细胞色素c氧化酶Cu_A结构域蛋白的荧光猝灭

细胞色素c氧化酶Cu_A结构域蛋白的荧光猝灭

一、细胞色素c氧化酶Cu_A 结构域蛋白的荧光猝灭研究(论文文献综述)

戴伟[1](2021)在《双酚S致C57BL/6小鼠雄性生殖毒性的作用及机制研究》文中研究指明

魏娟迪[2](2021)在《亚铜离子荧光探针的合成表征及铜离子缺乏对线粒体功能和神经发育影响的研究》文中提出铜离子有重要的生理作用,作为多种酶的辅酶因子或结构成分,参与机体的生理过程,其中铜离子在能量代谢和神经系统发育中有着重要的作用。铜离子失衡会引起严重的疾病。如铜离子缺乏,会直接影响神经递质和神经肽的合成,以及神经调节和神经系统的发育。线粒体是细胞的“铜池”,铜离子不足还会导致线粒体功能受损,严重时导致能量衰竭,最终导致神经退行性等疾病。其主要原因是铜离子不足,导致线粒体呼吸链上的含铜蛋白酶COX活性降低进而影响线粒体的功能。因此能够灵敏、可视化且非入侵的检测生物体内铜离子的变化有着重要的意义,小分子荧光探针成像具有上述优点。并且,由于细胞内环境的还原性导致铜离子多以Cu+的形式存在,基于此,我们设计了两种Cu+荧光探针,利用其可灵敏检测Cu+的特性,借助激光共聚焦显微镜检测细胞及斑马鱼体内Cu+含量,利用呼吸仪等研究了Cu+缺失对线粒体功能和斑马鱼神经系统发育的影响,主要研究如下:1.以罗丹明为发光团,多聚硫醚为Cu+识别基团,合成荧光探针Mito-OFCu,对其在溶液中的研究表明:探针在7.5的p H缓冲溶液中与Cu+结合达饱和后,最大吸收峰和发射峰为555nm、590nm,荧光量子产率为45%,Cu+响应倍数达11倍。细胞中的研究表明:探针有良好的生物相容性,定位于线粒体,皮尔逊共定位系数高达0.96;可灵敏的检测线粒体中Cu+含量的变化,在细胞中的光稳定性较好,可长时间应用于细胞成像。2.细胞线粒体Cu+缺乏的研究表明:引入外源si RNA沉默Hela细胞线粒体内膜上铜转运蛋白SLC25A3,结合WB技术证明转染有效,利用硅基罗丹明探针Mito-Si RCu检测到转染后线粒体的Cu+含量降低,成功构建了一个线粒体缺铜的细胞模型。且WB证明,Cu+缺乏导致COX的亚基COX1和COX2表达降低。此外,细胞呼吸实验证明,通过转染构造的线粒体缺铜细胞模型其COX的活性降低。3.利用激光共聚焦显微镜和呼吸仪,研究Cu+不足对斑马鱼线粒体功能和神经系统发育的影响。结果表明:铜转运蛋白ATP7A等位基因突变的斑马鱼出现黑色素缺失、脊索弯曲、心包积水等表型改变,利用探针Mito-Si RCu检测到突变斑马鱼全身Cu+缺乏;呼吸实验发现基因突变的斑马鱼其COX活性降低,线粒体功能受损,呼吸减弱。成像表明,全身Cu+缺乏的斑马鱼其脑部和眼部的神经发育会受到明显影响,神经元数量减少,表达范围变小,发生退行性改变。

严俊芳[3](2021)在《电离辐射诱导非小细胞肺癌DNA损伤与线粒体功能紊乱的应答机理研究》文中提出肺癌作为全球第一大癌症,是威胁人类健康的凶险癌症类型。放射治疗作为疗效明确的肺癌治疗手段,被应用于肺癌治疗的各个阶段。放射治疗的辐射效应主要引起核基因组的损伤和细胞质损伤比如线粒体功能紊乱。重离子治癌作为先进的放射治疗手段,因其独特的物理优势,能诱发显着的生物学效应,明显提高肺癌病人的治愈率,但其机理仍不清楚。本文以非小细胞肺癌为研究对象,首先探究了X射线和碳离子以及两者联合博来霉素诱导的复杂DNA损伤的动态应答机制。其次,围绕碳离子单独或协同替加环素诱导线粒体功能紊乱展开研究,并对DNA损伤应答与线粒体功能紊乱的相互作用机制做了初步探究,重点阐述重离子治癌的生物学效应机理,使其治癌优势发挥更大。首先,本文对比X射线发现肺癌细胞对碳离子辐照更加敏感,且碳离子诱导的复杂DSB损伤频率较X射线增加。两种射线联合博来霉素后复杂DSB损伤频率为X射线<X射线联合博来霉素<碳离子<碳离子联合博来霉素。随着损伤频率的增加,识别因子γH2AX和53BP1更难募集到损伤位点,募集出现滞后现象。通过修复蛋白的差异表达分析发现,除X射线辐照外,其余各组非同源末端连接(NHEJ)修复因子Ku70的表达上调,而同源重组(HR)修复因子Rad51表达没有显着性差异,表明复杂DSB损伤修复可能以NHEJ为主。碳离子组和碳离子联合博来霉素组中单链损伤识别蛋白XRCC1的表达均下调,说明DNA单链断裂(SSB)逐渐被修复。下一步,对比抗肿瘤药物替加环素发现碳离子、替加环素及两者联合能够抑制A549和H1299细胞增殖并诱导线粒体功能紊乱,且联合作用诱导的毒性作用和线粒体功能紊乱最显着。线粒体功能紊乱体现在ATP产生降低,线粒体膜电势降低和线粒体Ca2+摄入量增加。在A549细胞中,碳离子、替加环素及两者联合作用诱导细胞凋亡。而在H1299细胞中,碳离子及两者联合作用诱导凋亡和自噬水平增加。在分子水平上,对比于替加环素的应答通路AMPK/mTOR,碳离子及联合作用通过Akt/AMPK/mTOR通路调控线粒体翻译蛋白影响线粒体翻译,从而调控线粒体功能,且P53缺陷株H1299细胞对线粒体翻译抑制敏感。最后,初步探究发现ATM/p53/mTOR信号通路是DNA损伤和线粒体功能紊乱的共同调控通路。ATM抑制增加了A549细胞对碳离子的辐射敏感性,主要表现在ATM抑制能够下调碳离子辐照后DSB修复因子Ku70和γH2AX的表达,降低DNA损伤修复能力,同时增加线粒体对Ca2+的摄取,导致线粒体功能紊乱。另外,抑制ATM能够降低辐照后p53磷酸化水平,增加mTOR的磷酸化。进一步发现p53磷酸化抑制后可通过降低AMPK磷酸化水平和激活Akt,从而上调mTOR活性。以上结果表明ATM不仅参与DSB修复,还可通过p53调控mTOR通路,进而调控线粒体功能。碳离子辐照24小时后,LC3-II/I比值发生下调,caspase-3活性增加,ATM抑制则能够下调LC3-II/I比值。因此,自噬水平的降低和细胞凋亡的增加共同决定了细胞的命运,ATM抑制则加重了这一现象。综上所述,本研究对比了X射线和重离子诱导的DNA损伤识别修复的动态应答过程,同时为重离子诱导线粒体功能紊乱提供了新的见解。最后,探究了DNA损伤修复和线粒体功能紊乱的的共同调控机制,连接了碳离子辐射后细胞核和线粒体的直接的双向信号,为重离子治癌提供了直接的生物学依据。

王建荷[4](2021)在《在呼吸链调节植物细胞死亡及光合过程中植物细胞外ATP生理学作用的研究》文中认为植物线粒体电子传递链作为细胞内的主要能量和代谢的中心。现有研究发现,线粒体电子传递链参与调节细胞死亡和光合作用。细胞外ATP作为信号分子已被证明参与植物多种生理反应过程,并可通过结合细胞膜表面特异性受体激发细胞内Ca2+等二级信号分子。但线粒体电子传递链对植物细胞死亡及光合过程的调节过程中是否细胞外ATP扮演着一定的生物学功能鲜有报道。基于此,本文以烟草悬浮细胞(Nicotiana tabacum L.CV.Bright Yellow-2)和拟南芥(Arabidopsis thaliana)为研究材料,研究了呼吸链抑制诱导植物细胞死亡及抑制光合作用过程中细胞外ATP的生理调控功能。主要发现如下:(1)抗霉素A(Antimycin A,AA)处理可引起烟草悬浮细胞死亡水平的上升,并呈现浓度梯度依赖效应。进一步研究表明,AA可引起细胞内ROS(Reactive oxygen species)水平的上升。外源施加ROS清除剂可有效缓解AA诱导的细胞死亡和细胞ROS水平的上升,表明AA诱导的细胞死亡与ROS产生增加密切相关。AA处理也能引起细胞外ATP水平的显着降低,外源添加适量的外源ATP(20μmol·L-1)可缓解AA引起的细胞外ATP水平降低,其中20μmol·L-1外源ATP的加入也同时显着缓解了AA诱导的细胞死亡和细胞内ROS(主要分布于线粒体中)水平的上升。该结果表明细胞外ATP可以通过减轻线粒体内ROS的产生从而缓解AA诱导的细胞死亡水平上升。本文继而探究了细胞外ATP调节AA诱导的细胞死亡与ROS产生的可能机理。实验发现,AA能降低细胞内Ca2+水平,外源添加20μmol·L-1ATP可缓解AA引起的细胞内Ca2+水平降低。和外源ATP的行为相似,外源施加Ca2+也可缓解AA诱导的细胞死亡和ROS水平上升。且外源添加EGTA(Ethylene glycol tetraacetic acid,Ca2+螯合剂)和La Cl3(Lanthanum chloride,质膜Ca2+通道抑制剂)可消除外源ATP对AA引起的细胞死亡的缓解作用。因此,细胞外ATP对AA诱导的细胞死亡与ROS上升的调节作用依赖于Ca2+信号。(2)以野生型和细胞外ATP受体突变体(dorn1)拟南芥为材料,发现AA导致以上2种拟南芥PSⅡ反应中心的开放比例及PSⅡ光化学运行效率的下降。表明AA可引起植株光化学活性下降。外源添加20μmol·L-1ATP可缓解AA引起的野生型拟南芥光化学活性的下降,而无法缓解AA导致的dorn1拟南芥中光化学活性的下降。当用SHAM(Salicylhydroxamic acid,水杨基氧肟酸)抑制交替呼吸途径后,野生型拟南芥光化学活性显着下降,但dorn1拟南芥叶片的光化学活性未有显着性变化。外源添加20μmol·L-1ATP后只显着缓解了SHAM导致的野生型拟南芥中光化学活性的下降,而对dorn1拟南芥的光化学活性仍无显着性影响。上述结果表明,呼吸链抑制对拟南芥光化学反应的影响可能与细胞外ATP受体蛋白DORN1有关,且细胞外ATP可通过DORN1对呼吸链抑制引起的光化学活性的下降进行调控。

