一、人重构型caspase-6基因在Hep-2细胞中的表达（论文文献综述）
胡炜[1]（2020）在《肝癌靶向探针的设计和评价及靶向药物的合成和机理研究》文中研究表明本文介于肝癌的高危害性,开展了肝癌的诊断和治疗研究,主要涉及靶向探针设计和性能评价及靶向药物合成和作用机理的研究。第一,发展的9种pH探针均能在酸性pH环境中经由探针中罗丹明基团N原子的质子化促使螺环结构开环,形成π电子共轭从而实现荧光turn on。探针对HepG2细胞的识别能力呈现葡萄糖配体<乳糖配体<半乳糖配体,证实半乳糖基团能特异性识别HepG2细胞,该亲和力受识别基团的体积大小影响。半乳糖配体探针对HepG2细胞的识别能力满足RDGal1<RDGal2<RDGal3,即三触头半乳糖具有最强的亲和力,故RDGal3对HepG2具有最优靶向能力。证实RDGal3特异性识别HepG2细胞的机理:首先,与其他细胞相比,RDGal3在HepG2细胞中荧光信号最强,说明RDGal3特异性识别HepG2细胞;其次,RDGal3与去唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）抗体荧光信号共定位,说明RDGal3与ASGPR键合;再者,半乳糖封闭HepG2细胞,RDGal3荧光强度减弱。则RDGal3依赖半乳糖基团与ASGPR键合的细胞识别机理。分析RDGal3对HepG2细胞的荧光标记功能:首先,RDGal3在癌细胞溶酶体pH范围内可激活荧光;其次,RDGal3与溶酶体染料荧光信号共定位。说明RDGal3在溶酶体内积累,在其酸性pH环境中被点亮荧光,实现对HepG2细胞的选择性标记。RDGal3在HepG2细胞内的荧光响应具有时间和浓度依赖性,对HepG2细胞无毒性,可用于肝癌的早期诊断。第二,另外发展了3种Hg2+探针均能选择性识别Hg2+,作用稳定。探针对Hg2+的检测具有可逆性,有利于探针循环使用。5μmol/L探针对Hg2+的检测限低至10-8mol/L,可用于痕量Hg2+检测。探针与Hg2+按照1:1结合,推断荧光turn on机理为:Hg2+破坏探针中罗丹明基团的螺环结构,开环后的大共轭结构导致光诱导电子转移（PET）效应被抑制,荧光激活。探针对Hg2+的荧光响应最适宜pH范围为3.5-6.5,适用于癌细胞弱酸性微环境。探针能够在生物体内被Hg2+点亮荧光,荧光响应值在HepG2细胞中满足Gal>Lac>Glu,在其他细胞中无显着变化,Hg2+诱导探针Gal在HepG2细胞中激发出最强的荧光信号。Gal对HepG2细胞的荧光标记具有浓度和时间依赖性,且对HepG2细胞无毒性,可用于肝癌细胞Hg2+的安全监测。探针Gal能选择性标记HepG2细胞,为肝癌靶向研究提供了思路。第三,构建了肝癌靶向药物5-氟尿嘧啶衍生物5-FUGal以及3种异甘草素衍生物ISL1、ISL2和ISL3。5-FUGal对HepG2细胞无毒性,ISL1对HepG2细胞的致死率最高(IC50为4.62×10-5 mol/L)。利用基于同位素标记相对和绝对定量（i TRAQ）技术的蛋白质组学对ISL1的靶向治疗机理展开研究。ISL1诱导的差异表达蛋白质共393种,其中54种蛋白质表达上调,339种蛋白质表达下调（Ratio>1.5 or<0.67）。揭示ISL1的靶向治疗机理为:ISL1诱导HK2表达下调,抑制糖酵解途径,诱导细胞凋亡;诱导PEPCK表达下调,抑制糖异生通路,遏制肿瘤细胞生长;诱导Akt1和IKK表达下调,激活下调的Akt/IKK/NFκB信号通路,抑制依赖NFκB的基因转录,遏制细胞生长,或是诱导下调的NO/c GMP/PKG/CREB信号通路,负调控CREB活性,诱导细胞凋亡;诱导Cyt C表达上调,线粒体释放Cyt C,激活Caspase-9,级联剪切激活Caspase-6和Caspase-7,促使细胞凋亡。