一、人的重组促黄体生成素对小鼠卵母细胞体外受精的影响（论文文献综述）
郑凌琦[1]（2021）在《卵巢储备功能下降中医证素分析及乌萸汤对小鼠线粒体能量代谢影响》文中研究指明近些年来,随着生殖医学的发展,对卵巢储备功能下降（Decreased ovarian reserve,DOR）的研究逐渐深入。DOR患者的卵母细胞数量减少、质量下降,明确影响了女性生殖功能。线粒体能量代谢决定卵细胞质量,AMPK是细胞内调节能量代谢的关键。本研究包括临床研究和实验研究两个部分。临床研究DOR患者的中医证候特点及证素辨证规律,为临床探讨该病的病因病机及治则治法提供依据。实验研究通过线粒体能量代谢、氧化应激和AMPK/PGC-1α通路,探讨补肾调肝法之乌萸汤改善DOR小鼠卵母细胞质量的作用机制。临床部分目的:初步研究DOR患者的中医证候特征及证素辨证规律,并为探讨该病的病因病机及治则治法提供依据。方法:本研究通过问卷调查及病例回顾,制定《DOR患者信息采集表》,对DOR患者患病情况、发病诱因、病程病史、症状体征、舌脉、实验室检查、辅助检查结果等信息进行采集,并据《DOR证候统计表》、《DOR证素统计表》和《DOR证素统计权值表》对患者进行证候、证素的统计判定及相关性分析。结果:1、有64.79%的患者存在情志因素,以压力大、工作紧张为主。不孕/不育、月经不调是患者就诊的主要诉求,分别占50.70%、35.21%。74.65%的患者病程大于1年以上,56.34%患者不孕,46.48%患者有流产/手术史。2、患者月经改变主要是月经夹块（43.66%）、月经量少（39.44%）、经色暗红（29.58%）、痛经（26.76%）、月经推迟（15.49%）、月经提前（11.27%）、月经量多（11.27%）、月经错乱（9.86%）、闭经（5.63%）。其他相关症状还包括睡眠不实（23.94%）、经常便溏（22.54%）、腰膝酸软（21.13%）、倦怠乏力（19.72%）、失眠（16.90%）、经前乳胀（16.90%）、经常便秘（14.08%）、小腹痛（14.08%）、腰痛（12.68%）、四末凉（11.27%）。舌象主要是舌暗红（74.65%）、舌淡（15.49%）、舌赤（15.49%）,苔薄白（70.42%）,脉象有脉细（98.59%）、脉滑（78.87%）、脉沉（12.68%）、脉弦（8.45%）等。3、DOR患者病位证素主要为胞宫（55.43%）、肝（17.39%）、肾（14.13%）,病性证素主要为血瘀（20.81%）、气滞（18.50%）、血虚（15.03%）、阴虚（15.03%）、阳虚（12.72%）、气虚（11.56%）。同类证素常常兼夹致病,病位证素兼夹占46.55%,主要有胞宫与肝同病（19.71%）、胞宫与肾同病（14.08%）;病性证素兼夹占66.18%,主要有血瘀兼气滞（35.21%）、血瘀兼阳虚（19.71%）、气滞兼阴虚（19.71%）、血虚兼气虚（18.31%）、气虚兼阳虚（18.31%）。4、患者证素与年龄、血清b-FSH、AMH、AFC之间无统计学相关性;病位在肾的证素分布积分有随年龄增加而增大的相关趋势,但无统计学差异。结论:1、情志因素是DOR的主要病因,不孕/不育、月经不调是患者就诊的主要诉求,该病主要影响了患者的生殖功能并引起月经改变;2、DOR病位主要在胞宫、肝、肾,出现了血瘀、气滞、血虚、阴虚、阳虚、气虚等病理变化,且同类证素常常兼夹致病;3、证素与年龄、血清b-FSH、AMH、AFC之间无统计学相关性。实验部分目的:对以补肾调肝法立法组方的乌萸汤含药血清进行活性成分分析;探讨线粒体能量代谢、氧化应激和AMPK/PGC-1α通路对DOR小鼠卵巢功能的影响,并据此分析乌萸汤的疗效机制;采用未成熟卵母细胞体外成熟培养（In vitro maturation,IVM）技术,探讨乌萸汤促进体外培养卵母细胞成熟的作用机制,进而证实乌萸汤改善小鼠卵巢储备功能、增加卵巢反应性,促进卵母细胞成熟、改善卵母细胞质量的作用。方法:1、采用飞行时间质谱对SD大鼠乌萸汤含药血清进行药物代谢后活性成分及药效物质分析;2、动物实验以DOR小鼠为研究对象,经乌萸汤干预后促排卵,检测小鼠动情周期、卵巢储备功能（血清AMH及卵巢组织形态）、卵巢反应性及生殖功能（卵母细胞形态、获卵率、卵母细胞成熟率及受精率）、能量代谢及细胞增殖能力（卵母细胞ATP、线粒体含量形态、ROS含量、α-tubulin及Ki67表达量）,通过RT-PCR及Western Blot法检测 AMPK/PGC-1α通路（AMPKα、PGC-1α、NRF1、NRF2）的 mRNA 和蛋白表达;3、细胞实验采用IVM技术,对DOR小鼠卵母细胞进行乌萸汤体外干预,检测卵母细胞第一极体排出率、线粒体能量代谢（ATP含量、线粒体含量、线粒体膜电位变化）、氧化应激水平（ROS含量、SOD酶活力）及AMPK/PGC-1α通路（AMPKα、p-AMPKα、PGC-1α、NRF1、NRF2）的蛋白表达。结果:1、乌萸汤含药血清飞行时间质谱分析显示,按质谱响应强度排序,前20种活性成分依次为:亚油酸、（2S）-2-氨基-3-苯基丙酸、亮氨酸、邻苯二甲酸双（6-甲基庚基）酯、柠檬酸、亚麻酸、十六酸乙酯、棕桐油酸、3,5-二叔丁基-4-羟基苯甲醛、L-蛋氨酸-35S、2-单棕榈酸甘油、苯甲酸、芥酸酰胺、香豆素、亚油酸乙酯、杜松醇、肉豆蔻酸、硬脂酰胺、十六碳酰胺、芳-姜黄烯。2、动物实验发现DOR小鼠较正常组小鼠动情周期延长、血清AMH降低（P<0.05）,促排后获卵数、卵母细胞成熟率和受精率均降低（P<0.05）,卵母细胞线粒体含量减少、ATP含量降低、ROS含量明显升高（P<0.05）,卵巢组织α-tubulin和Ki67阳性表达率降低（P<0.05）,且卵母细胞、线粒体形态欠佳,AMPK、PGC-1α、NRF1及NRF2的mRNA含量及蛋白含量均表达下降（P<0.05）。乌萸汤可以提高DOR小鼠卵母细胞成熟率,升高血清AMH、卵母细胞ATP、线粒体和ROS含量（P<0.05）,改善卵母细胞和线粒体形态,提高卵巢组织α-tubulin和Ki67阳性表达率（P<0.05）,提高AMPK、PGC-1α、NRF1 及 NRF2 的 mRNA 含量及蛋白含量（P<0.05）。3、细胞实验发现DOR小鼠卵母细胞第一极体排出率下降,线粒体数目减少、膜电位变化减弱（P<0.05）,产生的ATP减少、ROS增加、SOD酶活性降低（P<0.05）,AMPKα、p-AMPKα、PGC-1α、NRF1蛋白表达降低（P<0.05）;乌萸汤干预后的DOR小鼠卵母细胞第一极体排出率、线粒体数量、产生的ATP含量、SOD酶活性均有明显升高（P<0.05）,AMPKα、PGC-1α、NRF1蛋白表达量有所升高（P<0.05）,但卵母细胞线粒体膜电位、ROS含量没有得到改善（P>0.05）。结论:1、乌萸汤含药血清内有效活性成分中脂肪酸类物质质量占比最高,提示乌萸汤含药血清中活性成分主要用来提供能量来源,促进能量代谢。2、动物实验证实乌萸汤能改善DOR小鼠卵巢储备功能及卵巢反应性,提高卵母细胞质量、增强小鼠生殖能力。3、细胞实验证实乌萸汤能促进DOR小鼠卵母细胞的体外成熟、改善卵细胞质量。4、乌萸汤对DOR小鼠的治疗机制之一是通过改善线粒体能量代谢及氧化应激、调控AMPK/PGC-1 α通路实现的。
张景锋,郝京京,徐秋良,朱宽佑,牛晖,张长兴[2]（2021）在《多种因素对小鼠卵母细胞体外受精效果影响的分析》文中研究表明为了探讨不同精子获能时间,精卵孵育时间,精子密度以及颗粒细胞对小鼠卵母细胞体外受精的影响,从而达到对卵母细胞体外受精体系优化的目的。比较了精子获能时间分别为40 min、60 min、80 min试验组的受精卵卵裂率。结果表明,带颗粒细胞卵母细胞（COCs）在三个试验组中卵裂率无显着差异,不带颗粒细胞卵母细胞（NO）在精子获能时间为60 min时卵裂率最高;比较了精卵孵育时间分别为2 h、4 h、6 h、8 h试验组的受精卵卵裂率,结果显示COCs精卵孵育时间2 h试验组的效果最好,NO孵育时间为6 h试验组的效果最好;比较了精子密度分别为3×105/mL,3×106/mL,3×107/mL试验组受精卵卵裂率,结果显示COCs和NO均为3×106/mL试验组卵裂效果最好;比较COCs和NO的受精卵卵裂率,结果显示COCs与NO之间存在显着差异（P<0.05）,裸卵卵裂效果显着优于颗粒细胞卵裂效果。试验结果表明,在卵母细胞体外受精过程中,精子获能时间60 min,精子密度为3×106/mL,精卵孵育6 h,培养24 h后卵裂率最高。