林杉[5](2021)在《肿瘤代谢物乳酸诱导B细胞分化为Breg样细胞的分子机制》文中提出研究背景与目的:调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)是一群具有免疫调节功能的B细胞的统称,近年来的研究发现Breg细胞在自身免疫性疾病、感染、肿瘤等多种疾病参与免疫调节反应。Breg细胞通过多种机制发挥促肿瘤作用,而肿瘤微环境中Breg细胞的分化机制尚不明确。乳酸是肿瘤细胞的代谢产物之一,乳酸影响多种免疫细胞的分化及功能,在肿瘤免疫耐受、免疫逃逸等方面发挥重要作用。而乳酸对B细胞分化及功能影响的研究较少,尚不明确。本课题通过对体外乳酸处理后B细胞免疫表型和功能的变化及其机制的研究,结合小鼠体内LDHA敲低D121细胞肺腺癌模型中B细胞及CD8+T细胞等其他免疫细胞的比率及活性研究,阐释了乳酸诱导B细胞向Breg样细胞分化及促进肿瘤进展的作用及其机制。研究方法:(1)磁珠分选小鼠脾脏B细胞,使用BAFF,BAFF联合乳酸分别培养B细胞2天,流式检测乳酸对B细胞中Bregs相关表型分子表达的影响。磁珠分选小鼠脾脏CD4+和CD8+T细胞,将上述两组B细胞分别与CFSE标记的CD3、CD28刺激的CD4+和CD8+T细胞共培养2-3天,流式评估乳酸处理的B细胞对T细胞增殖的影响。(2)使用BAFF,BAFF联合乳酸分别培养小鼠脾脏B细胞2天,荧光定量PCR检测两组B细胞内IL-10等免疫抑制分子以及PPARα、NADPH氧化酶相关亚基m RNA的表达差异。流式检测两组B细胞内IL-10、TGFβ、PD-L1以及ROS等分子的表达差异。蛋白免疫印迹检测两组B细胞内p40phox和p47phox蛋白表达差异。(3)磁珠分选小鼠脾脏B细胞体外培养2天,分为BAFF,BAFF+乳酸,BAFF+GPR81激动剂,BAFF+乳酸+GPR81抑制剂,BAFF+乳酸+PPARα抑制剂处理组,比较不同处理方法对B细胞免疫抑制功能的影响。此外,在体外乳酸诱导的B细胞与T细胞共培养体系中,分别加入anti-IL-10抗体,anti-TGFβ抗体,anti-PD-L1抗体,iNOS拮抗剂,arg-1拮抗剂或过氧化氢酶,流式评估上述分子对乳酸诱导Breg样细胞免疫调节功能的影响。明确乳酸诱导Breg样细胞免疫抑制功能的分子机制。(4)应用慢病毒CRISPR/cas9技术敲低小鼠肺腺癌细胞系D121细胞内LDHA基因,分别给予B6小鼠接种NC组D121细胞和LDHA KD D121细胞得到肺腺癌小鼠模型。记录两组荷瘤鼠肿瘤大小,绘制肿瘤增长曲线,以此评估LDHA敲低对小鼠肿瘤增长的影响。第20天处死小鼠,流式检测两组荷瘤小鼠脾脏、肿瘤内CD8+INFγ+T细胞、CD8+GrB+T细胞、CD25+CD81+B细胞、IL-10+B细胞、Treg细胞和MDSCs的比例,以及B细胞内ROS表达水平,磁珠分选两组肿瘤内B细胞,荧光定量PCR比较两组B细胞中NADPH氧化酶相关亚基m RNA的表达水平,明确乳酸对Breg样细胞分化的影响及其促进肿瘤增长的机制。(5)流式细胞分析法测定肺癌患者及健康对照组外周血中CD24hiCD38hiB细胞和IL-10+B细胞的比例,磁珠分选健康人外周血中T和B细胞,乳酸培养B细胞2天,B细胞与CFSE标记的CD3、CD28刺激的T细胞共培养3-5天,流式评估乳酸对B细胞IL-10、ROS及CD24、CD38表达的影响,流式评估乳酸诱导的Breg样细胞对T细胞增殖的影响。通过免疫荧光染色明确肺腺癌组织及癌旁组织内LDHA与ROS+CD19+B细胞的共定位关系,明确乳酸对表达ROS的Breg样细胞分化的影响。研究结果:(1)乳酸上调小鼠B细胞CD25和CD81的表达,使B细胞具有Breg样表型。(2)乳酸诱导的Breg样细胞显着抑制T细胞增殖。乳酸诱导Breg样细胞免疫抑制功能与IL-10、TGFβ、PD-L1、arg-1、i NOS、IDO等效应分子无关。(3)乳酸通过NADPH氧化酶上调小鼠B细胞ROS的表达,乳酸诱导的Breg样细胞通过ROS发挥抑制T细胞增殖的免疫调节功能。(4)乳酸促进小鼠B细胞中GPR81 m RNA的表达,GPR81激动剂3,5-DHBA处理的B细胞高表达ROS,并抑制T细胞增殖,而GPR81阻断剂3-OBA可逆转乳酸诱导的Breg样细胞的免疫抑制功能,乳酸通过结合并激活GPR81受体诱导小鼠B细胞发挥免疫抑制功能。(5)乳酸通过结合小鼠B细胞表面GPR81受体,促进小鼠B细胞中PPARα的表达,诱导B细胞内ROS表达水平增高,PPARα阻断剂逆转乳酸诱导B细胞ROS的表达和免疫抑制功能的发挥,乳酸通过GPR81-PPARα-ROS通路诱导Breg样细胞分化并发挥免疫抑制功能。(6)LDHA敲低使荷瘤小鼠肿瘤体积减少,肿瘤组织内Ki-67表达降低,脾脏及肿瘤内CD25+CD81+B细胞和MDSCs比例降低,肿瘤组织内B细胞中NADPH氧化酶相关亚基m RNA及ROS表达水平降低,同时,肿瘤引流淋巴结、脾脏及肿瘤内CD8+INF-γ+T细胞及CD8+Gr B+T细胞比例增多,而肿瘤内Treg细胞比例降低。(7)肺腺癌患者外周血乳酸含量、CD24hiCD38hiBreg细胞和IL-10+Breg细胞比例高于健康对照组,乳酸上调B细胞CD24、CD38及IL-10的表达,并促进B细胞内NADPH氧化酶相关亚基m RNA及ROS表达水平,乳酸培养的B细胞通过ROS抑制T细胞增殖。人肺腺癌肿瘤组织内LDHA表达水平高于癌旁组织,并与表达ROS的CD19+B细胞共定位。结论:乳酸通过GPR81/PPARα/NADPH氧化酶信号诱导B细胞分化为Breg样细胞,Breg样细胞通过ROS抑制T细胞增殖,促进肿瘤进展,敲低肿瘤细胞内LDHA减少Breg样细胞的产生及其ROS的表达,提示靶向降低肿瘤微环境内乳酸含量,可以减少Breg样细胞的分化,进而起到抗肿瘤的治疗作用。这为肿瘤内Breg细胞的致病作用提供新的理论依据,为临床治疗肿瘤提供新的思路。