ISL1抑制细胞增殖和生长,激活由线粒体途径所介导的细胞凋亡,可作为靶向肝癌的潜在治疗剂;具有抗肝癌活性的功能蛋白质HK2、Akt1、IKK、PEPCK和Cyt C可作为候选蛋白质。第四,构建了靶向肝癌细胞的糖基金属卟啉衍生物Zn TPPGal,其具有出色的荧光属性,金属Zn（Ⅱ）的介入可影响卟啉的光谱性质。Zn TTPGal能够被HepG2细胞内吞,四触头半乳糖基对ASGPR的选择性识别,促使化合物快速在HepG2细胞内聚集,激发出高强度的红色荧光,可用于药物示踪;Zn TPPGal对HepG2细胞具有高致死率(IC50为0.91×10-5 mol/L),即对肝癌细胞具有特异性靶向治疗作用。利用i TRAQ定量蛋白质组学研究Zn TPPGal的靶向作用机理。鉴定到差异表达蛋白质共475种,其中174种蛋白质表达上调,301种蛋白质表达下调（Ratio>1.5 or<0.67）。揭示Zn TPPGal的靶向作用机理为:Zn TPPGal诱导EGFR表达下调,抑制Ras/Raf/MEK/EPK信号通路,遏制细胞增殖,或是阻断PI3K/Akt/m TOR信号通路,促使细胞凋亡;触发内质网应激,诱导ASK1表达上调,激活ASK1/MKK7/JNK细胞凋亡信号通路;诱导Cathepsin D表达上调,裂解激活Bid,级联激活Bax和Bak,导致线粒体膜透化,诱导细胞凋亡;诱导Rho和JNK表达下调,阻断应激转导,抑制Rho/JNK信号通路,导致细胞凋亡;诱导Rag B和Rheb表达上调,正向调控激活m TOR信号通路,抑制自噬途径。Zn TPPGal抑制细胞增殖、生长和存活,主要通过内质网应激途径和线粒体途径激活细胞凋亡,不激活细胞自噬,可作为靶向肝癌的潜在治疗剂;功能蛋白质EGFR、ASK1、Cathepsin D、Rho、JNK、Rag B和Rheb可作为抗肝癌的候选蛋白质,用于肝癌治疗和药物研发。
杨雨茗[2]（2019）在《香叶木苷诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究》文中认为香叶木苷（Diosmin）是一种黄酮苷类化合物,本课题组前期研究已发现香叶木苷在抗辐射、抗癌等方面有显着作用,为进一步研究天然活性成分抗癌作用的通路及靶点,本课题从香叶木苷诱导HepG2细胞凋亡及抑制细胞增殖两方面入手进行深入探讨。主要研究结果如下:首先,研究了香叶木苷对HepG2细胞形态学、增殖能力、运动能力、群体依赖性和细胞凋亡等方面的影响,采用了MTT比色法、细胞划痕实验、细胞克隆形成实验、细胞周期检测的方法,得到如下结果:香叶木苷能够导致HepG2细胞体积变大、肿胀变圆,细胞边界模糊、折光性差;香叶木苷能够抑制HepG2细胞增殖,且呈浓度依赖,300μg/mL的香叶木苷对肝癌HepG2细胞的增殖抑制率达56.32%;香叶木苷能够显着抑制HepG2细胞迁移,300μg/mL香叶木苷对HepG2细胞的48 h迁移抑制率达50.39%;香叶木苷能够抑制HepG2单细胞克隆的形成,300μg/mL香叶木苷对HepG2细胞的15 d细胞克隆抑制率为73.49%;经香叶木苷处理后,G0/G1期细胞显着增加,G2/M期细胞显着减少（P<0.05）,且成一定浓度依赖。上述实验结果说明香叶木苷能够诱导HepG2细胞凋亡并通过引起HepG2细胞G0/G1期阻滞抑制HepG2细胞增殖,预测1个可能抑制细胞周期的信号通路Ras/Raf/MEK/ERK及1个关键靶点Akt。