王如芯[3]（2021）在《滋阴补阳方序贯对DOR患者辅助生殖助孕结局影响的临床观察》文中提出目的:观察滋阴补阳方序贯对卵巢储备功能减退（diminished ovarian reserve,DOR）患者行辅助生殖技术助孕结局的影响,探讨在DOR人群行辅助生殖技术助孕治疗中应用滋阴补阳方序贯的可行性和有效性。方法:1.对2016年1月-2020年4月在南京中医药大学附属医院行宫腔内夫精人工授精（IUI）的符合纳入标准的DOR患者共92周期进行回顾性分析。治疗方案的不同作为分组依据,观察组:中药+IUI组:诱导排卵+IUI联合滋阴补阳方序贯治疗;对照组:IUI组:常规进行诱导排卵+IUI。通过相关统计学分析,对比两组基础性激素、抗苗勒式管激素（AMH）、窦卵泡计数（AFC）、促性腺激素（Gn）总量、排卵数、扳机日内膜及妊娠率等。探讨在DOR患者行IUI中运用滋阴补阳方序贯的临床疗效。2.对2016年1月-2020年4月在南京中医药大学附属医院行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的符合纳入标准的DOR患者共179周期进行回顾性分析。治疗方案的不同作为分组依据,观察组:中药+IVF组:IVF-ET（拮抗剂方案）联合滋阴补阳方序贯治疗;对照组:IVF组:常规进行IVF-ET（拮抗剂方案）。通过相关统计学分析,对比两组基础性激素、抗苗勒式管激素（AMH）、窦卵泡计数（AFC）、促性腺激素（Gn）时间和总量、扳机日雌二醇（E2）、获卵数、MII卵数、受精率、卵裂率、可移植胚胎数、优质胚胎数、鲜胚移植率及妊娠率等。探讨在DOR患者行IVF-ET（拮抗剂方案）中运用滋阴补阳方序贯的临床疗效。结果:1.滋阴补阳方序贯对DOR患者行人工授精结局的影响:观察组促排卵过程中使用促性腺激素总量显着低于对照组,A型子宫内膜占比、排卵数、妊娠率及活产率均高于对照组,有统计学意义（P<0.05）;观察组子宫内膜厚度略低于对照组,差异无统计学意义（P>0.05）。2.滋阴补阳方序贯对DOR患者行体外受精-胚胎移植（拮抗剂方案）结局的影响:观察组扳机日E2水平、获卵数、MII卵数、卵裂率、可移植胚胎数、优质胚胎数均显着高于对照组,有统计学意义（P<0.05）;鲜胚移植率及临床妊娠率、活产率均优于对照组,无统计学意义（P>0.05）;观察组Gn总量及天数、受精率略高于对照组,无统计学意义（P>0.05）。结论:滋阴补阳方序贯在卵巢储备功能减退患者行辅助生殖助孕治疗前及过程中联合应用,在诱导排卵+人工授精中能够显着减少Gn用量,增加排卵数,改善子宫内膜形态,提高妊娠率;在体外受精-胚胎移植（拮抗剂方案）中应用,能够提升扳机日雌二醇水平,增加获卵数、成熟卵子数及胚胎数,提高胚胎质量及发育潜力,具有临床推广应用价值。
程蕊[4]（2020）在《基于“嫉妒不孕”理论探讨心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平及早期胚胎发育的影响》文中进行了进一步梳理目的（1）通过观察不同程度心理应激刺激下雌性小鼠体重、旷场试验及糖水偏好试验,证实心理应激小鼠模型制备成功,促排卵收集卵母细胞,检测卵母细胞内活性氧（ROS）浓度、超氧化物歧化酶2（SOD2）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）m RNA水平,以研究不同程度心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平的影响;（2）小鼠体内受精,收集受精卵进行体外培养,通过检测不同程度心理应激刺激后小鼠早期胚胎2细胞率、8细胞率、囊胚形成率、囊胚孵出率、囊胚分级,以及囊胚凋亡程度,以研究不同程度心理应激对小鼠早期胚胎发育的影响。基于心理应激与中医肝郁理论的紧密联系,为临床从肝郁-心理应激角度治疗女性生殖功能下降提供新思路。方法实验一心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平的研究选取4～5周龄健康雌性未孕的ICR小鼠80只,随机分为4组,即正常组,心理应激强、中、弱刺激组,每组20只。正常组不给予任何干预,实验组按照心理应激模型制备方法,给予不同程度且不可预知性刺激,连续刺激6周。刺激前后分别记录各组小鼠的体重;刺激后各组小鼠在旷场中随机5分钟内小鼠的静止时间、运动时间、运动总距离、中央活动时间、外周活动时间的变化;以及刺激后各组小鼠的糖水偏好指数,以证实心理应激小鼠模型制备成功。造模成功后,对小鼠促排卵获取卵母细胞,采用化学荧光法测定小鼠卵母细胞内ROS浓度,应用实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定卵母细胞内SOD2、CAT、GSH-Px三种抗氧化酶m RNA水平,以研究不同程度心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平的影响。实验二心理应激对小鼠早期胚胎发育的研究根据实验一心理应激小鼠造模成功后,进行体内受精,次日晨检阴栓后收集并处理受精卵,显微镜下观察各组小鼠的受精卵数、2细胞胚胎数、8细胞胚胎数、囊胚数及形态评分,记录各组小鼠早期胚胎2细胞率、8细胞率、囊胚形成率、囊胚孵出率、囊胚分级,采用原位脱氧核苷酸末端转移酶介导的d UTP缺口末端标记法（TUNEL）测定各组小鼠囊胚的凋亡程度,以研究不同程度心理应激对小鼠早期胚胎发育的影响。结果所有实验数据均采用SPSS24.0统计软件进行分析。定量资料以均数±标准差（<sub>x±s）表示,方差齐时组间比较采用单因素方差分析（one-way anova）,组间两两比较采用LSD检验,方差不齐时组间比较采用Welch’s anova,组间两两比较采用Games-Howell检验。等级资料组间比较及组间两两比较采用Kruskal-Wallis H检验。P<0.05为差异有统计学意义。实验一1.刺激前后各组小鼠体重的比较刺激前,4组小鼠体重比较,差异无统计学意义（P>0.05）;刺激6周后,心理应激强、中、弱刺激组小鼠体重均低于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;中、弱刺激组小鼠体重高于强刺激组,差异有统计学意义（P<0.05）。2.刺激6周后各组小鼠旷场试验结果的比较刺激6周后,心理应激强、中、弱刺激组小鼠的静止时间和外周活动时间均高于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;中、弱刺激组小鼠的静止时间低于强刺激组,差异有统计学意义（P<0.05）;刺激6周后,心理应激强、中、弱刺激组小鼠的运动时间、中央活动时间和运动总距离均低于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;中、弱刺激组小鼠的运动时间和运动总距离高于强刺激组,差异有统计学意义（P<0.05）;中刺激组小鼠的中央活动时间高于强刺激组,差异有统计学意义（P<0.05）。3.刺激6周后各组小鼠糖水偏好指数的比较刺激6周后,心理应激强、中、弱刺激组小鼠的糖水偏好指数均低于正常组,差异具有统计学意义（P<0.05）。4.各组小鼠卵母细胞内ROS浓度的比较心理应激强、中、弱刺激组小鼠卵母细胞内ROS浓度均高于正常组,差异具有统计学意义（P<0.05）;且随着刺激强度的增加,小鼠卵母细胞内ROS浓度升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。5.各组小鼠卵母细胞内SOD2、CAT、GSH-Px表达水平的比较心理应激强、中、弱刺激组小鼠卵母细胞内SOD2、CAT、GSH-Px表达水平均低于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;且随着刺激强度的增加,小鼠卵母细胞内SOD2、CAT、GSH-Px表达水平降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。实验二1.各组小鼠早期胚胎发育的比较4组小鼠的2细胞率、8细胞率和囊胚形成率比较,差异有统计学意义（P<0.05）。两两比较显示,心理应激强刺激组小鼠的2细胞率低于正常组,强、中刺激组小鼠的8细胞率、囊胚形成率均低于正常组,差异均有统计学意义（P<0.05）;中、弱刺激组小鼠的2细胞率、8细胞率、囊胚形成率均高于强刺激组,差异有统计学意义（P<0.05）;4组小鼠的囊胚孵出率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。2.各组小鼠囊胚分级结果的比较4组小鼠的囊胚分级比较,差异有统计学意义（P<0.05）。正常组、心理应激强、中刺激组小鼠的囊胚均以4级为主,弱刺激组小鼠的囊胚以2级和4级为主。两两比较显示,强、中刺激组小鼠的囊胚分级与正常组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。3.各组小鼠囊胚凋亡程度的比较心理应激强、中、弱刺激组小鼠的囊胚凋亡荧光强度均高于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）;且随着刺激强度的增加,小鼠的囊胚凋亡荧光强度增强,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论1.心理应激导致小鼠卵母细胞内ROS水平升高,引发卵母细胞内氧化应激反应,损伤卵母细胞的抗氧化系统,降低卵母细胞内SOD2、CAT、GSH-Px三种抗氧化酶的含量,从而损害卵母细胞功能。2.心理应激导致小鼠早期胚胎发育能力减退,降低小鼠早期胚胎2细胞率、8细胞率及囊胚形成率,影响各级囊胚占比,进而影响囊胚发育进程,并增强囊胚凋亡程度,从而使胚胎质量下降。3.心理应激造成卵母细胞氧化应激损伤,降低早期胚胎发育潜能,进而导致不孕症的发生,与中医“嫉妒不孕”学说存在共通性。通过此研究为临床从肝郁-心理应激角度治疗女性不孕症提供新的思路和方法,并为中医“情志致病”理论在现代医学模式下的推广应用提供科学依据。