杜芳芳[6](2021)在《杂原子掺杂荧光碳点的制备及其多功能应用》文中研究表明碳点,由于其独特的性质,如光致发光性、生物相容性、电化学等特性,被广泛应用于环境和生物传感、生物医学、发光二极管及信息安全防伪等方面。目前所报道的碳点合成方法存在制备过程复杂,高能耗和耗时,荧光量子产率低等问题。因此,开发快速、高效且环保的合成方法具有重要的意义。杂原子掺杂技术作为调节碳点荧光性质最有效的手段,为开发高性能荧光碳点并拓展其在某些特定领域的应用提供了技术支撑。本论文通过水热法和酸碱中和反应设计制备了四种性能优异的杂原子掺杂多功能碳点,对其性能进行了分析研究,并将其应用于金属离子和小分子的分析检测、生物成像、抗氧化和抗菌以及荧光防伪等多个领域。主要内容包括:第一章:概述了碳点的结构、光学性质、制备方法及发光机理。并综述了碳点的荧光性能调控和其在分析检测,抗菌,生物成像和荧光防伪等领域的研究进展。第二章:以邻苯二酚为碳源,三乙烯四胺为氮源,通过一步水热法制备了一种绿色荧光N-CDs,对所制备N-CDs的结构和性能进行详细研究,表明N-CDs具有良好的发光性能,可用于Fe3+和抗坏血酸(AA)的双功能传感。Fe3+与N-CDs表面官能团之间的静态猝灭作用,使N-CDs荧光被猝灭。同时,AA的加入将Fe3+还原为Fe2+,使N-CDs的荧光恢复。N-CDs作为一种简便、无标记的纳米荧光探针,用于Fe3+和AA的测定,检出限为58.82 n M和0.236μM,并且已成功地应用于自来水中Fe3+和新鲜水果中AA的分析。制备的N-CDs毒性小,生物相容性好,可用于活细胞内Fe3+和AA的传感,扩大了N-CDs的应用范围。第三章:以邻苯二甲酸为碳源、乙二胺作氮源和浓磷酸作磷源,通过酸碱中和反应快速制备了氮磷双掺杂碳点(N,P-CDs)。该方法无需外加热源,可快速合成大量的N,P-CDs,避免了高温、复杂的操作和较长的反应时间。N,P-CDs具有优良的发光性能,能作为无标记的多功能荧光传感平台用于Mn7+的检测、温度传感和细胞成像。基于内滤效应(IFE),Mn7+能够有效地猝灭N,P-CDs的荧光。该N,P-CDs探针被用于茶叶和中草药中Mn7+的测定。而且,N,P-CDs由于其可忽略的细胞毒性,也被应用到细胞成像及细胞内Mn7+的半定量检测。此外,在25~80℃范围内,N,P-CDs纳米探针的发射强度随温度增加呈线性可逆变化,灵敏度为-1.79%℃,拓展了碳点在多传感方面的应用。第四章:以葡萄糖为碳源,乙二胺(EDA)和浓硝酸为双氮-掺杂剂,采用酸碱中和反应合成了多功能N-CDs。N-CDs具有良好的抗氧化能力,对DPPH的有效抑制浓度明显低于抗坏血酸。抑菌实验阐明,N-CDs对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌表现显着的抗菌活性。此外,N-CDs还具有良好的荧光特性,量子产率为14.2%,在较宽的p H范围内具有稳定的荧光特性,对离子强度有很高的耐受性,可作为荧光纳米探针应用于槲皮素的检测。由于N-CDs的氨基和槲皮素的3-羟基之间的静电相互作用使N-CDs荧光猝灭,构筑了N-CDs纳米探针成功地用于人血清和尿液中槲皮素的检测。第五章:以甲基蓝为唯一原料,采用水热法合成了荧光量子产率高达60%的绿色荧光氮硫共掺杂碳点(N,S-CDs)。由于甲基蓝含有-NH-和-SOx-,故可作为氮硫共掺杂剂引入CDs中。制备的N,S-CDs具有大的Stokes位移(~130 nm)和激发波长独立性荧光行为,可用于H2S传感、生物成像和防伪。通过动态猝灭作用,构筑了免标记的荧光纳米探针用于H2S的检测,线性范围为0.5-15μM,检测限为46.8 n M,且应用于实际样品中H2S的测定。N,S-CDs还用于PC12细胞和斑马鱼的生物成像研究,以及细胞中的H2S的监测。此外,N,S-CDs溶液分散在聚乙烯醇中,制备出高荧光聚合物薄膜。制备的N,S-CDs/PVA薄膜显示出双模荧光特性,可用作潜在的纳米防伪材料。

陈缘愿[7](2021)在《基于葫芦[7]脲的三甲基赖氨酸荧光探针与甲基化肽富集材料的设计》文中研究表明自从葫芦脲被发现以来,葫芦脲的制备与应用就一直是超分子化学中最受关注的热点之一。本课题前期主要是针对葫芦脲及其衍生物的合成进行了大量的方法探究,后面利用葫芦脲与甲基化肽中的甲基赖氨酸分子之间的较好相互作用,设计了选择性较好的三甲基赖氨酸荧光探针和甲基化肽富集材料,为蛋白质组学在甲基化肽中的分析鉴定提供了技术支撑,具体内容如下:第二章,针对葫芦[7]脲的合成与改性做了一系列的方法研究。采用盐酸模板法将苷脲与多聚甲醛通过缩聚反应,制备了含有不同单体数目的葫芦脲同系物,然后通过葫芦[7]脲与其它葫芦脲在水和其它溶剂种的溶解度的不同,将其提取出来。这种做法有效的提高了葫芦[7]脲的产率。考虑到葫芦[7]脲的改性很难除杂,尤其是葫芦[7]脲的空腔很容易被参与反应的其它溶剂分子或者酸分子占据,导致其功能的完整性丢失,不能作为后续实验的原料。我们采用了过二硫酸铵氧化法和双氧水紫外光照法解决了这一问题。这两种方法各有优缺点。通过核磁氢谱检测和质谱的表征手段证实了葫芦[7]脲被成功的单羟基化,并进一步以单羟基化的葫芦脲[7]脲为原料,合成了更具有功能性的单烯丙氧基葫芦[7]脲,拓宽了葫芦脲在其它领域的应用,为研究葫芦脲在甲基化肽中的应用创造了合成条件。第三章,利用不同的客体分子与葫芦[7]脲之间存在着竞争包结的关系,同时葫芦脲与甲基赖氨酸的相互作用差异明显。通过葫芦[7]脲与荧光分子形成复合物后,显着改变荧光分子的荧光性质,在相同条件下,往复合物中加入不同程度的甲基赖氨酸,发现各自表现出了不同的荧光变化,其中,三甲基化赖氨酸能显着降低该荧光复合物的荧光强度,通过荧光偏振、荧光量子产率和荧光寿命等方法验证了此现象的准确性。并且测量了葫芦[7]脲与选定的荧光分子和三甲基化赖氨酸它们之间的结合常数,证明了我们设计的荧光探针的合理性。并用核磁滴定的方法解释了荧光复合物能特异性识别的原因。第四章,设计了一种针对甲基化肽富集和分离的新策略,增加了葫芦[7]脲衍生物的应用。将改性后的烯丙氧基葫芦脲与氧化三甲胺聚合于聚合物链的侧链上,成功的将其接枝到粒径5μm左右的二氧化硅微球上,为设计用于甲基化肽富集和分离的色谱柱填料提供了新的方法。

陈能洲[8](2021)在《ROS介导的lncRNA NR030777与非编码RNA m6A修饰在百草枯致神经细胞线粒体自噬中的作用与机制》文中认为目的:本研究通过建立Neuro-2a细胞与原代神经元的PQ致神经细胞损伤模型,采用分子生物学技术,探究线粒体分裂在PQ致神经线粒体自噬中的作用以及潜在的分子机制。从体外与体内层面,通过基因敲低及过表达技术阐明NR030777在PQ致神经线粒体自噬中的作用与机制,以期其能成为PD新的防治靶点。最后,检测活性氧介导的lnc RNA与circ RNA m6A表达谱的变化,探索PQ致神经元损伤可能作用机制。方法:1.采用CCK8确定PQ在N2a细胞中的神经毒性。使用流式细胞仪检测PQ引起的活性氧与线粒体膜电位的变化。激光共聚焦扫描显微镜,透射电子显微镜确定PQ诱导的N2a线粒体分裂在线粒体自噬中的作用。通过蛋白质免疫印迹检测自噬关键蛋白水平验证自噬的改变,并用自噬抑制剂氯喹(CQ),巴佛洛霉素(Bfa1)与PQ联合处理分析其对自噬流的影响。通过活性氧去除剂NAC证实ROS在PQ引起的线粒体自噬与线粒体分裂过程中的作用。通过DRP1的抑制剂mdivi-1研究线粒体分裂在PQ引起的线粒体自噬过程中的作用。2.通过建立PQ染毒的C57BL/6小鼠多巴胺神经元损伤模型,研究PQ对于小鼠黑质区线粒体自噬的改变,长链非编码RNA NR030777的变化。通过建立不同浓度与时间PQ处理的N2a与原代神经元细胞损伤模型,研究长链非编码RNA NR030777的变化趋势。使用NAC验证ROS在PQ引起的NR030777变化中的作用。通过构建NR030777稳定过表达的N2a细胞确定NR030777在PQ引起的线粒体自噬改变中的作用。通过RIP和RNA pulldown实验确定NR030777的靶标蛋白。通过截短RNA pulldown实验确定NR030777与靶标蛋白的作用区域。通过建立PQ染毒的NR030777脑条件过表达C57BL/6小鼠模型,验证NR030777在PQ引起小鼠黑质区线粒体自噬的改变中的作用,并进一步验证NR030777潜在的分子机制。3.构建NAC与PQ联合作用N2a细胞模型,通过me RIP-seq检测lnc RNA与circ RNA m6A表达谱的变化,通过生物信息学分析,探索PQ神经细胞毒性作用可能机制。结果:1.PQ在神经元细胞中以剂量依赖性方式(100、200和300μM)诱导N2a活力下降。PQ在神经元细胞中以剂量依赖性方式(100、200和300μM)促进线粒体自噬。PQ促进线粒体的分裂相关蛋白表达增强。线粒体膜电位(MMP)降低和ROS升高增强PQ引起的线粒体吞噬。特别是,DRP1介导的线粒体裂变促进PQ引起的神经元线粒体自噬。2.NR030777通过DRP1介导的线粒体分裂参与调节PQ引起的神经细胞线粒体自噬的增强。结果还更进一步的揭示在PQ暴露所致的线粒体自噬增强过程中,NR030777一方面通过作用于CDK1,激活CDK1信号通路,引起DRP1蛋白第616位点的丝氨酸磷酸化,从而促进损伤的线粒体分裂增强,另一方面NR030777通过作用于ATG12,促进ATG12-ATG5复合体形成,使得细胞自噬成膜过程加速,迅速包裹由损伤线粒体分裂出来的短圆线粒体,使其通过自噬迅速降解。3.N2a细胞暴露于PQ时,lnc RNAs中的m6A水平升高。PQ处理的N2a细胞后,差异变化的m6A lnc RNA主要来自第2、4、5、11的染色体。在ROS介导的PQ神经毒性中,m6A仅在CDS周围和3′UTR的起点富集。差异甲基化的lnc RNA参与了许多重要的生物学过程(如:泛素化蛋白降解,自噬,RNA剪接等等)。此外,m6A在ROS介导的PQ神经毒性中扰动了lnc RNAs相关的基因网络。4.我们的研究结果表明,NAC预处理可以部分逆转PQ暴露后由m6A甲基化驱动的circ RNA的改变。此外,基因本体论(GO)和pathway分析表明,差异甲基化的circ RNAs可以调节参与神经毒性途径的靶基因(UBC和PPP2CA)。结论:1.PQ暴露引起神经细胞线粒体损伤,活性氧增多,损伤的线粒体分裂增强形成短圆线粒体,有利于自噬清除,线粒体自噬增强。2.长链非编码RNA NR030777是PQ暴露引起的线粒体自噬增强的关键的调控因子。其通过CDK1促进DRP1介导的线粒体分裂的同时通过ATG12促进自噬,从而清除PQ暴露引起的损伤的线粒体。3.在N2a细胞中,ROS介导PQ引起的lnc RNA与circ RNA m6A改变,lnc RNA与circ RNA甲基化参与了许多重要的生物学过程,有待进一步研究。

