如何诱发自身免疫反应提供了新思路,制备的单克隆抗体为T1D的基础研究提供了至关重要的工具。
贾佳[10]（2021）在《芪葵颗粒调节1型糖尿病Th17/Treg平衡的实验研究及T1DM临床证型的横断面分析》文中研究表明目的1.进行芪葵颗粒诱导的imDC干预初始T细胞的1型糖尿病（T1DM）相关NOD小鼠的体内实验,阐明芪葵颗粒通过诱导生成imDC（1）促使T细胞向Treg分化,上调抑炎因子IL-10分泌,减轻炎症反应,恢复Th17/Treg平衡;（2）导致T细胞克隆无能,无法分泌IL-2,从而建立免疫耐受,是其发挥预防和减轻T1DM的作用途径和有效机制。芪葵颗粒调节免疫作用机制的阐明,为芪葵颗粒的临床应用提供客观依据,予以中医治未病理论运用于T1DM预防科学支持。2.通过临床研究,观察T1DM患者中医证候特点,探讨T1DM患者各中医证型与血糖控制水平及并发症的相关性。3.根据临床研究,分析T1DM患者免疫、炎症指标的变化特征。方法1实验研究成熟的树突状细胞其抗原提呈功能增强,破坏T细胞分化导致破免疫耐受失衡,引起胰岛β细胞自身免疫性炎症,是T1DM致病的重要机制。本研究基于NOD小鼠T1DM的发病过程,采用芪葵颗粒干预NOD小鼠胰岛炎及T1DM模型,观察芪葵颗粒对T细胞免疫耐受的影响。检测芪葵颗粒对NOD小鼠和NOD小鼠T1DM血糖、发病的影响、调控DC细胞成熟、调节Th17/Treg的能力及调节IL-10、IL-17的能力。探讨芪葵颗粒通过形成未成熟树突状细胞,促进Th17/Treg恢复平衡及导致T细胞克隆无能,诱导免疫耐受,从而发挥预防和治疗1型糖尿病的作用机制。2临床研究2.1回顾性分析2012年1月～2019年12月在南京中医药大学附属医院内分泌科住院治疗的1型糖尿病患者,分析患者的临床资料、理化指标、急慢性并发症等,并依据国家中医药管理局印发的“消渴病（2型糖尿病）中医诊疗方案（2017年版）”、中华中医药学会《糖尿病中医防治指指南》（2007年）和“国家中医药管理局‘十一五’重点专科协作组消渴病（2型糖尿病）诊疗方案”,对所收集的T1DM患者进行中医辨证,应用SPSS统计软件,分析T1DM患者中医证型与西医理化指标、并发症的相关性,总结T1DM中医证型分布的临床意义和证型发展的规律。2.2选取2015年1月～2019年12月在南京中医药大学附属医院内分泌科住院治疗的糖尿病患者及门诊随访的健康人群,应用SPSS统计软件,对所收集的T1DM病例检测T细胞亚群、细胞因子十二项、免疫五项,以分析T1DM的免疫异常情况,以利于更好的研究T1DM的免疫发病机制。结果1实验研究1.1芪葵颗粒给药可干扰NOD小鼠糖尿病发病,降低作用机制可能与保护胰岛C-肽功能有关。1.2芪葵颗粒能够减轻T1DM小鼠症状,保护胰岛C-肽功能。1.3芪葵颗粒能够抑制NOD小鼠及T1DM小鼠模型中DC细胞成熟,减少成熟DC细胞数量,提高DC细胞抗原提取的能力、DC刺激T细胞增殖能力,降低IL-2和IL-12的表达水平。1.4芪葵颗粒能够增加NOD小鼠及T1DM小鼠模型中Treg/Th17比率,升高Foxp3表达水平。1.5芪葵颗粒能够减轻NOD小鼠及T1DM小鼠模型中炎症,降低IL-17表达水平,升高IL-10表达水平。2 临床研究2.1 T1DM患者主证中气阴两虚证患者最多（88.76%）,阴虚火旺证者次之（11.33%）,阴阳两虚证所占比例最低（1.18%）,兼证分布血瘀证最多,痰湿证其次。T1DM主证、兼证与T1DM年龄、BMI、病程、FBG、PBG、HbA1c及急性并发症并无明显统计学差异（P>0.05）。慢性并发症方面,阴虚火旺证的糖尿病肾病发生率明显高于其他各组（P<0.05）。比较其余各组中医证型的DPN、DR、动脉粥样硬化、冠心病、脑梗的发生率,差异均无统计学意义（P>0.05）。2.2 T1DM患者的IL-10、IFN-y、IL-8、IL-12P70、TNF-α低于2型糖尿病患者及正常人群（P<0.05）;T1DM患者较正常人群相比,免疫功能降低（P<0.05）。结论1.动物实验证实芪葵颗粒能够抑制DC成熟,释放抑炎细胞因子IL-10,上调表达Foxp3,促进Treg细胞生成,负性调控Th17细胞的生成和分化,调节Th17/Treg细胞平衡,并致T细胞克隆无能,从而诱导免疫耐受。这条路径可能是芪葵颗粒防治T1DM的作用机制。2.临床观察发现T1DM中医辨证分型与糖尿病肾病发生相关,与其他理化指标及并发症的相关性不大。3.临床研究提示T1DM患者存在免疫异常,与正常人相比明显免疫力减低。
二、利用非胰岛细胞进行1型糖尿病基因治疗的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、利用非胰岛细胞进行1型糖尿病基因治疗的研究进展（论文提纲范文）
（3）SETD4调控的静息β细胞的功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词和术语表 |
| 第一章:绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 胰腺的结构与功能 |