随后,对香叶木苷抑制HepG2细胞增殖及诱导细胞凋亡的机制进行了研究,通过生物信息学发现在1003例肝细胞癌患者中出现的关键突变位点为:PIK3CA（H1047R/L）、PIK3CA（E545K/A）、AKT1（E17K）、KRAS（G12C/D）,并采用Kaplan-Meier和Log-rank检验法绘制了相关基因突变后肝癌患者生存率与生存时间的曲线图。然后通过Real-time PCR对上述通路进行基因差异表达验证,得到如下结果:在线粒体凋亡途径中,随着香叶木苷浓度的上升,HepG2细胞中Bax mRNA的相对表达量显着上调、Bcl-2 mRNA的相对表达量显着下调,二者比值Bax/Bcl-2上升,均呈浓度依赖。随着香叶木苷浓度的上升,HepG2细胞中Caspase-3 mRNA的相对表达量下调,呈浓度依赖。在Ras/Raf/MEK/ERK通路和PI3K/Akt通路中,当香叶木苷浓度在0-200μg/mL区间时,MEK、ERK、Akt的mRNA相对表达量显着下调,Ras、Raf的mRNA相对表达量无显着变化。香叶木苷浓度在200μg/mL-300μg/mL区间时,Ras、Raf、MEK、ERK、Akt的mRNA相对表达量均无显着变化。上述实验结果说明香叶木苷能够通过线粒体途径诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其他通路还需要进一步检测相应蛋白的磷酸化情况。最后,通过Western Blot对线粒体凋亡通路及Ras/Raf/MEK/ERK通路蛋白的相对表达量进行测定,得到如下结果:在线粒体凋亡途径中,随着香叶木苷浓度的上升,HepG2细胞中Bax蛋白的相对表达量显着上调、Bcl-2蛋白的相对表达量显着下调、Bax/Bcl-2的比值显着下调,且均成浓度依赖。随着香叶木苷浓度的上升,HepG2细胞中cleaved-Caspase-3蛋白的相对表达量显着上调,呈浓度依赖。在Ras/Raf/MEK/ERK信号通路中,香叶木苷浓度在0-200μg/mL区间时,Ras的蛋白表达量显着下调,Raf、MEK、ERK的蛋白相对表达量无显着变化,p-MEK、p-ERK蛋白相对表达量显着下调。当香叶木苷浓度在200μg/mL-300μg/mL时,Ras、Raf、MEK、ERK蛋白的相对表达量无显着变化,p-MEK、p-ERK蛋白的相对表达量继续下调。在Akt相关通路中,随着香叶木苷浓度的上升,HepG2细胞中Akt蛋白的相对表达量无明显变化,而p-Akt蛋白的相对表达量显着上调,呈浓度依赖。上述实验结果说明香叶木苷能够通过线粒体途径诱导肝癌HepG2细胞凋亡。此外,香叶木苷还能够通过Ras/Raf/MEK/ERK途径抑制HepG2细胞增殖,推测香叶木苷可能起到类似MEK抑制剂的作用,通过抑制MEK的磷酸化减少下游信号传递,从而抑制HepG2细胞增殖。
骆小华[3]（2018）在《凋亡相关蛋白Caspase3在头颈肿瘤的研究进展》文中指出半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cysteinyl aspartate specfic protease,Caspase-3）作为凋亡执行和效应过程中的关键酶,其级联活化反应是细胞发生凋亡的重要信息传递路径。细胞凋亡和增殖失衡是肿瘤形成的重要原因,凋亡调控系统的紊乱与肿瘤的形成和发展密切相关,并在大量研究中得到证实。因此,Caspase-3作为凋亡效应和执行过程的关键酶,其与头颈肿瘤的研究近年来也受到广泛关注。本文将围绕Caspase-3在头颈肿瘤的作用及其相关机制进行综合评述。