夏浩珈[5]（2020）在《长方案添加外源性黄体生成素对高龄不孕女性行常规IVF-ET助孕妊娠结局的影响》文中提出目的探讨外源性黄体生成素添加对采用黄体期长效长方案行常规体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET）术助孕的高龄女性患者妊娠结局的影响。方法回顾性分析2015年1月至2019年4月在广州医科大学附属第三医院生殖中心采用黄体期长效长方案促排卵拟行IVF-ET的1051例（1051个周期）高龄（年龄≥35岁）不孕女性患者的临床资料。根据是否在促排卵过程中进行外源性黄体生成素添加分为两组,I组为无外源性黄体生成素添加组（n=333）,II组为外源性黄体生成素添加组（n=718）。其次,根据黄体生成素的添加情况将II组中的患者分为三个亚组进行比较:1组为添加人绝经促性腺激素（human menopausal gonadotropin,HMG）组,该组患者在促排卵方案中添加卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone,FSH）及HMG（n=323）;2组为添加重组黄体生成素（recombinant luteinizing hormone,r-LH）组,在促排卵过程中添加FSH及r-LH（n=222）;3组为联合用药组,促排卵过程中使用了FSH、HMG以及r-LH（n=173）。比较各组患者的基础资料、促排卵情况、实验室结果及临床妊娠结局的差异。结果1基础资料显示:I组和II组之间在年龄、体重指数（body mass index,BMI）、基础雌激素（base estradiol,b E2）、基础卵泡刺激素/基础黄体生成素（base follicle-stimulating hormone/base luteinizing hormone,b FSH/b LH）、抗苗勒氏管激素（anti-mullerian hormone,AMH）上无统计学差异（P>0.05）。2促排卵情况及实验室结果显示:I组促排卵第7天的外周血LH值显着高于II组（P<0.05）。II组的Gn使用天数及Gn使用总量显着高于I组（P<0.05）;在II组的亚组中,2组Gn使用时间上及总量均显着低于1组和3组（P<0.05）。II组HCG日LH水平显着低于I组（P<0.05）;HCG日内膜厚度和HCG日E2在I组、II组间均无统计学差异（P>0.05）;II组的各亚组间HCG日内膜厚度无统计学差异（P>0.05）,3组的HCG日E2显着低于2组（P<0.05）但与1组之间无统计学差异（P>0.05）,1组和2组间HCG日E2无统计学差异（P>0.05）。I组的获卵数显着高于II组（P<0.05）,但两组的可利用胚胎率上无统计学差异（P>0.05）。在II组的亚组中,2组的可利用胚胎率显着高于1组（P<0.05）,但与3组无统计学差异。1组和3组在可利用胚胎率上无统计学差异（P>0.05）。II组的各亚组间在获卵数上均无统计学差异（P>0.05）。3临床妊娠结局资料显示:I组和II组及II组亚组之间的临床妊娠率、活产率及流产率均无统计学差异（P>0.05）。结论（1）高龄女性在使用黄体期长效长方案促排卵过程中出现低LH时进行外源性黄体生成素添加可能会获得与其他正常高龄女性相似的临床妊娠结局。（2）采用r-LH作为外源性黄体生成素添加方案可能会缩短促排卵Gn使用时间和药量,增加可利用胚胎率。
徐德军[6]（2020）在《SIRT2对牛卵母细胞成熟与老化的作用及其机制》文中研究指明作为极为重要的细胞代谢和应激反应传感器,Sirtuins（SIRT1-7）家族在繁殖上的功能日益受到研究者关注。已有证据表明SIRT2在体细胞的有丝分裂、能量代谢及衰老等方面具有重要作用,而有关SIRT2与卵母细胞成熟、老化的报道较少,其作用机制更是不明确。基于此,本研究利用小分子抑制剂、si RNA干扰、免疫组织化学、细胞免疫荧光、ELISA、RT-q PCR、Western blot和免疫共沉淀等技术与方法,解析SIRT2在牛卵巢组织和卵母细胞亚细胞的定位,及其在卵子成熟、胚胎发育和老化过程中的表达规律;揭示SIRT2对牛卵母细胞核成熟、胞质成熟和老化的作用;明确SIRT2对牛卵丘-卵母细胞间隙连接通讯和卵巢颗粒细胞类固醇激素合成的作用及其调节途径。以期系统阐明SIRT2调控牛卵母细胞成熟、老化的分子机制,为提高牛卵母细胞质量、延缓卵母细胞老化提供科学依据。本研究获得以下主要研究结果和结论:1.SIRT1-7均在牛卵母细胞中表达,其中SIRT1和SIRT2的表达水平最高。除SIRT7之外,Sirtuins家族的m RNA表达水平在牛卵母细胞老化过程中以时间依赖的方式逐渐降低。特别是在牛卵母细胞体外老化48 h后,SIRT1、SIRT2和SIRT5的基因表达水平极显着低于新鲜成熟的卵母细胞（P<0.01）。进一步研究显示SIRT2在牛卵巢颗粒细胞、卵母细胞、卵丘细胞中均高表达,并且SIRT2存在于牛卵母细胞的细胞质和核。此外,SIRT2在牛卵母细胞的减数分裂阶段表达水平最高,而在成熟后发育至囊胚阶段,其表达水平逐渐下调。这些结果表明,SIRT2可能参与牛卵母细胞的减数分裂和老化过程。2.在牛卵母细胞体外成熟培养过程中,添加5μM Sir Real2（SIRT2特异性抑制剂）,几乎完全抑制了SIRT2的去乙酰化酶活性,但不影响牛卵母细胞的活力。SIRT2失活显着抑制了牛卵母细胞的核成熟和胚胎发育（P<0.05）,而SIRT1失活对核成熟无明显作用。共聚焦扫描和定量分析揭示,SIRT2失活显着增加了牛卵母细胞的纺锤体/染色体缺陷,并导致α-tubulin和H4K16高度乙酰化（P<0.05）。更为重要的是,SIRT2失活通过扰乱牛卵母细胞成熟过程中皮质颗粒、内质网和线粒体等细胞器的重新分布（P<0.05）,进而阻碍了胞质成熟。同时,SIRT2失活导致胞内ROS增加、ATP产生下降和线粒体膜电位降低（P<0.05）,引起线粒体功能障碍。进一步分析揭示,SIRT2失活异常下调TFAM和Mfn2表达、上调DRP1表达（P<0.05）,从而扰乱线粒体的生物合成和动力学。SIRT2失活通过增加Fox O3a乙酰化水平来抑制Fox O3a的核转位,进而下调Fox O3a依赖的抗氧化基因SOD2、Cat的表达（P<0.05）。这些发现证明了,SIRT2介导的去乙酰化酶活性是牛卵母细胞核和胞质成熟所必需的。3.在牛卵母细胞体外成熟过程中,抑制SIRT2的活性干扰了卵丘-卵母细胞的间隙连接通讯（P<0.05）。SIRT2失活促进了Cx43的磷酸化修饰,并上调了MEK/ERK信号途径（P<0.05）。有意思的是,SIRT2失活介导的Cx43磷酸化作用能够被MEK1/2抑制剂所抵消。同时SIRT2失活上调了MEK1/2的乙酰化水平,这表明SIRT2通过MEK/ERK信号调节Cx43磷酸化。在功能上,下调MEK/ERK信号可以部分减缓由SIRT2失活引起的间隙连接通讯闭合。进一步分析显示,SIRT2失活通过上调Cx43乙酰化水平来阻止Cx43在牛卵丘细胞膜和卵母细胞透明带上的定位。这些证据揭示了SIRT2促进牛卵丘-卵母细胞间隙连接通讯的作用可能依赖于下调Cx43的磷酸化和乙酰化修饰。4.SIRT2失活显着抑制了牛卵巢颗粒细胞的雌二醇、睾酮分泌,促进了孕酮分泌（P<0.05）。基因表达定量分析发现,SIRT2失活显着下调了ESRs、AR表达,上调PGR表达（P<0.05）。SIRT2失活或SIRT2敲低（SIRT2-KD）均显着抑制了PPARγ、LXRα和LXRβ的蛋白水平,促进了PPARα的蛋白水平（P<0.05）。免疫共沉淀分析显示,SIRT2-KD明显增加了PPARα的乙酰化水平（P<0.05）,却对PPARγ的乙酰化水平无显着影响,这表明SIRT2可能通过去乙酰化途径调节PPARα的蛋白稳定性。进一步的研究发现,PPARα激活或PPARγ失活能够模仿SIRT2-KD对LXRα表达和LXRα/RXR异源二聚体形成的抑制作用。与SIRT2-KD扰乱类固醇激素合成稳态的现象类似,PPARα激活或PPARγ失活均下调了雌二醇、睾酮合成,上调了孕酮合成（P<0.05）。值得注意的是,LXRα激活可以抵消SIRT2-KD、PPARα激活或PPARγ失活对类固醇激素分泌的调节作用。LXRα激活也可以废除SIRT2-KD、PPARα激活或PPARγ失活对St AR、CYP17和aromatase表达下调,CYP11A1表达上调的作用。这些结果揭示了,SIRT2通过LXRα促进雌二醇生物合成酶的表达、抑制孕酮合成酶的表达,从而调节类固醇激素的生物合成。5.抑制SIRT2的活性显着增加了老化牛卵母细胞的激活率、胞质碎片和纺锤体缺陷（P<0.05）,进而加快了牛卵母细胞的老化进程。SIRT2失活导致老化牛卵母细胞出现更高ROS水平、异常线粒体分布、低ATP产生和丢失线粒体膜电位（P<0.05）,从而加重老化牛卵母细胞的氧化应激和线粒体功能障碍。随着牛卵母细胞的老化,SIRT2表达也显着降低（P<0.05）。同时,SIRT2的表达下调或活性抑制均异常上调了牛卵母细胞的自噬水平（P<0.05）。通过早期细胞凋亡分析发现,牛卵母细胞的老化伴随着细胞凋亡,抑制SIRT2的活性增加了老化卵母细胞的凋亡率（P<0.05）。进一步研究揭示,SIRT2失活或自噬异常上调均显着增加了老化卵母细胞的caspase-3活性（P<0.05）,而自噬下调可以缓解SIRT2失活对caspase-3活性的促进作用。这些结果表明SIRT2下调是牛卵母细胞老化的一个关键机制。综上,SIRT2通过对α-tubulin、H4K16和Fox O3a等靶蛋白去乙酰化作用,调节牛卵母细胞减数分裂过程中纺锤体形成、染色体排列、线粒体功能和氧化还原稳态,进而促进核和胞质成熟。此外,SIRT2通过调节Cx43的乙酰化和磷酸化修饰,促进牛卵丘-卵母细胞间隙连接的通讯,并通过PPARs/LXRα途径刺激牛卵巢颗粒细胞雌二醇的分泌,从而参与牛卵母细胞的发育与胞质成熟。老化诱导的SIRT2下调导致纺锤体缺陷、氧化应激和线粒体功能障碍,进一步加速了牛卵母细胞的老化进程,并过度激活自噬诱导的细胞死亡。这些发现最终阐明SIRT2在牛卵母细胞的发育成熟和老化过程中的生物学功能。