| 1.1.2 内分泌胰腺的损伤与再生 |
| 1.1.3 Pdx1 的研究概况 |
| 1.1.4 细胞静息研究概况 |
| 1.1.5 Setd4 研究概况 |
| 1.2 研究目的与意义 |
| 第二章:Setd4 在成年小鼠胰岛中的表达特征分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 荧光报告与谱系示踪转基因小鼠的构建 |
| 2.3.2 转基因小鼠的基因型鉴定 |
| 2.3.3 泰莫西芬的诱导 |
| 2.3.4 小鼠取材 |
| 2.3.5 冷冻切片与免疫荧光 |
| 2.3.6 图像处理与数据统计分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 Setd4 谱系小鼠的鉴定 |
| 2.4.2 Setd4 蛋白在成体胰岛中的表达分布分析 |
| 2.4.3 β细胞中Setd4 阳性细胞的增殖能力分析 |
| 2.5 小结与讨论 |
| 第三章:Setd4 调控β细胞静息研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 条件性敲除SETD4 转基因小鼠的构建 |
| 3.3.2 转基因小鼠的基因型鉴定 |
| 3.3.3 小鼠胰岛的分离与纯化 |
| 3.3.4 条件性敲除小鼠的Cre重组酶作用效率检测 |
| 3.3.5 泰莫西芬的诱导 |
| 3.3.6 小鼠胰岛总RNA抽提 |
| 3.3.7 cDNA合成 |
| 3.3.8 荧光定量PCR(qPCR) |
| 3.3.9 冷冻切片与免疫荧光 |
| 3.3.10 图像处理与数据统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 SETD4 条件性敲除小鼠的鉴定 |
| 3.4.2 SETD4 条件性敲除小鼠敲除效率检测 |
| 3.4.3 基于Pdx1 驱动的SETD4 基因敲除后促进Pdx1 阳性细胞的增殖 |
| 3.5 小结与讨论 |
| 第四章:1 型糖尿病中Setd4 细胞的特征分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 构建T1D小鼠模型 |
| 4.3.2 泰莫西芬的诱导 |
| 4.3.3 冷冻切片与免疫荧光 |
| 4.3.4 小鼠血糖检测 |
| 4.3.5 图像处理与数据统计分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 Setd4 细胞通过维持静息抵抗1 型糖尿病的损伤 |
| 4.5 小结与讨论 |
| 第五章:1 型糖尿病中静息β细胞敲除SETD4 后的作用和功能分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 实验试剂 |
| 5.2.3 实验仪器 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 构建T1D小鼠模型 |
| 5.3.2 泰莫西芬的诱导 |
| 5.3.3 包埋切片与免疫荧光 |
| 5.3.4 小鼠血糖检测 |
| 5.3.5 小鼠血浆胰岛素浓度检测 |
| 5.3.6 苏木精-伊红染色(HE Staining) |
| 5.3.7 图像处理与数据统计分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 SETD4 敲除后对T1D小鼠血糖体重及胰岛素的影响 |
| 5.4.2 SETD4 敲除后对T1D小鼠胰岛组织形态的影响 |
| 5.4.3 SETD4 敲除后T1D小鼠增殖的Pdx1 阳性细胞数量显着上升 |
| 5.4.4 SETD4 敲除后T1D小鼠中胰岛素表达细胞的数量变化 |
| 5.5 小结与讨论 |
| 第六章:抑制1 型糖尿病免疫反应静息β细胞SETD4 敲除后的作用和功能分析 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.2.1 实验动物 |
| 6.2.2 实验试剂 |
| 6.2.3 实验仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 构建T1D小鼠模型 |
| 6.3.2 泰莫西芬的诱导 |
| 6.3.3 GAD65 质粒构建 |
| 6.3.4 GAD65 质粒的转染 |
| 6.3.5 GAD65 治疗 |
| 6.3.6 荧光定量PCR |
| 6.3.7 包埋切片与免疫荧光 |
| 6.3.8 小鼠血糖检测 |
| 6.3.9 小鼠血浆胰岛素浓度检测 |
| 6.3.10 苏木精-伊红染色(HE Staining) |
| 6.3.11 图像处理与数据统计分析 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 GAD65 基因疫苗的制备 |
| 6.4.2 SETD4 敲除联合GAD65 治疗对T1D小鼠血糖体重及胰岛素的影响 |