张在鹏[4]（2016）在《日本鳗鲡Caspase6基因的克隆和表达分析》文中进行了进一步梳理本研究首次获得了日本鳗鲡（Anguilla japonica）Caspase6基因cDNA全长序列,命名为AjCasp6（GenBank号KJ726738）。该基因全长为1524 bp,其中开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）为903 bp,编码300个氨基酸。其蛋白三维空间结构图与人类Caspase6十分相似,具有Caspase家族典型的CASc结构域,包括一个P20结构域（54aa-178 aa）和一个P10结构域（204 aa-298 aa）,半胱氨酸活性位点“KPKIFIFQACRG”及组氨酸活性位点“HADADCFVCVFLSHG”。同源性分析显示AjCasp6氨基酸序列与虹鳟（Oncorhynchus mykiss）相似性最高,为75%,与其他鱼类相似性在61%75%之间。系统发育树表明,AjCasp6与其他鱼类Caspase6聚为一支,而哺乳类以及两栖类Caspase6聚为一支。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）结果表明:AjCasp6基因在日本鳗鲡各组织中均有表达,其中鳃中表达量最高,肠、肝脏、肾脏、皮肤和血细胞中也有较高表达,而心脏和肌肉中的表达水平则相对较低。日本鳗鲡经LPS、poly I:C和嗜水气单胞菌（A.hydrophila）刺激后,对其肾脏、肝脏、脾脏以及血细胞中AjCasp6基因在不同时相的表达变化进行了研究。结果表明:经LPS刺激后,AjCasp6基因在肝脏、肾脏和脾脏中的表达水平均有明显升高,而血细胞中表达量仅在3 h有所升高,但6 h则显着降低;poly I:C免疫注射后,肾脏、肝脏和脾脏中AjCasp6的表达量均有显着升高,而血细胞发现在6 h显着下降,12 h表达量略有升高;嗜水气单胞菌感染后,AjCasp6基因表达量在肾脏和肝脏显着上升,但在脾脏和血细胞中的表达量仅在6 h和48 h有所提高。研究了日本鳗鲡肝脏细胞经LPS、poly I:C、CpG、PGN以及三种不同浓度嗜水气单胞菌刺激后的AjCasp6基因表达水平变化,结果表明:肝脏细胞经LPS、poly I:C和PGN刺激后,AjCasp6基因表达水平均有显着升高,而经CpG处理48 h后AjCasp6表达量显着降低。经浓度分别为106 cfu/mL、107 cfu/mL以及108 cfu/mL的嗜水气单胞菌感染后,AjCasp6表达量均有显着提高,其表达量与菌体浓度的增加呈正相关。进行了日本鳗鲡AjCasp6基因原核表达及其兔抗血清的制备,结果表明:构建的重组载体pGEX-4T-2-Aj Casp6可以在大肠杆菌中高效表达,重组蛋白的分子量约为60 kDa,其表达量随着诱导时间的延长而提高,经镍柱亲和层析后获得高纯度的AjCasp6重组蛋白,制备相应的兔抗血清经ELISA检测其效价高达52100。日本鳗鲡肝脏组织通过原代培养成功使细胞从组织块中迁出,且至传代培养中获得的肝脏细胞经多次传代以后细胞形态、增殖周期渐渐稳定。由于日本鳗鲡肝脏细胞独特的生长特性,因此其可以较长时间处于生长的平台期,在不更换培养液的情况下能够维持一个月而不至于大批细胞凋亡、解体,使用时直接消化传代即可用于后续实验。构建了日本鳗鲡AjCasp6绿色荧光融合蛋白表达载体pEGFP-N1-Aj Casp6,通过转染HEK-293T细胞对该蛋白的细胞定位进行了研究。结果表明,AjCasp6蛋白仅在细胞质中有所分布,作为对照的pEGFP-N1空载体转染HEK-293T细胞后,绿色荧光蛋白在细胞核和细胞质中均有表达,提示AjCasp6主要在细胞质中参与细胞凋亡进程的调控作用。