高策[9](2021)在《针对生物小分子检测的SERS基底和荧光探针设计合成及应用》文中研究指明灵敏而特异性地检测生物标志物在疾病诊断中非常重要。表面增强拉曼散射(SERS)技术具有无损检测、―指纹‖识别能力等优点,并且可以在短时间内对目标分析物进行检测,已作为一种高灵敏度的分析方法被广泛应用于痕量分析检测、反应监控、光电催化等领域。SERS可以由局域表面等离子体共振(LSPR)诱导分子检测水平的拉曼信号增强,实现单分子检测,其增强因子(EF)可达到1014-1015。当金属纳米粒子间隙小于10 nm时,会产生具有极强电磁场的空间局域,即―热点‖。研究表明,改善SERS基底的关键是增加热点数量。因此,合成具有良好SERS活性的纳米材料,对于获得较低的检测限(LOD)至关重要。SERS在生物标志物检测领域(例如:蛋白质,氨基酸,核酸)已经显示极具潜力的应用前景,因而受到广泛关注。基于以上观点,本论文制备了一系列SERS基底,并将基底应用于生物小分子的检测。另一方面,基于荧光分光光度法灵敏度高和识别能力强等优点,还制备了Fe-MIL-88NH2材料作为荧光探针,用来快速、灵敏的检测半胱氨酸(Cys),RhB@MOF-808材料作为荧光探针检测多巴胺(AD)和Fe3+。(1)根据马兜铃酸I(AAI)和马兜铃酸内酰胺(AAT)分子独特的光谱响应,提出了一种新型双光谱法,即在SERS和荧光测定方法(FLD)双模式下,监测人体蛋白血清和A 549细胞中的AAI。作为广泛存在于马兜铃酸(AAs)中的两种有害物质AAI和AAT已被证明与肾毒性有关。为了更好地监测AAI,我们优化了检测条件,包括待测物的浓度,反应的p H值,不同种类还原剂和反应时间等。并探究了Fe2+还原AAI生成AAT(具有荧光信号)的反应,从而既可以通过SERS也可以通过FLD检测AAI。该方法被成功应用于标记细胞中的AAI。通过CCK-8实验测试AAI的毒性,发现当浓度达到10μM时A 549细胞开始凋亡,并且随着AAI浓度的增加A 549细胞的活性降低。(2)采用SERS光谱技术、液质联用技术(HPLC-MS)、动物光学实验,监测谷胱甘肽(GSH)与AAI的反应,并探究了GSH代谢AAI的机理。在生物体内AAI会形成一种带正电荷的AAT-氮正离子,氮正离子会增加AAI对细胞的氧化应激性,导致细胞凋谢死亡。含有-SH基团的GSH可以与AAI结合,从而减少暴露于A 549细胞中的AAI。SERS光谱检测结果表明,随着GSH的增加,AAI的特征峰逐渐消失但是并没有新峰产生。CCK-8检测结果表明,加入GSH后细胞的活性增加,表明GSH可以代谢AAI的毒性,并通过HPLC-MS确认了GSH代谢AAI的主要途径和机理。进一步通过动物光学实验发现向小鼠腹腔同时注射AAI和GSH,小鼠肾器官荧光增强,证明在生物体内GSH可以检测AAI。(3)我们合成了氨基功能化的目标探针Fe-MIL-88NH2分子用于检测Cys。该探针的制备方法简单,成本低廉,并可以在生理p H条件下快速、灵敏的检测Cys。使用X射线衍射仪(XRD),傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR),扫描电子显微镜(SEM)等技术对其进行结构和形貌表征,证明目标材料成功合成。通过光谱性质研究,我们发现Fe-MIL-88NH2可用于检测溶液中Cys,检测限低至5.33μM。该分子也可以实现可见光激发“on-off”检测Cys。并且由于其具有较低的细胞毒性和良好的细胞膜通透性,可用于标记A 549细胞中的Cys。此外,还开发了便携式色卡用于实时检测Cys,可以实现对Cys进行裸眼识别。因此,Fe-MIL-88NH2作为检测Cys的荧光探针化合物,具有潜在生物应用价值。(4)我们构建一种了RhB@MOF-808探针,它可以基于荧光变化实现多巴胺(DA)和Fe3+的检测。通过XRD、FT-IR、SEM和固态荧光等表征证明RhB@MOF-808被成功合成。该探针的制备方法简单,成本低廉,并可以在生理p H条件下快速、灵敏的检测DA和Fe3+。通过光谱性质研究,我们发现RhB@MOF-808可用于检测溶液中DA和Fe3+,检测限低至60.25 n M和48.34 n M。通过设计―分子逻辑门‖来表达荧光的―off-on‖,表明该分子也可以实现可见光激发“off-on”式检测DA和Fe3+。实验结果表明RhB@MOF-808具有良好的细胞膜通透性,被成功用于标记Hela细胞中的DA和Fe3+。此外,有关于DA和Fe3+实时监测的便携式色卡也得到了开发,可以对DA和Fe3+进行裸眼识别。因此,这个RhB@MOF-808作为检测DA和Fe3+的荧光探针化合物,具有潜在生物应用价值。