于潇[7]（2020）在《血脂异常对输卵管性不孕患者新鲜移植周期助孕结局的影响》文中研究指明我国成人血脂异常的患病率高达40.40%,血脂异常不仅是动脉粥样硬化性心血管疾病的高危因素,也会对女性生殖系统功能产生不良影响。研究表明,血脂异常可能通过诱导卵母细胞内质网应激及改变卵泡液代谢微环境,影响卵母细胞质量及胚胎发育潜能,并最终对辅助生殖（ART）结局产生负面影响。体重指数（BMI）是国际常用的衡量肥胖程度的标准,肥胖患者体内脂肪酸蓄积会分泌脂肪因子,使体内促炎因子表达升高,抗炎因子表达减少,引起生殖细胞的破坏及慢性炎症状态,并且与血脂代谢异常、胰岛素抵抗等有关。目前关于血脂异常对ART结局影响的研究主要集中在多囊卵巢综合征（PCOS）人群,因该类患者本身存在高雄激素血症等内分泌异常,会对研究结果产生干扰。因此本课题选择单纯输卵管性不孕患者为研究对象,分析血脂异常对新鲜移植周期结局的影响,并比较不同BMI水平的血脂异常患者新鲜移植周期结局。第一部分:血脂异常对输卵管性不孕患者新鲜移植周期结局的影响目的:分析血脂异常对年龄小于35岁、卵巢功能正常的输卵管性不孕患者新鲜移植周期助孕结局的影响。方法:回顾性纳入2017年1月至2018年12月在兰州大学第一医院生殖医学专科医院首次体外受精-胚胎移植（IVF-ET）/卵胞浆内单精子注射术（ICSI）助孕并行新鲜周期胚胎移植、年龄小于35岁、卵巢功能正常的输卵管性不孕患者1002例。根据是否合并血脂异常分为两组,其中血脂异常组415例,血脂正常组587例。比较两组患者的一般情况、促排卵结局及临床妊娠结局,并分析总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）及BMI与促排卵结局及临床妊娠结局的相关性。结果:1.与血脂正常组相比,血脂异常组的可移植胚胎数[（6.33±3.87）vs.（7.07±3.78）]、优质胚胎数[（2.78±2.45）vs.（3.96±2.94）]、卵子利用率（52.56%vs.57.57%）、优质胚胎率（40.61%vs.54.14%）均显着降低（P<0.05）。2.与血脂正常组相比,血脂异常组新鲜周期移植的胚胎D2碎片率（3.01%vs.1.74%）、D3碎片率（6.92%vs.4.92%）均显着增高（P<0.05）,D3细胞数[（7.82±1.37）vs.（8.03±1.18）]显着减少（P<0.05）。3.与血脂正常组相比,血脂异常组的临床妊娠率（50.60%vs.62.18%）、胚胎种植率（32.25%vs.43.09%）、活产率（37.11%vs.55.20%）均显着降低（P<0.05）,早期流产率（24.76%vs.10.14%）显着升高（P<0.05）。4.血脂水平及BMI与促排卵结局的Pearson相关分析结果显示,TC与优质胚胎数、卵子利用率、优质胚胎率均呈负相关（r=-0.136,-0.083,-0.173;P<0.05）;TG与优质胚胎数、优质胚胎率均呈负相关（r=-0.077,-0.099;P<0.05）;LDL与可移植胚胎数、优质胚胎数、卵子利用率、优质胚胎率均呈负相关（r=-0.071,-0.123,-0.116,-0.144;P<0.05）;BMI与Gn总量呈正相关（r=0.106,P<0.05）、与优质胚胎数、卵子利用率、优质胚胎率均呈负相关（r=-0.064,-0.088,-0.097;P<0.05）。5.血脂水平及BMI与移植胚胎形态学参数的Pearson相关分析结果显示,TC与D2碎片率、D3碎片率均呈正相关（r=0.008,0.095;P<0.05）;TG与D2细胞数、D3细胞数均呈负相关（r=-0.049,-0.046;P<0.05）;LDL与D2碎片率、D3碎片率均呈正相关（r=0.101,0.117;P<0.05）,与D3细胞数呈负相关（r=-0.045,P<0.05）;BMI与D2细胞数、D3细胞数均呈负相关（r=-0.062,-0.047;P<0.05）。6.血脂水平及BMI与临床妊娠结局的Spearman相关分析结果显示,TC与活产呈负相关（r=-0.103,P<0.05）,与早期流产呈正相关（r=0.143,P<0.05）;TG与临床妊娠、活产均呈负相关（r=-0.077,-0.115;P<0.05）,与早期流产呈正相关（r=0.129,P<0.05）;LDL与活产呈负相关（r=-0.092,P<0.05）,与早期流产呈正相关（r=0.123,P<0.05）;BMI与早期流产呈正相关（r=0.114,P<0.05）。结论:对于年龄小于35岁、卵巢功能正常的输卵管性不孕患者,合并血脂异常会影响IVF/ICSI周期获得的胚胎数量及质量,并对新鲜移植周期的胚胎种植、临床妊娠结局均产生不利影响。因此促排卵治疗前,要关注患者的血脂指标（尤其对BMI正常的患者容易忽视）,对异常的血脂指标及时干预以减少其对助孕结局产生的潜在不良影响。第二部分:不同BMI水平的血脂异常患者新鲜移植周期结局的比较目的:比较不同BMI水平的血脂异常、输卵性不孕患者新鲜移植周期的助孕结局。方法:第一部分纳入的血脂异常组的415例患者,根据BMI水平分为三组,其中体重正常组（BMI<24kg/m2）248例,超重组（24≤BMI<28kg/m2）137例,肥胖组（BMI≥28kg/m2）30例。比较三组患者的一般情况、促排卵结局及临床妊娠结局。结果:1.在体重正常组、超重组、肥胖组三组中,随着BMI升高,Gn总量逐渐增加[（3566.17±1496.01）vs.（3647.34±1504.35）vs.（4212.50±1842.44）],Gn天数逐渐延长[（13.39±1.98）vs.（13.47±2.31）vs.（14.03±2.48）],但均无显着性差异（P>0.05）;优质胚胎率（41.87%vs.39.27%vs.36.37%）及卵子利用率（53.38%vs.52.30%vs.46.96%）逐渐降低,也无显着性差异（P>0.05）。2.在体重正常组、超重组、肥胖组三组中,临床妊娠率（51.21%vs.50.36%vs.46.67%）、活产率（38.31%vs.37.23%vs.26.67%）逐渐降低,早期流产率（22.83%vs.24.64%vs.42.86%）逐渐升高,也无显着性差异（P>0.05）。结论:血脂异常不仅可以发生在超重及肥胖人群,BMI正常人群中也可发生。对于合并血脂异常的输卵管性不孕患者,不同BMI水平对IVF/ICSI新鲜移植周期的促排卵结局及临床妊娠结局并未产生影响。
张志鹏[8]（2019）在《马胚胎移植及克隆胚体外构建技术》文中研究说明我国是世界马业大国,但并非马业强国。马存栏量虽大,却在现代马术的国际竞技场上未见身影。现代马术用马的匮乏,成为我国马产业发展的重要制约因素。胚胎移植技术已成熟应用于牛、羊等家畜的繁育生产,但马胚胎移植的各环节技术尚不完全成熟,相关研究与应用与马产业的发展不相适应。因此,本研究针对我国马业发展的技术需求,开展其发情鉴定、人工授精、非手术法胚胎采集和胚胎移植等马胚胎移植关键生物技术的研究。在此基础上,开展了卵巢的运输、卵母细胞采集、卵母细胞体外成熟、体细胞系的建立、细胞融合、体细胞核移植等马克隆胚胎体外构建技术的研究,其研究结果如下:1、母马发情的准确鉴别。摸索了 3种发情方法,发现B超检查法鉴定母马发情的成功率达到100%,显着高于外部观察法（47.3%）和直肠触摸法（85%）,P<0.05。2、母马发情的有效诱导。建立了母马发情和同期发情的有效诱导方法,母马排卵第5 d,肌肉注射0.2 mg PGF2α后的发情率为63.2%,高于肌肉注射1500 IU PMSG和自然发情的比例（47.2%、0）,P<0.05。有效的诱导6个品种马的发情,发情周期显着缩短,分别为 11.7±3.1、12.2±2.8、11.5±1.9、12.8±2.1、11.8±2.5 和 12.7±2.3 d。注射0.2 mg黄体酮和PGF2α方法母马的同期发情率为76.4±2.6%,显着高于单纯注射黄体酮组的62.8±2.1%和对照组的16.7± 1.2%,P<0.05。3、母马排卵的有效调控。建立了母马排卵的有效调控方法,关键在卵泡发育、激素类型和剂量的选择。当卵泡直径≥30 mm,静脉注射1500 IU hCG,48 h内的排卵比例为84.3%,显着高于FSH+LH组（31.6%）和对照组（15.8%）（P<0.05）,6 个品种马分别在 41.2±2.3、43.9±2.7、42.3±1.6、39.7±3.1、40.9±2.9 和 39.8±2.4 h 时排卵。发现左侧卵巢的排卵率比右侧的高,59.5%排卵发生在左侧,高于右侧的40.5%（P<0.05）。4、马精液的保存与授精。建立了马精液的常温、低温和超低温保存的方法,常温（22℃）保存20 min,HN-SD（本实验室制备）和INRA96（IMV商品）组的精子活率分别为65.6±2.3%和68.6±1.2%,显着高于脱脂牛奶组的53.5±3.2%（P<0.05）。低温（0～4℃）保存24 h,HN-SD和INRA96组的精子活率分别是65.5±2.3%和67.7±2.1%,高于脱脂牛奶组的49.5±3.4%（P<0.05）。液氮（-196℃）保存精液1d后,INRA96组的精子活率为44.3±2.2%,HN-SD组为36.2±2.3%,高于脱脂牛奶组的21.3±1.8%（P<0.05）。