李梅,张余[5]（2011）在《细胞凋亡与骨肉瘤》文中进行了进一步梳理细胞凋亡又称程序性细胞死亡（programmed cell death,PCD）,是由基因控制的、不同于细胞坏死的细胞自主有序的死亡。正常生理状态下,机体可通过细胞凋亡清除衰老或异常的细胞,并维持内环境稳态。而在病理状态下,细胞凋亡调控失调会破坏细胞增殖与凋亡之间的平衡,对机体
张雷鸣,任君琳,孟艳玲,杨双武,许彦鸣,杨安钢,张剑宁[6]（2011）在《免疫凋亡素e23sFv-Fdt-RC6对HER2阳性胶质瘤细胞U251的杀伤作用》文中研究表明目的:探讨靶向活性caspase-6融合蛋白对HER2阳性胶质瘤细胞系U251的促凋亡作用。方法:利用白喉毒素furin酶识别序列（Fdt）连接抗HER2单链抗体基因e23sFv和重构型caspase-6（RC6）基因,连接入pCMV载体,构建重组基因的真核表达载体pCMV-e23sFv-Fdt-RC6。脂质体转染HER2阳性胶质瘤U251细胞系,Western blot检测目的蛋白的表达。流式细胞术（FCM）检测转染后U251细胞的凋亡率,MTT法检测目的基因转染后对U251细胞增殖的影响。结果:双酶切及基因测序证实,pCMV-e23sFv-Fdt-RC6载体被成功构建。Western blot检测到转染表达载体48h后的U251细胞中有活性caspase-6的表达。FCM检测到实验组细胞凋亡率比对照组显着增高。MTT实验观察到转染载体pCMV-e23sFv-Fdt-RC6的U251细胞的增殖被明显抑制。结论:e23sFv-Fdt-RC6融合蛋白对HER2阳性胶质瘤细胞系U251有明显的促凋亡作用。
李秀英,夏良平,赖延东[7]（2008）在《PFP、GrB真核共表达载体的构建及表达分析》文中进行了进一步梳理目的:体外扩增出PFP、GrB基因的全片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG（即pVAX1-PFP-IRES-GrB）,分析其在人喉癌细胞Hep-2中的表达情况。方法:利用RT-PCR的方法从人的喉癌组织浸润淋巴细胞中扩增全长PFP、GrB的cDNA片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG。利用脂质体LipofectamineTM2000将重组真核表达载体pVAX1-PIG转染入人的Hep-2细胞株中,采用RT-PCR、间接免疫荧光法分析其在人Hep-2中的表达情况。结果:经双酶切、测序法证实已成功扩增PFP、GrB基因的全长cDNA,并构建共表达重组体pVAX1-PIG,在荧光显微镜下可见已转染pVAX1-PIG的人Hep-2细胞的胞浆发出苹果绿色荧光。结论:成功扩增PFP、GrB全片段、构建共表达重组体pVAX1-PIG,并在人Hep-2细胞中检测到PFP、GrB蛋白的表达,穿孔素（PFP）/颗粒酶B共同表达能够介导细胞的凋亡,为其在喉癌治疗中的应用研究奠定了基础。
余晓燕[8]（2008）在《TRAIL联合化疗药物诱导HEP-2、HNE-1细胞株凋亡的研究》文中研究说明背景:化学疗法是目前治疗鼻咽癌、喉癌的重要手段之一。大剂量的化疗药物在杀灭肿瘤细胞的同时,对机体组织可造成骨髓抑制、肝脏损害等相当严重的毒副作用,大大降低了肿瘤患者的生存质量。寻找既高效杀灭肿瘤细胞,又能降低其毒副作用的药物是现代肿瘤治疗的热点。已有研究报道,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）在杀灭肿瘤细胞的同时对正常细胞无明显毒副作用,且联合低毒性的化疗药物能高效诱导肿瘤细胞的凋亡,有望成为一种新型抗肿瘤药物。