雷雨田[10](2021)在《家蚕卵胶蛋白的鉴定与功能研究》文中指出昆虫是自然界中种类最多的动物种群,许多昆虫都能分泌生物粘合剂来保护自身、巢穴或者它们的卵。昆虫分泌的生物粘合剂具有很好的粘合性能,常常能够在潮湿、肮脏的环境中保持长久的粘性。家蚕作为鳞翅目的代表昆虫,多个组织器官能分泌具有粘性作用的物质,比如丝腺和粘液腺。粘液腺是家蚕雌性生殖系统的一个附属器官,在蛹前期发育缓慢,但在蛹羽化前发育迅速,并且合成大量的粘液,在产卵时涂布于卵的背面,用于将卵锚定在桑叶或蚕种纸上。许多研究关注于昆虫的粘液腺形态和粘液理化特性,发现粘液的主要成分是卵胶蛋白(Egg glue protein,EGP),并且发现这些卵胶蛋白都普遍富含甘氨酸、脯氨酸和丝氨酸等氨基酸。尽管如此,至今尚未有文献报道昆虫粘液腺分泌的卵胶蛋白的序列。因此,是什么样的结构赋予了卵胶蛋白优良的粘性仍未可知。本研究围绕这些问题进行了深入研究。本研究对家蚕雌蛾的粘液腺进行了转录组测序,筛选到了在粘液腺中表达量较高的基因,利用LC-MS/MS对粘液中最明显的条带进行质谱分析,鉴定到了一个候选的卵胶蛋白,通过5’和3’RACE获得了完整的卵胶蛋白编码基因,并对其进行了序列结构分析、糖基化分析以及粘合性能研究。获得的主要结果如下:1.家蚕卵胶蛋白EGP的鉴定及表达特征分析通过体视显微镜与电镜对家蚕卵腹面进行观察发现,卵的腹面有一层透明胶状薄膜,这层薄膜是由粘液腺分泌的粘性物质风干后形成的。为了鉴定到发挥粘性功能的蛋白,我们使用尿素对卵面进行洗脱,进行SDS-PAGE,结果显示,卵面洗脱蛋白含量较为丰富,主条带位于280 k Da。通过对主条带挖胶质谱鉴定以及对家蚕雌性成虫粘液腺进行转录组分析,鉴定到同一基因,将其基因序列在Silk Base数据库中进行检索,鉴定到其为未知功能蛋白,但基因序列并不完整。因此,我们采用5’RACE的方法获得了完整的基因序列,我们将其名命为卵胶蛋白(egg glue protein)。卵胶蛋白共有2163个氨基酸,第一个外显子编码的23个氨基酸MDPKHYGVLAVLLLSTFIFWVDG预测为卵胶蛋白的信号肽。第19外显子为短序列高度重复区,以5个氨基酸为一重复单元,共重复了346次,重复最多的重复单元为GGNQQ,其中第1位和第2位的Gly非常保守,第3位的Asn和第4位的Gln有时会被酸性残基Glu和Asp或碱性残基Lys取代,而Pro偶尔会代替Gln出现在第5位。第21号外显子中有两个半胱氨酸,通过电泳发现,卵胶蛋白能够形成二硫键。对卵胶蛋白进行时期表达谱进行分析,发现卵胶蛋白仅在雌性成虫的粘液腺特异高量表达,进一步研究发现卵胶蛋白主要是在粘液腺的分泌部合成。对雌性从蛹期到蛾期的组织表达谱进行分析,发现卵胶蛋白在蛹3天开始表达,表达量随着蛹的发育逐步上升,在雌蛾羽化当天达到最高值,在羽化后逐步下降。利用免疫荧光定位的方法观察卵胶蛋白在粘液腺的贮藏部和分泌部的分布情况,发现卵胶蛋白是由呈树枝状的分泌部合成并分泌到管腔,然后再流动到体积膨大的贮藏部官腔内贮存。2.家蚕卵胶蛋白EGP的真核表达、纯化及结构分析仔细分析家蚕卵胶基因的基因序列发现,序列结构主要由信号肽、N端、重复区、C端四部分组成,重复区主要是由肽GGNQQ高度重复组成,共重复346次,重复区具有重复性高、重复单元小的特点;为探究重复区对卵胶蛋白结构和功能的影响,通过真核细胞表达和原核细胞表达的方法对重复区序列截取片段进行蛋白表达,原核细胞表达和真核细胞表达的重组卵胶蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析纯化,获得大量纯重组卵胶蛋白,经液相色谱-串联质谱法鉴定为所需靶蛋白,Western blot结果也表明His抗体均能识别带有His标签的原核和真核表达的重组卵胶蛋白;为了探究其重复区对卵胶蛋白结构的影响,通过圆二色谱探究其结构特征,结果显示,高蛋白浓度能够促进卵胶蛋白由无规卷曲向α-螺旋最终形成β-turn结构。重组卵胶蛋白在不同温度和不同酸碱度下结构都非常稳定,并且随着热量的升高也能增加β-turn结构的含量。红外光谱显示,真核表达重组卵胶蛋白中β-turn含量更高,高蛋白浓度或高温有利于卵胶蛋白的构象由不规则结构向β-turn转变。β-turn的串联能够形成β-螺旋的有序状态构象,被认为是具有高度弹性的结构,也是卵胶蛋白具有粘合性能的重要原因之一。3.家蚕卵胶蛋白EGP粘附性能分析我们对原核表达和真核表达体系表达的重复区蛋白和卵面洗脱的蛋白进行糖染色,发现从卵面提取的卵胶蛋白和真核表达的卵胶蛋白能被席夫碱染成红色条带,表明天然的卵胶蛋白和真核表达的重组卵胶蛋白都具有糖基化修饰。通过对天然卵胶蛋白进行LC-MS/MS质谱鉴定,检测了卵胶蛋白糖基化修饰位点及类型,发现天然卵胶蛋白含有N-糖基化修饰和大量O-糖基化修饰,这与粘性蛋白特性十分吻合。为了探究家蚕卵胶蛋白卵胶蛋白粘附性能与及粘附机理,我们对真核和原核表达重组卵胶蛋白通过万能拉伸仪进行粘结强度检测,发现拥有糖基化修饰的真核表达卵胶蛋白的强度可达0.8 MPa明显高于没有糖基化修饰的原核表达重组卵胶蛋白强度(0.2 MPa),因此糖基化修饰能够使粘结性能有大幅提升。另外我们猜测漆酶、转谷酰胺酶等交联酶能催化卵胶蛋白直接形成共价的异肽键,与卵胶蛋白的粘性有关。由于转谷酰胺酶催化谷氨酰胺和赖氨酸之间形成异肽键,这也与卵胶蛋白氨基酸序列中存在大量的Q和K吻合,因此我们猜测粘液腺中存在转谷酰胺酶,能够帮助卵胶蛋白进行交联。我们通过粘液腺转录组数据找到3种标注为转谷酰胺酶的基因,并将其与豚鼠转谷酰胺酶序列进行比对,确定粘液腺中确实存在转谷酰胺酶。将天然卵胶蛋白、真核表达重组卵胶蛋白及原核表达重组卵胶蛋白进行体外交联,SDS-PAGE证明其确实能催化卵胶蛋白的交联。对交联前后的重组蛋白和天然蛋白进行粘结强度的检测,发现交联后的真核重组蛋白粘结强度可达2.2 MPa能够更好的接近天然卵胶蛋白的粘结强度2.6 MPa,说明家蚕分泌卵胶蛋白对卵腹面进行固定时,转谷酰胺酶发挥着重要的促进卵胶蛋白交联固化的效果,能提高卵胶蛋白的粘性。

二、细胞色素c氧化酶Cu_A 结构域蛋白的荧光猝灭研究(论文开题报告)

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、细胞色素c氧化酶Cu_A 结构域蛋白的荧光猝灭研究(论文提纲范文)

(2)亚铜离子荧光探针的合成表征及铜离子缺乏对线粒体功能和神经发育影响的研究(论文提纲范文)

摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 问题的提出与研究意义
    1.2 铜离子的生理功能
        1.2.1 参与线粒体的能量代谢过程
        1.2.2 参与生物体抗氧化防预
        1.2.3 参与神经递质与神经肽的合成
        1.2.4 参与神经调节
        1.2.5 其他
    1.3 线粒体功能
        1.3.1 线粒体的结构
        1.3.2 线粒体的功能
        1.3.3 线粒体与神经退行性疾病
    1.4 铜离子的荧光检测手段
        1.4.1 荧光蛋白
        1.4.2 小分子荧光探针
        1.4.3 铜离子荧光探针的研究进展
    1.5 本文的基本设计思路
第二章 罗丹明探针的合成及细胞线粒体中的成像
    2.1 引言
    2.2 试剂与仪器
        2.2.1 试剂
        2.2.2 主要仪器
    2.3 合成方法
        2.3.1 亚铜离子识别基团的合成
        2.3.2 罗丹明发光基团的合成
        2.3.3 罗丹明亚铜离子探针Mito-OFCu的合成路线
    2.4 实验方法
        2.4.1 Mito-OFCu在溶液中的性质测试方法
        2.4.2 Mito-OFCu在细胞中的实验方法
    2.5 结果与讨论
    2.6 本章小结
第三章 铜离子缺乏对Hela细胞线粒体功能影响的研究
    3.1 引言
    3.2 试剂与仪器
        3.2.1 试剂
        3.2.2 主要实验器械及仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 细胞培养及si RNA敲低Hela细胞SLC25A3 蛋白的方法
        3.3.2 检测siRNA敲低SLC25A3 蛋白后Hela细胞内Cu~+的变化
        3.3.3 WB检测si RNA敲低Hela细胞SLC25A3 蛋白的变化
        3.3.4 检测SLC25A3 蛋白敲低后Hela细胞线粒体呼吸功能的变化
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 si RNA转染实验及转染后蛋白SLC25A3 在细胞中表达的研究
        3.4.2 si RNA敲低蛋白SLC25A3 表达后细胞内Cu~+变化的研究
        3.4.3 SLC25A3 蛋白表达降低后对COX1和COX2 影响的探究
        3.4.4 SLC25A3 蛋白敲低后Hela细胞线粒体呼吸功能变化的研究
    3.5 本章小结
第四章 铜离子缺乏对斑马鱼线粒体功能及神经发育影响的研究
    4.1 引言
    4.2 试剂与仪器
        4.2.1 试剂
        4.2.2 实验仪器
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 斑马鱼的养殖及ATP7A突变体斑马鱼的鉴定方法
        4.3.2 检测ATP7A突变体斑马鱼的表型变化
        4.3.3 检测ATP7A突变体斑马鱼体内Cu~+的变化
        4.3.4 检测ATP7A突变体斑马鱼线粒体功能的变化
        4.3.5 检测ATP7A突变体斑马鱼神经发育的变化
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 ATP7A突变体斑马鱼的鉴定结果
        4.4.2 ATP7A突变体斑马鱼表型变化的研究
        4.4.3 ATP7A突变体斑马鱼体内Cu~+变化的研究
        4.4.4 ATP7A突变体斑马鱼线粒体功能变化的研究
        4.4.5 ATP7A突变体斑马鱼神经发育的研究
    4.5 本章小结
第五章 结论
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间取得的研究成果

(3)电离辐射诱导非小细胞肺癌DNA损伤与线粒体功能紊乱的应答机理研究(论文提纲范文)

摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 肺癌现状与放射治疗
        1.1.1 肺癌现状
        1.1.2 肺癌放射治疗及综合治疗进展
    1.2 DNA损伤形成及应答
        1.2.1 DNA损伤在放射治疗中的形成
        1.2.2 DNA损伤监督
        1.2.3 DNA损伤识别修复
        1.2.4 DNA损伤诱导的细胞死亡
    1.3 线粒体功能紊乱
        1.3.1 线粒体功能紊乱与癌症的形成和发展
        1.3.2 线粒体与辐射抗拒性
        1.3.3 Ras/PI3K/Akt/mTOR通路
        1.3.4 线粒体翻译
    1.4 DNA损伤应答和线粒体功能紊乱的相互作用
        1.4.1 细胞核与线粒体之间的双向信号
        1.4.2 DNA损伤应答与线粒体功能的共同调控通路
    1.5 本文研究目的及意义
第2章 重离子诱导非小细胞肺癌复杂性DNA损伤的识别及修复
    2.1 引言
    2.2 材料与试剂
        2.2.1 细胞来源
        2.2.2 试剂及药品
        2.2.3 主要使用仪器
    2.3 实验方法与步骤
        2.3.1 细胞培养传代
        2.3.2 辐照与博来霉素处理
        2.3.2.1 X射线辐照
        2.3.2.2 碳离子辐照
        2.3.2.3 博来霉素处理
        2.3.3 细胞增殖检测CCK-8 实验
        2.3.4 克隆形成实验
        2.3.5 DNA凝胶电泳及DNA损伤频率的计算
        2.3.6 免疫荧光试验
        2.3.7 Western blot蛋白免疫印迹实验
        2.3.8 数据统计分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 非小细胞肺癌对X射线和碳离子的辐射敏感性具有差异
        2.4.2 X射线辐照及联合博来霉素对A549 细胞活性的影响
        2.4.3 碳离子联合博来霉素诱导最明显的复杂DSB损伤
        2.4.4 复杂DSA损伤的动态识别
        2.4.5 复杂DNA损伤的主要修复方式可能为非同源末端连接(NHEJ)
    2.5 讨论
第3章 重离子联合替加环素诱导非小细胞肺癌线粒体功能紊乱的机理研究
    3.1 引言
    3.2 材料与试剂
        3.2.1 细胞来源
        3.2.2 试剂及药品
        3.2.3 主要使用仪器
    3.3 实验方法与步骤
        3.3.1 细胞培养
        3.3.2 辐照与替加环素处理
        3.3.2.1 碳离子辐照
        3.3.2.2 替加环素处理
        3.3.3 克隆形成实验
        3.3.4 免疫荧光实验
        3.3.5 细胞凋亡实验
        3.3.6 细胞内ATP检测
        3.3.7 线粒体膜电势检测
        3.3.8 线粒体内Ca~(2+)水平检测
        3.3.9 Western blot蛋白免疫印迹实验
        3.3.10 数据统计分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 碳离子、替加环素以及两者联合作用均能显着抑制肺癌细胞增殖
        3.4.2 碳离子、替加环素以及两者联合作用均诱导线粒体功能紊乱
        3.4.3 碳离子、替加环素及两者联合作用诱导细胞凋亡
        3.4.4 碳离子、替加环素及两者联合作用在H1299 细胞中诱导自噬
        3.4.5 碳离子通过Akt/AMPK/mTOR通路调控线粒体翻译蛋白
        3.4.6 碳离子通过p53和Akt/AMPK/mTOR通路调控线粒体翻译蛋白
        3.4.7 P53 缺失的H1299 细胞对线粒体翻译抑制更加敏感
    3.5 讨论
第4章 DNA损伤与线粒体功能紊乱的共同应答通路
    4.1 引言
    4.2 材料与试剂
        4.2.1 细胞来源
        4.2.2 试剂及药品
        4.2.3 主要使用仪器
    4.3 实验方法与步骤
        4.3.1 细胞培养
        4.3.2 辐照与抑制剂处理
        4.3.2.1 辐照
        4.3.2.2 抑制剂处理
        4.3.3 克隆形成实验
        4.3.4 线粒体内Ca~(2+)水平检测
        4.3.5 Western blot蛋白免疫印迹实验
        4.3.6 数据统计分析
    4.4 实验结果
        4.4.1 ATM抑制剂KU-55933 增加A549 细胞对碳离子的辐射敏感性
        4.4.2 抑制ATM下调碳离子辐照后DSB损伤修复蛋白的表达
        4.4.3 KU-55933 增加碳离子辐照后线粒体Ca~(2+)水平
        4.4.4 ATM调控p53和mTOR参与碳离子辐照应答
        4.4.5 自噬受ATM通路的调控参与碳离子应答
    4.5 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
作者简历及攻读学位期间发表的学术论文及研究成果

(4)在呼吸链调节植物细胞死亡及光合过程中植物细胞外ATP生理学作用的研究(论文提纲范文)

摘要
abstract
第1章 文献综述
    1.1 植物线粒体呼吸电子传递链的研究进展
        1.1.1 植物线粒体呼吸电子传递链
        1.1.2 细胞色素途径及其对植物生理活动的影响
        1.1.3 交替呼吸途径及其对植物生理活动的影响
    1.2 植物细胞外ATP的研究进展
        1.2.1 植物细胞外ATP的来源
        1.2.2 信号分子—细胞外ATP
        1.2.3 植物中细胞外ATP的信号转导
        1.2.4 细胞外ATP对植物细胞死亡的调节
        1.2.5 细胞外ATP对植物光合作用的调节
    1.3 本实验研究的目的和意义
第2章 呼吸链抑制剂抗霉素A诱导细胞死亡过程中细胞外ATP的调节作用
    2.1 呼吸链抑制剂抗霉素A对细胞生长的影响
    2.2 材料与方法
        2.2.1 烟草悬浮细胞的传代培养
        2.2.2 烟草悬浮细胞的处理
        2.2.3 试剂与仪器
        2.2.4 不同的生理指标的测定及方法
        2.2.5 数据分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 不同浓度梯度的AA对烟草悬浮细胞死亡水平的影响
        2.3.2 AA对ROS和细胞死亡的诱导及二者的关系
        2.3.3 AA诱导的细胞死亡与细胞外ATP有关
        2.3.4 细胞外ATP对 AA诱导的细胞死亡的调控作用和Ca~(2+)有关
    2.4 讨论与小结
        2.4.1 讨论
        2.4.2 小结
第3章 呼吸链影响光化学反应过程中细胞外ATP调控作用的研究
    3.1 呼吸链抑制剂对植物光合反应的影响
    3.2 材料与方法
        3.2.1 拟南芥的培养
        3.2.2 拟南芥幼苗的处理
        3.2.3 试剂与仪器
        3.2.4 叶绿素荧光参数的测定
        3.2.5 数据分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 AA影响拟南芥光化学活性过程中细胞外ATP的调控作用
        3.3.2 SHAM影响拟南芥光化学活性过程中细胞外ATP的调控作用
    3.4 讨论与小结
        3.4.1 讨论
        3.4.2 小结
第4章 总结和展望
    4.1 主要结论
        4.1.1 细胞外ATP调节呼吸链抑制剂AA诱导下的植物细胞死亡的可能机理
        4.1.2 细胞外ATP对呼吸链影响光化学反应过程中的可能调控机理
    4.2 问题与展望
参考文献
主要符号对照表
致谢
个人简历、在学期间发表的学术论文及研究成果

(5)肿瘤代谢物乳酸诱导B细胞分化为Breg样细胞的分子机制(论文提纲范文)

中文摘要
abstract
第1章 绪论
    1.1 调节性B细胞概述
    1.2 调节性B细胞与肿瘤
    1.3 肿瘤微环境中调节性B细胞的来源
    1.4 乳酸对肿瘤微环境免疫反应的影响
第2章 文献综述
    2.1 调节性B细胞生物学特性
        2.1.1 调节性B细胞分类及分子标志
        2.1.2 调节性B细胞抑制功能机制
        2.1.3 调节性B细胞的起源及分化
    2.2 调节性B细胞在自身免疫性疾病、感染和肿瘤中的作用
        2.2.1 Breg细胞在自身免疫性疾病中的作用
        2.2.2 Breg细胞在感染性疾病中的作用
        2.2.3 Breg细胞在肿瘤中的作用
    2.3 ROS在B细胞中作为信号分子的作用
        2.3.1 ROS在B细胞中的产生和降解
        2.3.2 ROS调节B细胞的成熟、活化和增殖
        2.3.3 ROS影响B细胞功能
    2.4 乳酸促进肿瘤发生发展机制
        2.4.1 乳酸的来源与代谢
        2.4.2 乳酸在肿瘤发生发展中的作用
        2.4.3 乳酸/GPR81 信号通路对肿瘤的影响
        2.4.4 乳酸作为肿瘤治疗靶点
第3章 乳酸诱导小鼠B细胞分化为Breg样细胞的分子机制研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验动物
        3.2.2 材料和试剂
        3.2.3 仪器设备
    3.3 方法
        3.3.1 磁珠分选B6 小鼠B220~+B细胞
        3.3.2 磁珠分选CD8~+T细胞
        3.3.3 磁珠分选CD4~+T细胞
        3.3.4 磁珠分选B6 小鼠na(?)ve CD4~+T细胞
        3.3.5 CFSE染色
        3.3.6 乳酸培养小鼠B220 细胞抑制功能实验
        3.3.7 CFSE法检测细胞增殖
        3.3.8 慢病毒CRISPR/Cas9 技术构建LDHA基因敲除D121 细胞混合克隆稳定株
        3.3.9 小鼠肺腺癌模型的构建
        3.3.10 小鼠肿瘤组织消化
        3.3.11 肿瘤组织B淋巴细胞分选
        3.3.12 组织染色
        3.3.13 流式分析
        3.3.14 qRT-PCR检测
        3.3.15 Western blot
        3.3.16 统计分析
    3.4 结果
        3.4.1 乳酸诱导B细胞具有CD25~+CD81~+Breg样细胞的表型
        3.4.2 乳酸诱导的Breg样细胞具有免疫抑制功能
        3.4.3 乳酸诱导的Breg样细胞不能诱导Treg细胞分化及CD4~+T细胞凋亡
        3.4.4 乳酸诱导的Breg样细胞抑制T细胞增殖机制研究
        3.4.5 乳酸激活B细胞表面GPR81 受体诱导ROS表达
        3.4.6 乳酸激活B细胞内PPARα诱导ROS表达
        3.4.7 乳酸通过结合GPR81 受体激活PPARα诱导ROS产生
        3.4.8 降低肿瘤内乳酸浓度对B细胞及其他免疫细胞比例及功能的影响
    3.5 讨论
    3.6 小结
第4章 乳酸诱导人外周血B细胞分化为Breg样细胞
    4.1 引言
    4.2 材料和仪器
        4.2.1 研究对象入组及排除标准
        4.2.2 实验材料
        4.2.3 仪器
    4.3 方法
        4.3.1 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
        4.3.2 磁珠分选人外周血CD3~+T/CD19~+B细胞
        4.3.3 乳酸培养人CD19~+B细胞抑制功能试验
        4.3.4 流式检测
        4.3.5 qRT-PCR检测
        4.3.6 人肺腺癌组织及癌旁组织免疫荧光染色
    4.4 结果
        4.4.1 肺腺癌患者外周血乳酸含量及Breg细胞比率
        4.4.2 乳酸诱导人外周血B细胞分化为Breg样细胞
        4.4.3 人肺腺癌组织及癌旁组织内乳酸对 B 细胞 ROS 表达的影响
    4.5 讨论
    4.6 小结
第5章 结论
    5.1 结论
    5.2 创新点
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢

(6)杂原子掺杂荧光碳点的制备及其多功能应用(论文提纲范文)

中文摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 碳点的简介
        1.1.1 碳点的结构组成
        1.1.2 碳点的光学性质
        1.1.3 碳点的合成方法
        1.1.4 碳点的光致发光机理
    1.2 碳点的性能调控
        1.2.1 尺寸调控
        1.2.2 氧化作用
        1.2.3 表面钝化
        1.2.4 杂原子掺杂
    1.3 碳点的应用研究进展
        1.3.1 分析检测
        1.3.2 生物成像
        1.3.3 抗菌应用
        1.3.4 荧光防伪
    1.4 立题背景和研究内容
        1.4.1 立题背景
        1.4.2 研究内容和创新点
    参考文献
第二章 氮掺杂碳点的开关型荧光传感器对Fe~(3+)和抗坏血酸的检测
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 实验试剂
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 N-CDs的制备
        2.2.4 荧光量子产率的测量
        2.2.5 Fe~(3+)和抗坏血酸的荧光测定方法
        2.2.6 实际样品中Fe~(3+)和AA的测定
        2.2.7 细胞毒性测试
        2.2.8 细胞成像
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 N-CDs的表征
        2.3.2 N-CDs的光学特性探究
        2.3.3 N-CDs荧光“Turn-Off”检测Fe~(3+)
        2.3.4 N-CDs检测Fe~(3+)的机理研究
        2.3.5 N-CDs荧光“Turn-On”检测AA
        2.3.6 实际样品中Fe~(3+)和AA的分析
        2.3.7 N-CDs的细胞毒性及在细胞成像中的应用
        2.3.8 基于N-CDs对 Fe~(3+)和抗坏血酸分析的逻辑门设计
    2.4 小结
    参考文献
第三章 氮磷双掺杂碳点作为多功能平台用于Mn~(7+)和温度传感及细胞成像
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 实验试剂
        3.2.2 实验仪器
        3.2.3 N,P-CDs的制备
        3.2.4 Mn~(7+)和温度的检测
        3.2.5 实际样品的前处理
        3.2.6 细胞毒性测试
        3.2.7 细胞成像
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 N,P-CDs的表征
        3.3.2 N,P-CDs的光学特性
        3.3.3 N,P-CDs对温度的传感分析
        3.3.4 N,P-CDs对 Mn~(7+)的检测
        3.3.5 N,P-CDs检测Mn~(7+)的机理研究
        3.3.6 茶叶和中药样品中Mn~(7+)的检测
        3.3.7 N,P-CDs的细胞毒性及在细胞成像中的应用
    3.4 小结
    参考文献
第四章 氮掺杂碳点的快速合成及其在抗氧化,抗菌和槲皮素传感分析中的应用
    4.1 引言
    4.2 实验部分
        4.2.1 实验试剂
        4.2.2 实验仪器
        4.2.3 N-CDs的制备
        4.2.4 槲皮素的荧光检测方法
        4.2.5 实际样品的前处理
        4.2.6 实际样品中的槲皮素的测定
        4.2.7 DPPH测试
        4.2.8 ·OH清除测试
        4.2.9 O_2~(·-)清除测试
        4.2.10 抗菌测试
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 N-CDs的表征
        4.3.2 N-CDs的光学性能探究
        4.3.3 N-CDs抗氧化活性的分析研究
        4.3.4 N-CDs抗菌活性的分析研究
        4.3.5 N-CDs作为无标记荧光传感器检测槲皮素
        4.3.6 N-CDs检测槲皮素的机理研究
        4.3.7 实际样品中槲皮素的分析应用
    4.4 小结
    参考文献
第五章 高荧光氮硫共掺杂在H_2S检测,生物成像和荧光防伪方面的多功能应用
    5.1 引言
    5.2 实验部分
        5.2.1 实验试剂
        5.2.2 实验仪器
        5.2.3 N,S-CDs的制备
        5.2.4 H_2S的荧光检测方法
        5.2.5 实际样品的前处理
        5.2.6 实际样品中H_2S的测定方法
        5.2.7 细胞毒性测试
        5.2.8 细胞成像
        5.2.9 斑马鱼成像
        5.2.10 N,S-CDs/PVA荧光膜的制备
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 N,S-CDs的表征
        5.3.2 N,S-CDs的光学特性
        5.3.3 N,S-CDs对 H_2S的检测分析
        5.3.4 N,S-CDs检测H_2S的机理研究
        5.3.5 水样及生物样品中H_2S的检测
        5.3.6 N,S-CDs的细胞毒性及在细胞和斑马鱼成像中的应用
        5.3.7 N,S-CDs/PVA荧光膜的光学特性探究
        5.3.8 N,S-CDs/PVA荧光膜在荧光防伪中的应用
    5.4 小结
    参考文献
第六章 总结与展望
    6.1 总结
    6.2 展望
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式

(7)基于葫芦[7]脲的三甲基赖氨酸荧光探针与甲基化肽富集材料的设计(论文提纲范文)

摘要
abstract
1 绪论
    1.1 组蛋白的翻译后修饰
    1.2 甲基赖氨酸的分析鉴定
    1.3 具有甲基赖氨酸识别能力的合成受体
        1.3.1 杯芳烃
        1.3.2 间苯二酚
        1.3.3 柱芳烃
        1.3.4 葫芦脲
    1.4 葫芦脲家族
        1.4.1 超分子化学
        1.4.2 葫芦脲的发现
        1.4.3 葫芦脲的结构性质
        1.4.4 葫芦脲的识别性能
        1.4.5 葫芦脲衍生物的合成与应用
    1.5 本论文的提出和研究内容
2 葫芦脲及其衍生物的合成
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 实验试剂
        2.2.2 实验仪器
        2.2.3 葫芦脲同系物的合成
        2.2.4 葫芦脲同系物的分离
        2.2.5 葫芦[7]脲的单羟基化
        2.2.6 烯丙氧基葫芦[7]脲的合成
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 葫芦脲的表征
        2.3.2 单羟基葫芦[7]脲的表征
        2.3.3 烯丙氧基葫芦[7]脲的表征
    2.4 本章小结
3 基于葫芦[7]脲组合的荧光探针用于甲基赖氨酸的识别
    3.1 前言
    3.2 实验部分
        3.2.1 实验试剂与仪器
        3.2.2 实验方法
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 荧光探针的选择
        3.3.2 PH值对体系荧光强度的影响
        3.3.3 化学计量比的测定
        3.3.4 荧光探针选择性检测
        3.3.5 荧光探针的识别性能
        3.3.6 结合常数Ka的测定
        3.3.7 识别机理的研究
    3.4 本章小结
4 基于葫芦[7]脲的甲基化肽富集材料的合成
    4.1 前言
    4.2 实验部分
        4.2.1 实验仪器
        4.2.2 实验试剂药品
        4.2.3 实验步骤
    4.3 实验结果分析
        4.3.1 单体的合成分析
        4.3.2 热重分析
        4.3.3 扫描电镜分析
    4.4 本章小结
5 结论
参考文献
附录
致谢

(8)ROS介导的lncRNA NR030777与非编码RNA m6A修饰在百草枯致神经细胞线粒体自噬中的作用与机制(论文提纲范文)

略缩词表
摘要
ABSTRAC T
前言
    1.1 研究背景
    1.2 线粒体自噬异常是帕金森病重要发病机制
    1.3 线粒体分裂是损伤的线粒体发生线粒体自噬的必要条件
    1.4 长链非编码RNA是重要的自噬调控因子
    1.5 非编码RNA的m~6A修饰可能是百草枯神经毒性的重要影响因素
第一部分 DRP1 介导的线粒体分裂在PQ致神经细胞线粒体自噬过程中的作用
    2.1 引言
    2.2 材料与试剂
    2.3 方法
    2.4 结果
    2.5 讨论
第二部分 ROS介导NR_030777在PQ致神经细胞线粒体自噬增强过程中的机制
    3.1 引言
    3.2 材料与试剂
    3.3 方法
    3.4 结果
    3.5 讨论
第三部分 ROS介导lncRNA M~6A甲基化在PQ致神经细胞损伤中的作用及机制
    4.1 引言
    4.2 材料与试剂
    4.3 方法
    4.4 结果
    4.5 讨论
第四部分 PQ引起的氧化应激通过circRNA的M~6A修饰参与特定的调控基因网络
    5.1 引言
    5.2 材料与试剂
    5.3 方法
    5.4 结果
    5.5 讨论
全文总结
参考文献
文献综述 活性氧所致的线粒体分裂融合与线粒体自噬研究进展
    参考文献
附录
博士在读期间发表的论文与承担项目
致谢

(9)针对生物小分子检测的SERS基底和荧光探针设计合成及应用(论文提纲范文)

摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 拉曼光谱简介
        1.1.1 拉曼光谱的基本原理
        1.1.2 表面增强拉曼光谱(SERS)
        1.1.3 SERS增强机制
        1.1.4 Ag NPs SERS基底的简介
        1.1.5 SERS技术的应用
    1.2 荧光光谱法的简介
        1.2.1 荧光分光光度法的基本原理
        1.2.2 荧光探针
        1.2.3 荧光的检测机理
        1.2.4 荧光的应用
    1.3 几种生物标志物的简介
        1.3.1 谷胱甘肽(GSH)的检测
        1.3.2 多巴胺(DA)的检测
        1.3.3 人类蛋白血清(HSA)的简介
        1.3.4 马兜铃酸(AAs)的简介
    1.4 金属有机骨架(MOFs)的简介
        1.4.1 MOFs的制备方法
        1.4.2 MOFs的性质
        1.4.3 MOFs的应用
    1.5 本文主要研究内容
第2章 SERS和FLD双模式下对AAI的分析检测及其生物应用
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 实验仪器和药品试剂
        2.2.2 样品制备
        2.2.3 比色卡制备
        2.2.4 CCK-8测试
        2.2.5 细胞成像
        2.2.6 实验方法
        2.2.7 样品表征
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 AAI和AAT分子结构
        2.3.2 理论计算
        2.3.3 AAI和AAT光谱特性
        2.3.4 Au@Ag NPs SERS基底的表征
        2.3.5 AAI的SERS检测
        2.3.6 血清中AAI的监测
        2.3.7 Fe~(2+)与AAI的相互作用
        2.3.8 实际样品中Fe~(2+)还原AAI反应的监测
        2.3.9 细胞活性测试
    2.4 小结
第3章 GSH代谢AAI毒性的分析检测及其生物应用
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 实验仪器和试剂
        3.2.2 样品的制备
        3.2.3 细胞毒性和成像
        3.2.4 拉曼光谱实验方法
        3.2.5 分子对接分析
        3.2.6 样品表征
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 Ag@HSA NPs的表征
        3.3.2 AAI与HAS的相互作用
        3.3.3 AAI的SERS检测
        3.3.4 AAI与GSH的相互作用
        3.3.5 机理分析
        3.3.6 AAI的代谢机理
        3.3.7 细胞毒性实验
        3.3.8 动物活体成像
    3.4 小结
第4章 Fe-MIL-88NH_2对Cys的分析检测及其生物应用
    4.1 引言
    4.2 实验部分
        4.2.1 实验仪器和试剂
        4.2.2 Fe-MIL-88NH_2的合成
        4.2.3 荧光探针检测Cys
        4.2.4 CCK-8测试
        4.2.5 细胞成像
        4.2.6 比色卡制备
        4.2.7 血清样品处理
        4.2.8 样品表征
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 Fe-MIL-88NH_2的表征
        4.3.2 Fe-MIL-88NH_2对Cys的线性和选择性
        4.3.3 Fe-MIL-88NH_2与Cys的光谱性质
        4.3.4 Fe-MIL-88NH_2检测Cys的机理
        4.3.5 细胞毒性
        4.3.6 实际样品中Cys的检测
    4.4 小结
第5章 RhB@MOF-808探针用于多巴胺,Fe~(3+)的检测分析及其生物应用
    5.1 引言
    5.2 实验部分
        5.2.1 实验仪器与试剂
        5.2.2 RhB@MOF-808的合成
        5.2.3 细胞培养
        5.2.4 荧光探针检测DA和Fe~(3+)
        5.2.5 样品表征
    5.3 结果于讨论
        5.3.1 RhB@MOF-808的表征
        5.3.2 分子逻辑门
        5.3.3 细胞成像
    5.4 小结
第6章 结果与展望
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况
致谢

(10)家蚕卵胶蛋白的鉴定与功能研究(论文提纲范文)

摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 昆虫粘合剂
        1.1.1 昆虫分泌粘合剂功能
        1.1.2 昆虫分泌粘合剂特性
        1.1.3 蜘蛛粘蛋白的研究
        1.1.4 家蚕粘蛋白的研究
    1.2 昆虫分泌粘液腺体特征
    1.3 家蚕雌性生殖系统组成
    1.4 家蚕雌性粘液腺形态结构
    1.5 家蚕雌性粘液腺发育过程
    1.6 家蚕雌性粘液腺分泌蛋白研究进展
第2章 引言
    2.1 研究背景及目的意义
    2.2 研究内容
    2.3 技术路线
第3章 卵胶蛋白的鉴定及表达特征分析
    3.1 实验材料与仪器
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验仪器
        3.1.3 实验试剂与耗材
        3.1.4 主要溶液配制
    3.2 试验方法
        3.2.1 序列分析
        3.2.2 扫描电镜观察
        3.2.3 家蚕卵面洗脱卵胶
        3.2.4 BCA法测定卵胶蛋白浓度
        3.2.5 SDS-PAGE电泳
        3.2.6 RNA的提取
        3.2.7 cDNA的制备
        3.2.8 RACE
        3.2.9 荧光定量PCR
        3.2.10 Western blot检测
        3.2.11 免疫荧光定位
    3.3 结果与分析
        3.3.1 卵胶的显微镜观察
        3.3.2 卵胶蛋白的提取
        3.3.3 粘液腺转录组差异鉴定
        3.3.4 卵胶蛋白编码基因鉴定
        3.3.5 卵胶蛋白序列分析
        3.3.6 卵胶蛋白表达特征分析
        3.3.7 卵胶蛋白免疫荧光定位
    3.4 讨论
第4章 卵胶蛋白真核表达、纯化及结构分析
    4.1 实验材料与仪器试剂
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 实验仪器
        4.1.3 实验试剂与耗材
        4.1.4 主要溶液配制
    4.2 试验方法
        4.2.1 原核表达载体构建
        4.2.2 原核重组蛋白表达检测
        4.2.3 原核重组蛋白纯化与质谱鉴定
        4.2.4 真核表达载体构建
        4.2.5 真核表达感受态制备及转化
        4.2.6 真核重组蛋白表达检测
        4.2.7 真核重组蛋白纯化
        4.2.8 二级结构及热稳定性分析
        4.2.9 红外光谱分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 卵胶蛋白原核表达载体构建
        4.3.2 卵胶蛋白原核重组蛋白表达
        4.3.3 卵胶蛋白原核重组蛋白纯化
        4.3.4 卵胶蛋白原核重组蛋白质谱鉴定
        4.3.5 卵胶蛋白真核表达卵胶蛋白载体构建
        4.3.6 卵胶蛋白真核表达卵胶蛋白表达纯化
        4.3.7 卵胶蛋白圆二色谱结构分析
        4.3.8 卵胶蛋白红外光谱分析
    4.4 讨论
第5章 卵胶蛋白粘附性能与机理
    5.1 实验材料与仪器试剂
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 实验仪器与试剂
        5.1.3 主要溶液配制
    5.2 实验方法
        5.2.1 糖染色
        5.2.2 糖质谱
        5.2.3 定量PCR
        5.2.4 转谷酰胺酶孵育
        5.2.5 原子力显微镜观察
        5.2.6 搭剪切粘性测定
        5.2.7 流变学实验
    5.3 结果与分析
        5.3.1 卵胶蛋白糖基化修饰分析
        5.3.2 卵胶蛋白糖基化修饰粘合强度分析
        5.3.3 转谷酰胺酶类定量与序列比对
        5.3.4 卵胶蛋白与转谷酰胺酶孵育
        5.3.5 卵胶蛋白原子力显微镜
        5.3.6 卵胶蛋白交联粘性强度测试
        5.3.7 卵胶蛋白的流变学行为分析
    5.4 讨论
第6章 综合与结论
参考文献
在读期间发表论文及参研课题
致谢

四、细胞色素c氧化酶Cu_A 结构域蛋白的荧光猝灭研究(论文参考文献)

  • [1]双酚S致C57BL/6小鼠雄性生殖毒性的作用及机制研究[D]. 戴伟. 南华大学, 2021
  • [2]亚铜离子荧光探针的合成表征及铜离子缺乏对线粒体功能和神经发育影响的研究[D]. 魏娟迪. 河北大学, 2021(09)
  • [3]电离辐射诱导非小细胞肺癌DNA损伤与线粒体功能紊乱的应答机理研究[D]. 严俊芳. 中国科学院大学(中国科学院近代物理研究所), 2021(01)
  • [4]在呼吸链调节植物细胞死亡及光合过程中植物细胞外ATP生理学作用的研究[D]. 王建荷. 西北师范大学, 2021(12)
  • [5]肿瘤代谢物乳酸诱导B细胞分化为Breg样细胞的分子机制[D]. 林杉. 吉林大学, 2021(01)
  • [6]杂原子掺杂荧光碳点的制备及其多功能应用[D]. 杜芳芳. 山西大学, 2021(01)
  • [7]基于葫芦[7]脲的三甲基赖氨酸荧光探针与甲基化肽富集材料的设计[D]. 陈缘愿. 武汉纺织大学, 2021(01)
  • [8]ROS介导的lncRNA NR030777与非编码RNA m6A修饰在百草枯致神经细胞线粒体自噬中的作用与机制[D]. 陈能洲. 福建医科大学, 2021
  • [9]针对生物小分子检测的SERS基底和荧光探针设计合成及应用[D]. 高策. 辽宁大学, 2021
  • [10]家蚕卵胶蛋白的鉴定与功能研究[D]. 雷雨田. 西南大学, 2021(01)

标签:;  ;  ;  ;  ;  

细胞色素c氧化酶Cu_A结构域蛋白的荧光猝灭
下载Doc文档

猜你喜欢