| 6.4.3 SETD4 敲除联合GAD65 治疗后对T1D小鼠胰岛组织形态的影响 |
| 6.4.4 SETD4 敲除联合GAD65 治疗后T1D小鼠增殖的Pdx1 阳性细胞数量显着上升 |
| 6.4.5 SETD4 敲除联合GAD65 治疗后T1D小鼠中胰岛素表达细胞显着升高 |
| 6.5 小结与讨论 |
| 第七章:结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 论文所用引物 |
| 附录二 常用试剂 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
（4）1型糖尿病患者免疫细胞表面SLAMF分子异常表达与机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.2 课题的假设与提出 |
| 第2章 文献综述 |
| 2.1 1型糖尿病免疫系统异常概述 |
| 2.1.1 适应性免疫系统与1型糖尿病 |
| 2.1.2 先天性免疫系统与1型糖尿病 |
| 2.1.3 免疫治疗在1型糖尿病中的应用 |
| 2.2 SLAM分子家族在免疫系统异常疾病中的表达 |
| 2.2.1 SLAM分子家族概述 |
| 2.2.2 SLAM分子家族在多种疾病中异常表达 |
| 2.3 SLAMF4(CD244)研究现状综述 |
| 2.3.1 SLAMF4(CD244)的结构与功能 |
| 2.3.2 SLAMF4(CD244)的异常表达与疾病 |
| 2.3.3 SLAMF4(CD244)的应用前景与展望 |
| 第3章 T1DM患者免疫系统变化及SLAM分子家族表达 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 人外周血来源 |
| 3.2.2 材料和试剂 |
| 3.2.3 仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 研究对象入组及排除标准 |
| 3.3.2 生化的测定 |
| 3.3.3 密度梯度离心法分离PBMC |
| 3.3.4 细胞外标志物染色 |
| 3.3.5 细胞内Foxp3 染色 |
| 3.3.6 统计分析 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 T1DM患者及HCs基线指标及生化检测结果 |
| 3.4.2 T1DM患者及HCs外周血PBMC中T细胞表达 |
| 3.4.3 T1DM患者及HCs外周血PBMC中B细胞表达 |
| 3.4.4 T1DM患者及HCs外周血PBMC中NK细胞表达 |
| 3.4.5 T1DM患者及HCs外周血PBMC中髓系细胞表达 |
| 3.4.6 各免疫细胞表面SLAM分子家族表达 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 T1DM患者T细胞表面SLAMF4 分子表达 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 人外周血来源 |
| 4.2.2 材料和试剂 |
| 4.2.3 仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 研究对象入组及排除标准 |
| 4.3.2 生化及一般临床资料的测定 |
| 4.3.3 密度梯度离心法分离PBMC |
| 4.3.4 细胞外标志物染色 |
| 4.3.5 细胞内IFN-γ/TNF-a染色 |
| 4.3.6 统计分析 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 T1DM患者及HCs外周血T细胞SLAMF4分子表达 |
| 4.4.2 T1DM患者及HCs外周血T细胞亚群SLAMF4分子表达 |
| 4.4.3 SLAMF4分子表达与细胞活化的状态有关 |
| 4.4.4 T1DM患者外周血SLAMF4分子表达与一般临床资料相关性 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 NOD小鼠免疫细胞分化及SLAMF4分子表达 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料和动物 |
| 5.2.1 材料和试剂 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.2.3 实验动物 |
| 5.2.4 垫料与饲料 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 NOD小鼠体重及一般情况 |
| 5.3.2 NOD小鼠血糖的测量 |
| 5.3.3 检测小鼠外周血免疫细胞分化及血清分离 |
| 5.3.4 胰腺淋巴结单细胞悬液制备 |
| 5.3.5 小鼠尾静脉采血及血清分离 |
| 5.3.6 密度梯度离心法分离小鼠外周血单个核细胞 |