摸索出了最适的输精部位,发现输精的不同部位对母马受胎率的影响不同,子宫角输精的母马情期受胎率为85.4%,显着高于子宫输精（78.4%）和自然交配（25%）（P<0.05）。保鲜精液的情期受胎率为61.1%,低于鲜精的84%,但高于冷冻精液的40%（P<0.05）。5、马胚胎的非手术法采集。建立了马胚胎的非手术采集方法,选取乳酸钠林格注射液作为冲胚液,在马受孕后5～8 d进行冲胚,采集的时间是关键环节。本研究胚胎采集成功率为72.8%。不同时间采集胚胎的成功率不同,5月份的胚胎采集成功率最高,为88.9%,10月份成功率最低,为42.9%。桑椹胚采集成功率为70.6%。6、马胚胎的非手术法移植。建立了马胚胎的非手术移植方法,选择排卵后4～7 d的受体马,选取IMV胚胎保存液进行子宫体移植。试验组HN-EHM和IMV胚胎保存液的胚胎移植成功率分别为80%和83.3%,高于乳酸钠林格注射液试验组（75%）。胚胎低温保存24 h后,移植成功率为60%。桑椹胚移植成功率为90.9%。7、马卵巢的运输。本试验获得马卵巢体外运输过程中保存液的合适温度,夏季为33～37℃,冬季为30～35℃。8、马卵丘-卵母细胞复合体（COCs）的采集。抽吸法+切割法的采集成功率最高,为73.3%,高于切割法（64.6%）和抽吸法（54.8%）的成功率（P<0.05）。发现繁殖季节的卵巢中大、中、小卵泡的比例分别是20.9%、51%和28.1%,非繁殖季节的比例分别是3.1%、51.9%和45%。9、马卵母细胞的体外成熟。摸索了马卵母细胞体外培养成熟的条件,5%CO2、37℃、饱和湿度培养,紧凑型（Cp）卵母细胞培养32～36 h,扩展型（Ex）培养24～28 h。结果发现不同类型的COC其成熟率不同,不同繁殖季节,卵母细胞的成熟率也不同。繁殖季节,马扩展型（Ex）的成熟率为58.6%,高于紧凑型（Cp）的成熟率36.5%（P<0.05）,非繁殖季节,成熟率分别为29.1%和49.2%（P<0.05）。添加ActA能提高紧凑型（Cp）卵母细胞的成熟率,在繁殖、非繁殖季节卵母细胞成熟率分别达到 47.3%和 42.2%。10、马卵母细胞的孤雌激活。摸索了马卵母细胞孤雌激活的条件,本试验选取离子霉素进行孤雌激活,结果发现ActA促进马Cp型卵母细胞孤雌激活胚胎的发育,2-细胞（57.9%）、4-细胞（36.8%）的比例分别高于对照组（P<0.05）。不同的卵母细胞类型对卵母细胞孤雌激活后胚胎的发育没有影响。在马的繁殖季节,孤雌激活胚胎发育到2-细胞期、4-细胞、8-细胞和桑椹胚的比例分别是50%（42/80）、35.7%（30/84）、13.1%（11/84）和6%（5/84）,高于非繁殖季节同时期的比例,（P<0.05）。在马的非繁殖季节,孤雌激活的胚胎与颗粒细胞共培养后,发育到2-细胞、4-细胞的比例分别为41.7%和25%,显着高于对照组的比例（P<0.05）,获得1枚桑椹胚（2.8%）。11、马体细胞克隆胚的构建及体外培养。摸索了不同融合电压对重构胚胎融合率的影响,克隆胚胎置于38.5℃、5%C02、饱和湿度培养箱中培养,结果发现采用140 V,20μs,融合2次,重构胚胎融合成功率达到72%。马驹成纤维细胞的融合率、2-细胞,4-8细胞和桑椹胚的比例分别为77.4%、41.5%、33.9%和15.1%,高于成年马体细胞的相应比率（P<0.05）。用非手术法将构建好的8枚桑椹胚移植到受体马的子宫体中,没有获得克隆马。通过上述研究,本研究获得成熟的马胚胎移植技术体系,为实现规范化、商业化、市场化的繁殖现代马术用马提供的技术方案。在此基础上,研究体外诱导成熟的马卵母细胞构建克隆胚胎的技术,为我国突破马克隆技术奠定基础。
李安吉[9]（2019）在《子宫内膜异位症相关性不孕症卵母细胞质量受损机制及内异方干预作用研究》文中研究表明研究目的1.评价重度EMS对辅助生殖结局的影响,分析其中主要的影响因素,为EMS相关不孕病理机制提供研究方向。2.筛选重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中特异表达的蛋白,研究其对卵母细胞质量的影响。3.从卵母细胞质量这一研究方向,探索内异方治疗EMS相关性不孕症的作用机制。研究方法1.临床研究通过大样本回顾性队列研究,对输卵管性不孕患者（对照组）和不同类型重度EMS相关性不孕症患者体外受精/单精注射-冻胚移植的基线特征、取卵周期和移植周期各项指标进行统计与分析,评价重度EMS对妊娠结局的影响及分析其中主要因素。2.重度EMS相关性不孕症患者卵泡液特异表达蛋白的筛选与验证通过同位素标记相对和绝对定量技术对输卵管性不孕患者和重度EMS相关性不孕症患者卵泡液进行检测,筛查出表达水平异常的蛋白;选择其中与EMS相关的蛋白,通过酶联免疫吸附测定法扩大样本验证其表达水平的差异。3.基于2.实验结果,检测重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中铁离子水平“2.实验结果”发现转铁蛋白（transferrin,TRF）在重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中表达较低,该蛋白与铁转运密切相关。通过ELISA方法检测重度EMS相关性不孕症患者和输卵管性不孕患者卵泡液中铁离子水平,并比较两组TRF饱和度。4.重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中TRF水平变化对小鼠卵母细胞质量的影响在重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中外加TRF（TRF组）,使其TRF水平与对照组（输卵管性不孕患者卵泡液）相当,并设立用抗体阻断TRF的分子功能组（抗体组）,干预小鼠卵母细胞体外成熟、受精和早期胚胎发育,观察卵母细胞成熟、受精和早期胚胎的发育情况。5.内异方对EMS模型小鼠卵母细胞质量的影响构建EMS模型小鼠,对EMS模型小鼠进行内异方干预,观察其自然生育能力,卵泡发育情况,体外培养其卵母细胞成熟,并检测卵泡中TRF的表达情况。研究结果1.EMS组月经第三天血清FSH和E2水平明显高于对照组,而窦卵泡数明显低于对照组,其中卵巢子宫内膜异位囊肿组窦卵泡数明显低于盆腔EMS组。在优势卵泡数、获卵数、成熟卵数、获卵率、有效囊胚率、优质胚胎率和可移植胚胎率方面,EMS组均显着低于对照组,而卵巢低反应的发生率显着高于对照组。在优势卵泡数、获卵数、成熟卵数、获卵率方面,卵巢子宫内膜异位囊肿组均显着低于盆腔EMS组,而在受精率、卵裂率方面显着高于盆腔EMS组。在优势卵泡数方面,手术组均显着低于穿刺组。EMS组流产率和累计临床妊娠率显着低于对照组。2.同位素标记相对和绝对定量技术初步筛查显示,TRF在重度子宫内膜异位症相关性不孕症患者卵泡液（EMS组）中水平显着低于输卵管性不孕患者（对照组）（P=0.043）;酶联免疫吸附测定法结果显示,EMS组（n=31）TRF浓度3.43±0.53（g/L）显着低于对照组（n=27）4.17±0.54（g/L）（P=0.000）。3.EMS组卵泡液铁离子水平（40.14±2.34 umol/L）明显高于对照组（29.46±1.77umol/L）（P<0.001）,且EMS组TRF饱和度为54.8%,存在铁超载。4.EMS组卵母细胞体外成熟率为46.7%,明显低于对照组61.2%（P=0.017）和TRF组65.7%（P=0.001）;抗体组体外成熟率47.1%,明显低于TRF组（P=0.007）。5.内异方组交配实验平均产仔数明显高于其余三组（P均<0.001）;内异方组与EMS组各阶段卵泡所占比例存在统计学差异（P=0.019）,内异方组的有腔卵泡（后期）比例（12.3%）高于EMS组（1.9%）;内异方组卵母细胞体外成熟率（68.3%）明显高于EMS组（51.0%）（P=0.014）。结论1.重度EMS对体外受精/单精注射-冻胚移植（IVF/ICSI-FET）结局产生不良影响,主要反映在一次取卵获得临床妊娠的机率更低（累计临床妊娠率）,其中重要原因之一为卵巢反应降低及获卵数减少,尤其见于卵巢EMS囊肿患者。EMS存在卵巢以外损害卵母细胞质量的因素,导致卵母细胞受精能力、卵裂能力降低。卵巢EMS囊肿的相关手术不会改善IVF/ICSI-FET妊娠结局。2.重度EMS相关性不孕症患者卵泡液中转铁蛋白水平降低,铁离子水平增高,存在铁超载。3.转铁蛋白水平降低是重度EMS相关性不孕症患者卵泡液阻碍小鼠卵母细胞体外成熟的原因之一。4.内异方可以改善EMS模型小鼠自然生殖能力,促进卵泡发育,提高卵母细胞体外成熟率,说明内异方具有改善EMS卵母细胞质量的作用。