但它对人喉表皮癌细胞株（Human epidermal carcinoma cell line,HEP-2）、人鼻咽癌细胞株（Human nasopharyngeal carcinoma cell line,HNE-1）的研究报道甚少。本文旨在研究TRAIL联合5氟尿嘧啶（5-FU）、顺铂（DDP）对HEP-2、HNE-1细胞株增殖和凋亡的影响,并探讨了其可能的机制。目的:观察不同浓度的TRAIL、化疗药物（5-FU、DDP）分别和联合对HNE-1、HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响并探讨其可能机制。方法:1采用MTT检测不同浓度的TRAIL（1.0,10.0,100.0,1000.0ng/ml）;DDP（1.0,10.0,100.0μg/ml）;5-FU（1.0,10.0,100.0μg/ml）对HEP-2、HNE-1细胞株的增殖抑制作用。依据结果将实验分组为5组即空白对照组（无药物）;TRAIL（10.0ng/ml）处理组;DDP（1.0μg/ml）处理组;5-FU（1.0μg/ml）处理组;DDP（1.0μg/ ml）+TRAIL（10.0ng/ml）处理组;5-FU（1.0μg/ml）+TRAIL（10.0ng/ml）处理组进行以下实验。2采用MTT法检测不同处理组分别对HNE-1和HEP-2增殖抑制的影响。3采用FCM法检测AnnexinⅤ-FITC/PI双染色细胞后不同处理组细胞的凋亡,荧光显微镜下观察细胞形态。4采用Western-blot法检测不同处理组细胞中细胞型Fas相关死亡域样白介素1β转换酶抑制蛋白（Celluar Fas-ssociated death domain-like IL-1 beta converting enzyme inhibitory protein,c-FLIP）、核转录因子кB （Nuclear factorsкB,NF-кB）的表达情况。结果:1 TRAIL联合5-FU、DDP对HEP-2细胞株的研究:1)浓度为1.0μg/ml的5-FU、DDP可以抑制HEP-2细胞株的增殖,1.0ng/ml的TRAIL不能抑制HEP-2细胞株的增殖,10.0ng/ml以上浓度的TRAIL可抑制HEP-2细胞株的增殖。选取药物浓度为5-FU1.0μg/ml,DDP1.0μg/ml,TRAIL10.0ng/ml进行进一步的实验。2)DDP+TRAIL处理组HEP-2细胞株抑制率为（33.69±3.50）%,与TRAIL处理组（5.73±4.31）%和DDP处理组（15.06±8.83）%相比,HEP-2细胞株抑制率明显提高,差异具有统计学意义。3)5-FU+TRAIL处理组HEP-2细胞株抑制率为（29.21±9.80）%,与TRAIL处理组（5.73±4.31）%和5-FU处理组（12.68±5.20）%相比,HEP-2细胞株抑制率明显提高,差异具有统计学意义。4)DDP+TRAIL处理组HEP-2细胞株凋亡率为（24.76±1.20）%,与TRAIL处理组（0.24±0.023）%和DDP处理组（14.70±2.21）%相比,HEP-2细胞株凋亡率明显提高,差异具统计学意义。5)5-FU+TRAIL处理组HEP-2细胞株凋亡率为（14.33±0.78）%,与TRAIL处理组（0.24±0.023）%和5-FU处理组（2.25±0.56）%相比,HEP-2细胞株凋亡率明显提高,差异具统计学意义。6)TRAIL处理组、5-FU处理组、DDP处理组中c-FLIP、NF- B蛋白的表达水平高于TRAIL+5-FU处理组和TRAIL+DDP处理组。