| 5.3.7 细胞外标志物染色 |
| 5.3.8 苏木精-伊红(hematoxylin and eosin stain,HE)染色 |
| 5.3.9 统计分析 |
| 5.4 结果 |
| 5.4.1 NOD小鼠1型糖尿病发病情况 |
| 5.4.2 NOD小鼠外周血T细胞亚群分布异常 |
| 5.4.3 NOD小鼠T细胞表面SLAMF4分子异常表达 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第6章 SLAMF4调控CD8~+T细胞的增殖与凋亡 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.2.1 人脐带血来源 |
| 6.2.2 正常人外周血来源 |
| 6.2.3 T1DM患者外周血来源 |
| 6.2.4 材料与试剂 |
| 6.2.5 仪器 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 密度梯度离心法分离脐带血单个核细胞 |
| 6.3.2 磁珠分选脐带血CD8~+T细胞 |
| 6.3.3 体外培养脐带血来源的CD8~+T细胞 |
| 6.3.4 流式分选T1DM患者SLAMF4~+及SLAMF4~-CD8+T细胞转录组测序 |
| 6.3.5 磁珠分选正常人外周血来源的CD8~+T细胞 |
| 6.3.6 流式分选正常人SLAMF4~+CD8+T细胞及SLAMF4~-CD8+T细胞 |
| 6.3.7 细胞凋亡检测 |
| 6.3.8 细胞增殖检测 |
| 6.3.9 统计分析 |
| 6.4 结果 |
| 6.4.1 体外培养脐带血来源CD8~+T细胞SLAMF4表达情况 |
| 6.4.2 T1DM患者SLAMF4~+及SLAMF4~-CD8+T细胞的RNA测序 |
| 6.4.3 SLAMF4与CD8+T细胞凋亡 |
| 6.4.4 SLAMF4与CD8+T细胞增殖 |
| 6.5 讨论 |
| 6.6 小结 |
| 第7章 T1DM免疫损伤机理及SLAMF分子异常表达的思考 |
| 第8章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在读期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（5）PDA-PLGA水凝胶生物支架装载脂肪间充质干细胞诱导胰岛β细胞对糖尿病的治疗作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 糖尿病的研究现状 |
| 1.1.1 糖尿病的分类 |
| 1.1.2 糖尿病治疗研究现状 |
| 1.2 胰岛细胞移植治疗的研究进展 |
| 1.2.1 供体细胞的来源 |
| 1.2.2 移植部位的选择 |
| 1.2.3 移植方式的选择 |
| 1.3 海藻酸钠水凝胶在移植领域的研究进展 |
| 1.3.1 海藻酸钠水凝胶的性质 |
| 1.3.2 海藻酸钠水凝胶的制备 |
| 1.3.3 海藻酸钠水凝胶在移植领域的应用 |
| 第2章 实验部分 |
| 2.1 PDA-PLGA水凝胶生物支架的制备及应用 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.3 实验结果 |
| 实验小结 |
| 2.2 大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)向胰岛细胞分化体系的建立 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.3 实验结果 |
| 实验小结 |
| 2.3 PDA-PLGA水凝胶生物支架装载脂肪间充质干细胞诱导胰岛细胞移植治疗的应用研究 |
| 2.3.1 实验材料 |
| 2.3.2 实验方法 |
| 2.3.3 实验结果 |
| 实验小结 |
| 第3章 讨论 |
| 第4章 实验结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（6）电针通过抑制IKK/NF-κB通路改善ZDF大鼠胰岛素抵抗的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 第一节 胰岛素抵抗的现代研究进展 |
| 一、现代医学对胰岛素抵抗的认识历程 |
| 二、胰岛素抵抗的病因学概要 |
| 第二节 胰岛素抵抗的发病机制与治疗 |
| 一、胰岛素抵抗的主要发病机制研究 |
| 二、胰岛素抵抗的治疗 |
| 第三节 自发性糖尿病模型大鼠 |
| 一、自发性模型 |
| 二、评价方法 |
| 第四节 胰岛素抵抗的中医理法研究 |
| 一、中医气血观下的胰岛素抵抗 |
| 二、中医阴阳观下的胰岛素抵抗 |
| 三、五行脾土与胰岛素抵抗 |
| 四、从命门学说探讨糖尿病并发症 |
| 五、从“针足阳明,使经不传则愈”探讨针刺逆转脾瘅传变 |