撒元红[10]（2019）在《中药干预脾虚痰湿型PCOS患者IVF结局的代谢组学机制研究》文中研究指明目的:利用SCIEX API 4000QTRAP方法,通过SIMCA-P组学分析软件对接受体外受精-胚胎移植（In vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET）的脾虚痰湿型多囊卵巢综合征患者服药前后的卵泡液进行准靶向代谢组学分析研究,确认潜在的生物标记物,从代谢组学层面探究苍附导痰汤治疗脾虚痰湿型多囊卵巢综合征的可能作用机制。方法:采取前瞻随机对照方法,选取95例因不孕行IVF-ET助孕患者,65例多囊卵巢综合征的患者随机分为两组:A组:苍附导痰汤组33例;B组:单纯多囊卵巢综合征组32例;C组:因男性因素行IVF正常对照组30例（简称正常对照组）。三组患者均采用长方案超促排卵,A组于降调节日至HCG日给予苍附导痰汤。观察组间的IVF治疗结局（获卵数、MⅡ卵率、IVF 2PN受精率、ICSI 2PN受精率、2PN卵裂率、可用胚率、优胚率、种植率、临床妊娠率）及脾虚痰湿中医症候积分的变化。实验研究通过SIMCA-P组学分析软件对三组患者取卵日留取的卵泡液进行准靶向代谢组学分析,寻找三组间差异代谢物含量的变化及相关代谢通路。结果:（1）苍附导痰汤组患者的HCG日的中医症候积分明显低于降调节日的症候评分,差异有统计学意义（P<0.05）,且两者之间具有显着相关性。脾虚痰湿证表现出来的“月经量少、肢体浮肿、胸闷泛恶、纳呆等”的症状与治疗前相比均有明显改善（P<0.05）,“带下量多、神情疲惫”的症状的改善虽然没有统计学差异（P>0.05）,但表现出来了好转的趋势。（2）三组之间总获卵数、MⅡ卵数、2PN卵裂数、可移植胚胎数、优质胚胎数、受精率、卵裂率、优胚率差异有统计学意义。（P<0.05）苍附导痰汤组和单纯多囊卵巢综合征组的卵裂率（88.3%VS 76.1%,P<0.001）、优胚率（80.6%VS 46.2%,P<0.001）,差异有统计学意义。苍附导痰汤组和正常对照组之间Gn用量、获卵数、MⅡ卵数差异有统计学意义。（P<0.05）单纯多囊卵巢综合征组和正常对照组之间可移植胚胎数、优质胚胎数差异有统计学意义。（P<0.05）单纯多囊卵巢综合征组的可移植胚胎数和优质胚胎数显着少于正常对照组。（3）实验结果分析:中药干预PCOS患者后,患者卵泡液中Leucine,N-acetyltryptophan,3-sulfopyruvic acid,uricacid,Acrylamide,creatine,lactate等成分含量发生了上调,而Progesterone,phytosphingosine,decanoylcarnitine,dihomolinoleic acid,choline,phosphorylcholine,betaine,parahydroxybenzoate等成分含量发生了下调。通过pathway analysis通路分析,中药干预后,患者体内的类固醇激素生物合成通路,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢通路,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成通路,嘌呤代谢通路、丙酮酸代谢通路等受到了调节。结论:1.苍附导痰汤可以改善中医脾虚痰湿证候。2.苍附导痰汤可以增加PCOS患者的获卵数、可移植胚胎数、优质胚胎数,提高患者的获卵率、受精率及临床妊娠率,从而改善PCOS患者IVF结局。3.苍附导痰汤可以改变脾虚痰湿型PCOS患者的卵泡液代谢物,涉及到脂质（鞘氨醇）、有机酸类（乳酸）,上述物质可能是脾虚痰湿型PCOS患者的潜在的生物学标志物。4.苍附导痰汤可能通过改善PCOS患者卵泡液内氨基酸代谢、脂质代谢通路和丙酮酸代谢改善妊娠结局。lactate含量的上调提示苍附导痰汤可以改善丙酮酸代谢,phytosphingosine的下调提示纠正脂质代谢紊乱可能是苍附导痰汤改善PCOS患者ART结局的可能作用机制。
二、人的重组促黄体生成素对小鼠卵母细胞体外受精的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人的重组促黄体生成素对小鼠卵母细胞体外受精的影响（论文提纲范文）
（1）卵巢储备功能下降中医证素分析及乌萸汤对小鼠线粒体能量代谢影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 研究进展 |
| 第一节 现代医学关于卵巢储备功能下降的研究进展 |
| 1 卵巢储备及卵巢储备功能 |
| 2 病因及致病机制 |
| 3 诊断标准 |
| 4 治疗方法 |
| 5 能量代谢与卵细胞质量 |
| 参考文献 |
| 第二节 中医学对卵巢储备功能下降的认识及研究进展 |
| 1 病因病机认识 |
| 2 证型分布 |
| 3 治法用方 |
| 4 总结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二章 卵巢储备功能下降中医证素研究 |
| 第一节 研究内容及方法 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究对象 |
| 3 研究方法 |
| 第二节 研究结果 |
| 1 患者一般情况 |
| 2 就诊情况 |
| 3 辅助检查 |
| 4 证候分布情况 |
| 5 证素分布情况 |
| 6 证素及其相关影响因素 |
| 第三节 讨论 |
| 1 疾病特点 |
| 2 病因病机分析 |
| 3 中医治则治法 |
| 4 能量代谢与肝、肾、气血 |
| 第四节 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 实验研究 |
| 实验一 乌萸汤含药血清制备及活性成分分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 乌萸汤对DOR小鼠卵巢储备功能及能量代谢的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 实验三 乌萸汤对DOR小鼠卵母细胞体外培养的能量代谢相关影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 创新点与展望 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）多种因素对小鼠卵母细胞体外受精效果影响的分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.2.1 主要试剂 |
| 1.3 小鼠卵母细胞的体外成熟 |
| 1.4 小鼠卵母细胞的体外受精 |
| 1.4.1 小鼠精子的采集和体外获能 |
| 1.4.2 小鼠卵母细胞和精子的孵育 |
| 1.4.3 小鼠早期胚胎的培养 |
| 1.5 数据分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 精子获能时间对小鼠卵母细胞体外受精的影响 |
| 2.2 精卵孵育时间对小鼠卵母细胞体外受精的影响 |
| 2.3 精子密度对小鼠卵母细胞体外受精的影响 |
| 2.4 颗粒细胞对小鼠卵母细胞体外受精的影响 |
| 3 讨 论 |
（3）滋阴补阳方序贯对DOR患者辅助生殖助孕结局影响的临床观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 中医学对卵巢储备功能减退的研究 |
| 1.1 病因病机 |
| 1.2 中医治疗 |
| 2 西医学对卵巢储备功能减退的研究 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 相关概念 |
| 2.3 病因研究 |
| 2.4 机制研究 |
| 2.5 检测指标 |
| 2.6 临床表现 |
| 2.7 治疗 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 2 研究内容 |
| 2.1 滋阴补阳方序贯对DOR患者行人工授精结局的影响 |
| 2.2 滋阴补阳方序贯对DOR患者行体外受精-胚胎移植(拮抗剂方案)结局的影响 |
| 3 治疗方法 |
| 3.1 滋阴补阳方序贯 |
| 3.2 IUI |
| 3.3 IVF(拮抗剂方案) |
| 3.4 分组 |
| 3.5 试验药物 |
| 4 观察指标 |
| 4.1 中药+IUI组、IUI组观察指标 |
| 4.2 中药+IVF组、IVF组观察指标 |
| 5 统计学方法 |
| 6 研究结果 |
| 6.1 滋阴补阳方序贯对DOR患者行人工授精结局的影响 |
| 6.2 滋阴补阳方序贯对DOR患者行体外受精-胚胎移植(拮抗剂方案)的影响 |
| 第三部分 讨论 |
| 1 立论依据 |
| 1.1 辅助生殖技术在卵巢储备功能减退人群中的应用 |
| 1.2 滋阴补阳方改善卵巢储备功能理论依据 |
| 2 疗效分析 |
| 2.1 滋阴补阳方序贯对DOR患者行人工授精结局的影响 |
| 2.2 滋阴补阳方序贯对DOR患者行体外受精-胚胎移植(拮抗剂方案)的影响 |
| 3 不足与展望 |
| 4 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）基于“嫉妒不孕”理论探讨心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平及早期胚胎发育的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 技术路线图(一) |
| 技术路线图(二) |
| 实验一 心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验操作 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 实验二 心理应激对小鼠早期胚胎发育的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验操作 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 心理应激与女性自然生育力及辅助生殖技术结局的研究进展 |