| 六、小结 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一节 电针对ZDF (fa/fa)大鼠体重、空腹血糖、FINS、C-P、HOMA-IR指数、炎症指标以及血脂四项的影响 |
| 一、材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、统计学处理 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 第二节 电针对ZDF (fa/fa)大鼠肝、肾及胰岛形态学与超微结构的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三节 电针对ZDF大鼠肝脏、肾脏以及胰岛IKK β-I κ B α/NF-κ B p65蛋白与基因表达的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第四节 免疫荧光双标法分别观察ZDF大鼠肝脏、胰腺的IKK β与IRS-1的蛋白部位及相互关系 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第五节 电针对ZDF (fa/fa)大鼠胰岛β细胞凋亡的影响 |
| 一、实验材料 |
| 二、石蜡切片荧光tunel实验方法 |
| 三、TUNEL法检测ZDF大鼠胰岛β细胞凋亡 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文与参与课题情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（7）穿山龙薯蓣皂苷对1型糖尿病小鼠胰腺中PDX-1mRNA及Fas蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略语表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 1型糖尿病的中西医研究进展概述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（8）穿山龙提取物薯蓣皂苷对1型糖尿病小鼠胰腺中Bcl-2/Bax蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 1型糖尿病中胰岛β细胞细胞死亡方式与中医治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（9）内源性逆转录病毒Gag单克隆抗体制备及检测（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 1 型糖尿病 |
| 1.1.1 1型糖尿病的流行病学 |
| 1.1.2 1型糖尿病的发病过程及临床特点 |
| 1.1.3 1型糖尿病的免疫学研究 |
| 1.1.4 自身抗原的确定和自身抗体的早期诊断对1型糖尿病患者的重要性 |
| 1.2 1 型糖尿病与内源性逆转录病毒 |
| 1.2.1 内源性逆转录病毒 |
| 1.2.2 1型糖尿病与内源性逆转录病毒的联系 |
| 1.3 单克隆抗体与抗体工程 |
| 1.3.1 基因工程抗体与抗体工程 |
| 1.3.2 单克隆抗体的工业化生产 |
| 1.4 单克隆抗体的应用 |
| 1.4.1 单克隆抗体在生物化工中的应用 |
| 1.4.2 单克隆抗体在医学中的应用 |
| 1.5 研究目的 |
| 第二章 内源性逆转录病毒Gag单克隆抗体的制备 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与试剂 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 实验试剂与试剂盒 |
| 2.2.4 溶液的配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 ERV Gag 194抗原表位预测 |
| 2.3.2 偶联抗原肽 |
| 2.3.3 小鼠免疫 |
| 2.3.4 ELISA效价检测 |
| 2.3.5 融合 |
| 2.3.6 筛选 |
| 2.3.7 杂交瘤细胞的亚克隆 |
| 2.3.8 单克隆抗体的生产及纯化 |
| 2.3.9 单克隆抗体亚型鉴定 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 内源性逆转录病毒Gag 194氨基酸序列 |
| 2.4.2 内源性逆转录病毒Gag蛋白结构分析和抗原多肽设计 |
| 2.4.3 第三次加强免疫小鼠血清ELISA效价检测结果 |
| 2.4.4 融合复筛结果 |
| 2.4.5 抗体效价检测结果 |
| 2.4.6 抗体亚型鉴定结果 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 Gag单克隆抗体的鉴定 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与试剂 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 实验试剂及试剂盒 |