| 1 心理应激与女性自然生育力的相关性 |
| 2 心理应激与辅助生殖技术的相关性 |
| 3 心理应激对女性生殖内分泌的影响机制 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）长方案添加外源性黄体生成素对高龄不孕女性行常规IVF-ET助孕妊娠结局的影响（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 1.前言 |
| 2.资料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.小结 |
| 5.讨论 |
| 6.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）SIRT2对牛卵母细胞成熟与老化的作用及其机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 卵母细胞成熟的分子机制 |
| 1.2 卵母细胞老化的分子机制 |
| 1.2.1 细胞形态学和生物学变化 |
| 1.2.2 卵母细胞老化的分子变化 |
| 1.3 卵丘-卵母细胞间隙连接通讯的研究进展 |
| 1.4 卵巢类固醇激素合成的研究进展 |
| 1.4.1 卵巢类固醇激素的合成 |
| 1.4.2 卵巢颗粒细胞类固醇合成分子机制 |
| 1.5 SIRT2对卵巢功能的调控 |
| 1.5.1 SIRT2的生物学功能 |
| 1.5.2 SIRT2与卵母细胞成熟 |
| 1.5.3 SIRT2与卵母细胞老化 |
| 1.5.4 SIRT2与卵巢颗粒细胞激素分泌 |
| 1.6 本研究的目的与意义 |
| 第二章 SIRT2在牛卵母细胞成熟和老化过程中的表达规律 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试验材料 |
| 2.2.2 试验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 Sirtuins家族在牛卵母细胞中表达 |
| 2.3.2 SIRT2在牛卵巢组织中表达 |
| 2.3.3 SIRT2在牛卵母细胞成熟和胚胎发育过程中的表达规律 |
| 2.3.4 Sirtuins家族在牛卵母细胞老化过程中的表达规律 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 SIRT2调节牛卵母细胞核和胞质成熟 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 试验材料 |
| 3.2.2 试验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 Sir Real2 有效抑制牛卵母细胞的SIRT2 活性 |
| 3.3.2 SIRT2失活抑制减数分裂 |
| 3.3.3 SIRT2失活扰乱纺锤体形成和染色体分离 |
| 3.3.4 SIRT2失活抑制胞质成熟 |
| 3.3.5 SIRT2失活导致线粒体功能障碍 |
| 3.3.6 SIRT2调节线粒体的生物合成和动力学 |
| 3.3.7 SIRT2 通过Fox O3a–Sod2/Cat信号轴调节ROS水平 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 SIRT2调节牛卵丘-卵母细胞复合体间隙连接通讯 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试验材料 |
| 4.2.2 试验方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 SIRT2调节牛卵丘-卵母细胞复合体的间隙连接通讯 |
| 4.3.2 SIRT2 失活通过激活MEK/ERK信号途径促进Cx43 磷酸化 |
| 4.3.3 MEK/ERK信号途径参与SIRT2 介导的间隙连接通讯 |
| 4.3.4 SIRT2 通过去乙酰化作用促进Cx43 膜定位 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 SIRT2调节牛卵母细胞成熟微环境的类固醇激素分泌 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 试验材料 |
| 5.2.2 试验方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 原代牛卵巢颗粒细胞的活力和鉴定 |
| 5.3.2 抑制剂或激活剂在牛卵巢颗粒细胞中的浓度筛选 |
| 5.3.3 干扰载体质粒有效抑制SIRT2的表达 |
| 5.3.4 SIRT2调节类固醇激素的分泌及其受体的表达 |
| 5.3.5 SIRT2 调节PPARs/LXRs信号途径 |
| 5.3.6 SIRT2 通过PPARs/LXRα通路调节类固醇激素分泌 |
| 5.3.7 SIRT2 依赖LXRα调节类固醇激素合成途径 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 SIRT2对牛卵母细胞老化的影响机制 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 试验材料 |
| 6.2.2 试验方法 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 SIRT2失活促进牛卵母细胞老化 |
| 6.3.2 SIRT2失活加重老化牛卵母细胞的氧化应激和线粒体功能障碍 |
| 6.3.3 SIRT2介导老化牛卵母细胞的自噬活性 |
| 6.3.4 SIRT2失活诱导过度自噬引起的老化牛卵母细胞凋亡 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 第七章 结论 |
| 创新点 |
| 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）血脂异常对输卵管性不孕患者新鲜移植周期助孕结局的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 实验方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.1.1 纳入标准 |
| 1.1.2 排除标准 |
| 1.2 研究方法 |
| 1.2.1 周期前准备 |
| 1.2.2 周期诊疗经过回顾 |
| 1.2.3 观察指标 |
| 1.3 统计学分析 |
| 第二章 实验结果 |
| 2.1 血脂异常对输卵管性不孕患者新鲜移植周期结局的影响 |
| 2.1.1 两组患者一般资料比较 |
| 2.1.2 两组患者促排卵结局比较 |
| 2.1.3 两组患者移植情况比较 |
| 2.1.4 两组患者临床妊娠结局比较 |
| 2.1.5 血脂水平及BMI与促排卵结局及临床妊娠结局的相关性分析 |
| 2.2 不同BMI水平的血脂异常患者新鲜移植周期结局的比较 |
| 2.2.1 三组患者一般资料比较 |
| 2.2.2 三组患者促排卵结局比较 |
| 2.2.3 三组患者移植情况比较 |
| 2.2.4 三组患者临床妊娠结局比较 |
| 第三章 讨论 |
| 3.1 血脂异常对输卵管性不孕患者新鲜移植周期结局产生不利影响 |
| 3.1.1 血脂异常降低IVF/ICSI周期获得的胚胎数量 |
| 3.1.2 血脂异常影响IVF/ICSI周期的胚胎质量 |
| 3.1.3 血脂异常影响IVF/ICSI周期的临床妊娠结局 |
| 3.2 血脂异常患者中不同BMI水平不影响新鲜移植周期的促排卵结局及临床妊娠结局 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 主要结论 |
| 4.2 局限性分析及展望 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（8）马胚胎移植及克隆胚体外构建技术（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 国外马业现状 |
| 1.1.2 我国马业现状 |
| 1.1.3 存在的主要问题 |
| 1.2 马的生殖生理特点 |
| 1.2.1 生殖活动 |
| 1.2.2 生殖行为 |
| 1.2.3 生殖激素的调节 |
| 1.3 国内外研究进展 |
| 1.3.1 马胚胎移植技术 |
| 1.3.2 精液冷冻与授精 |
| 1.3.3 胚胎冷冻与移植 |
| 1.3.4 体外受精(IVF) |
| 1.3.5 单精子卵胞浆显微注射技术(ICSI) |
| 1.3.6 卵母细胞成熟 |
| 1.3.7 马的体细胞核移植(SCNT) |
| 1.4 本研究的目的意义及内容 |
| 1.4.1 研究目的意义 |
| 1.4.2 研究内容 |
| 1.4.3 技术路线 |
| 2 试验一: 马胚胎移植技术的研究 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 动物饲养 |
| 2.1.3 试剂 |
| 2.1.4 试验设备 |
| 2.1.5 试剂制备 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 种马的选择 |
| 2.2.2 母马发情鉴别 |
| 2.2.3 母马发情调控 |
| 2.2.4 排卵调控 |
| 2.2.5 精液品质检测 |
| 2.2.6 精液的保存 |
| 2.2.7 人工授精 |
| 2.2.8 非手术法冲胚 |
| 2.2.9 胚胎的鉴定与保存 |
| 2.2.10 胚胎移植 |
| 2.2.11 妊娠诊断 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 母马的发情检查结果 |
| 2.3.2 不同激素诱导母马发情的试验结果 |
| 2.3.3 不同激素调控马排卵的比例 |
| 2.3.4 不同精液稀释液对精液品质的影响 |
| 2.3.5 不同输精方式对母马受孕率的影响 |
| 2.3.6 不同冲胚液对胚胎收集效率的对比与应用 |
| 2.3.7 不同胚胎移植方法的成功率 |
| 2.3.8 桑椹胚的收集与移植结果 |
| 2.3.9 不同妊娠诊断方法的比较 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 种马的选择 |
| 2.4.2 发情与卵泡生长的关系 |
| 2.4.3 超数排卵 |
| 2.4.4 采精与授精 |
| 2.4.5 马的胚胎移植 |
| 2.5 小结 |
| 3 马克隆胚胎体外构建技术的研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验对象 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 设备 |
| 3.1.4 试剂制备 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 卵巢的采集 |
| 3.2.2 马卵巢卵母细胞的收集 |
| 3.2.3 卵母细胞体外成熟 |
| 3.2.4 成纤维细胞培养 |
| 3.2.5 孤雌激活 |
| 3.2.6 体细胞核移植 |
| 3.2.7 构建胚胎的移植 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 不同季节卵巢的最佳运输温度 |
| 3.3.2 马、驴卵巢、COCs形态的对比 |
| 3.3.3 COCs回收率 |
| 3.3.4 卵母细胞体外成熟 |
| 3.3.5 不同年龄马的成纤维细胞系的建立 |
| 3.3.6 孤雌激活胚胎的成功率 |
| 3.3.7 马体细胞核移植的试验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 卵巢体外运输 |
| 3.4.2 母体的营养情况对卵母细胞成熟率的影响 |
| 3.4.3 ActA对卵母细胞的作用 |
| 3.4.4 体细胞系的建立 |
| 3.4.5 体细胞核移植 |
| 3.5 小结 |
| 4 全文总结 |
| 4.1 全文结论 |
| 4.2 本研究创新点 |
| 4.3 有待进一步研究的内容 |
| 4.3.1 胚胎移植技术的推广 |
| 4.3.2 马卵母细胞体外成熟技术 |
| 4.3.3 克隆胚胎的构建与体外发育 |
| 附录 |
| 1 胚胎移植马的选择标准(LH-201-2018) |
| 2 胚胎移植马选择结果 |
| 3 马人工授精技术规程(LH-202-2018) |
| 4 马胚胎移植技术规程(LH-203-2018) |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（9）子宫内膜异位症相关性不孕症卵母细胞质量受损机制及内异方干预作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 EMS相关性不孕症体外受精/单精注射-冻胚移植结局分析 |
| 1 引言 |
| 2 临床资料与研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 EMS相关性不孕症卵泡液特异表达蛋白的筛选 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 重度EMS相关性不孕症患者卵泡液铁离子检测 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 5 小结 |
| 第四部分 转铁蛋白对重度EMS相关性不孕症患者卵泡液损伤小鼠卵母细胞质量的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 5 小结 |
| 第五部分 中药内异方对EMS模型小鼠卵母细胞质量的影响及其机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 5 小结 |
| 创新点 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 1 文献综述 子宫内膜异位症卵母细胞质量受损的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录2 已发表论文 |
| 附录3 攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况 |
（10）中药干预脾虚痰湿型PCOS患者IVF结局的代谢组学机制研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 引言 |
| 临床研究 |
| 1 一般资料 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 对照组纳入标准 |
| 1.6 剔除和脱落标准 |
| 1.7 研究病例的中止 |
| 2 实验分组 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 临床用药 |
| 3.2 用药干预方法 |
| 3.3 COH方案 |
| 3.4 胚胎移植方案 |
| 3.5 数据分析方法 |
| 4 实验样本和试剂 |
| 4.1 样品信息 |
| 4.2 试剂 |
| 4.3 仪器设备 |
| 4.4 样品制备 |
| 4.5 色谱条件 |
| 4.6 质谱条件 |
| 4.7 数据分析 |
| 5 实验结果 |
| 5.1 一般资料 |
| 5.2 临床结局对比结果 |
| 5.3 中医证候积分比较结果 |
| 5.4 代谢组学分析结果 |
| 5.5 准靶向代谢组学结果 |
| 讨论 |
| 1 脾虚痰湿型PCOS研究进展 |
| 1.1 脾虚痰湿型是PCOS最常见的中医证型 |
| 1.2 肥胖是脾虚痰湿型PCOS患者的主要特征 |
| 1.3 氧化应激增加是脾虚痰湿型PCOS的显着特征 |
| 1.4 慢性炎性反应在脾虚痰湿型PCOS患者体内最典型 |
| 1.5 脾虚痰湿型PCOS存在子宫内膜信号传导障碍 |
| 2 准靶向代谢组学与PCOS |
| 2.1 代谢组学是研究PCOS的有效工具 |
| 2.2 准靶向组学的优势 |
| 2.3 PCOS患者的代谢学特点 |
| 3 苍附导痰汤组方分析及研究近况 |
| 3.1 组方治法以健脾化痰为主 |
| 3.2 药理学研究 |
| 3.3 苍附导痰汤的研究近况 |
| 4 苍附导痰汤改善IVF结局的准靶向代谢组学机制研究。 |
| 4.1 氨基酸代谢 |
| 4.2 脂肪酸代谢 |
| 4.3 嘌呤代谢 |
| 4.4 脂质代谢 |
| 4.5 能量代谢 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 综述 中草药干预 PCOS 的作用机制研究 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 发表论文 |
四、人的重组促黄体生成素对小鼠卵母细胞体外受精的影响（论文参考文献）
- [1]卵巢储备功能下降中医证素分析及乌萸汤对小鼠线粒体能量代谢影响[D]. 郑凌琦. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]多种因素对小鼠卵母细胞体外受精效果影响的分析[J]. 张景锋,郝京京,徐秋良,朱宽佑,牛晖,张长兴. 家畜生态学报, 2021(03)
- [3]滋阴补阳方序贯对DOR患者辅助生殖助孕结局影响的临床观察[D]. 王如芯. 南京中医药大学, 2021(01)
- [4]基于“嫉妒不孕”理论探讨心理应激对小鼠卵母细胞氧化应激水平及早期胚胎发育的影响[D]. 程蕊. 天津中医药大学, 2020(04)
- [5]长方案添加外源性黄体生成素对高龄不孕女性行常规IVF-ET助孕妊娠结局的影响[D]. 夏浩珈. 广州医科大学, 2020(01)
- [6]SIRT2对牛卵母细胞成熟与老化的作用及其机制[D]. 徐德军. 西北农林科技大学, 2020(02)
- [7]血脂异常对输卵管性不孕患者新鲜移植周期助孕结局的影响[D]. 于潇. 兰州大学, 2020(01)
- [8]马胚胎移植及克隆胚体外构建技术[D]. 张志鹏. 内蒙古农业大学, 2019(08)
- [9]子宫内膜异位症相关性不孕症卵母细胞质量受损机制及内异方干预作用研究[D]. 李安吉. 上海中医药大学, 2019(03)
- [10]中药干预脾虚痰湿型PCOS患者IVF结局的代谢组学机制研究[D]. 撒元红. 山东中医药大学, 2019