| 3.2.4 溶液的配制 |
| 3.3 实验步骤 |
| 3.3.1 ELISA检测 |
| 3.3.2 细胞实验 |
| 3.3.3 蛋白质印迹实验(Western blot) |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 ELISA检测结果 |
| 3.4.2 蛋白质印迹实验(WB)结果 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 内源性逆转录病毒Gag抗原在NOD小鼠胰腺中的表达 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与试剂 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 实验试剂及试剂盒 |
| 4.2.4 溶液的配制 |
| 4.3 实验步骤 |
| 4.3.1 免疫组织化学实验 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 免疫组织化学实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 第五章 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 英文缩略词表 |
（10）芪葵颗粒调节1型糖尿病Th17/Treg平衡的实验研究及T1DM临床证型的横断面分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词 |
| 第一部分 实验研究:基于imDC诱导T细胞耐受研究芪葵颗粒干预T1DM的作用机制 |
| 引言 |
| 实验一: 观察芪葵颗粒对NOD小鼠的影胰岛炎的影响 |
| 1 实验目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验分组 |
| 4 实验方法 |
| 5 统计处理 |
| 6 实验结果 |
| 实验二: 观察芪葵颗粒对NOD小鼠T1DM模型的影响 |
| 1 实验目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验分组 |
| 5 统计处理 |
| 6 实验结果 |
| 讨论 |
| 实验结论 |
| 第二部分 1型糖尿病的证型分布 |
| 1 资料及方法 |
| 2 诊断标准 |
| 3 观察指标及方法 |
| 4 统计分析 |
| 5 结果 |
| 6 讨论 |
| 7 结论 |
| 第三部分 1型糖尿病免疫异常的临床研究 |
| 1 资料及方法 |
| 2 诊断标准 |
| 3 观察指标及方法 |
| 4 统计分析 |
| 5 结果 |
| 6 讨论 |
| 7 结论 |
| 全文总结 |
| 1 本次研究的主要成果 |
| 2 本次研究存在的不足和展望 |
| 综述一 1型糖尿病的发病机制及免疫治疗 |
| 综述二 1型糖尿病中医认识 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
四、利用非胰岛细胞进行1型糖尿病基因治疗的研究进展（论文参考文献）
- [1]人脐带间充质干细胞治疗1型糖尿病的远期疗效观察[J]. 刘叶美,张维,吕爱玲,安民民,季学磊. 中华内分泌代谢杂志, 2021(09)
- [2]中国2型糖尿病防治指南（2020年版）[J]. 中华医学会糖尿病学分会. 国际内分泌代谢杂志, 2021(05)
- [3]SETD4调控的静息β细胞的功能研究[D]. 冯静怡. 浙江大学, 2021(02)
- [4]1型糖尿病患者免疫细胞表面SLAMF分子异常表达与机制研究[D]. 孙琳. 吉林大学, 2021(01)
- [5]PDA-PLGA水凝胶生物支架装载脂肪间充质干细胞诱导胰岛β细胞对糖尿病的治疗作用研究[D]. 李晗嘉. 吉林大学, 2021(01)
- [6]电针通过抑制IKK/NF-κB通路改善ZDF大鼠胰岛素抵抗的机制研究[D]. 张立志. 广州中医药大学, 2021(02)
- [7]穿山龙薯蓣皂苷对1型糖尿病小鼠胰腺中PDX-1mRNA及Fas蛋白表达的影响[D]. 付海超. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [8]穿山龙提取物薯蓣皂苷对1型糖尿病小鼠胰腺中Bcl-2/Bax蛋白表达的影响[D]. 张晓宇. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [9]内源性逆转录病毒Gag单克隆抗体制备及检测[D]. 李瑜. 江汉大学, 2021(01)
- [10]芪葵颗粒调节1型糖尿病Th17/Treg平衡的实验研究及T1DM临床证型的横断面分析[D]. 贾佳. 南京中医药大学, 2021(01)