2 TRAIL联合5-FU、DDP对HNE-1细胞株的研究:1)浓度为1.0μg/L的5-FU、DDP可以抑制HNE-1细胞株的增殖,1.0ng/ml的TRAIL不能抑制HNE-1细胞株的增殖,10.0ng/ml以上浓度的TRAIL可抑制HNE-1细胞株的增殖。选取药物浓度为5-FU1.0μg/ml,DDP1.0μg /ml,TRAIL10.0ng/ml进行进一步的实验。2)DDP+TRAIL处理组HNE-1细胞株抑制率为（38.61±7.56）%,与TRAIL处理组（5.73±4.42）%和DDP处理组（14.62±7.92）%相比,HNE-1细胞株抑制率明显提高,差异具有统计学意义。3)5-FU+TRAIL处理组HNE-1细胞株抑制率为（31.89±5.61）%,与TRAIL处理组（5.73±4.42）%和5-FU处理组（14.17±9.6）%相比,HNE-1细胞株抑制率明显提高,差异具有统计学意义。4)DDP+TRAIL处理组HNE-1细胞株凋亡率为（14.72±1.20）%,与TRAIL处理组（0.66±0.23）%和DDP处理组（2.19±0.52）%相比,HNE-1细胞株凋亡率明显提高,差异具统计学意义。5)5-FU+TRAIL处理组HNE-1细胞株凋亡率为（14.70±1.78）%,与TRAIL处理组（0.66±0.23）%和5-FU处理组（2.43±0.26）%相比,HNE-1细胞株凋亡率明显提高,差异具统计学意义。6)TRAIL处理组、5-FU处理组、DDP处理组中c-FLIP、NF-κB蛋白的表达水平高于TRAIL+5-FU处理组和TRAIL+DDP处理组。结论:1 TRAIL能诱导HEP-2、HNE-1细胞株的增殖,且与5-FU、DDP联合应用具协同抑制细胞株增殖的作用;2 TRAIL能诱导HEP-2、HNE-1细胞株的凋亡,且与5-FU、DDP联合应用能协同诱导HEP-2、HNE-1细胞株的凋亡;3在TRAIL联合化疗药物诱导HEP-2、HNE-1细胞株凋亡的过程中,可通过下调c-FLIP、NF-κB蛋白的表达,诱导细胞株的凋亡。
郑燕彬[9]（2007）在《核基质蛋白在人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中的变化研究》文中提出本文在鉴定姜黄素（curcumin, Cur）诱导人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡的基础上,应用选择性抽提整装透射电镜和蛋白质组学分析技术,对MG-63细胞诱导凋亡过程中核基质-中间纤维系统的构型变化和核基质蛋白组成的变化进行系统研究。分析鉴定与肿瘤细胞凋亡相关的特异核基质蛋白,并探索它们在肿瘤细胞凋亡过程中的调控作用,以期能够在较为整体的水平上进一步认识肿瘤细胞凋亡及其机理,从而找出肿瘤细胞凋亡研究的新方向。实验结果显示,经7.5μg/mL姜黄素处理之后,人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖受到明显抑制,发生了G0/G1期阻滞,出现明显的亚G0/G1期凋亡峰,光镜和透射电镜观察结果显示,经姜黄素诱导处理后的MG-63细胞出现了细胞形态规则、核质比例减小、细胞核固缩、核内染色质凝聚、线粒体肿胀、内质网网腔扩大、出现凋亡小体等显着的凋亡特征;而且凋亡相关基因bcl-2和突变型p53的表达下调、bax和fas基因的表达上调,并且出现细胞凋亡特征性DNA降解梯状条带;选择性抽提整装光镜和电镜观察显示,经姜黄素处理的MG-63细胞的核基质和中间纤维比对照组明显稀疏,且分布更加不均匀,并分别与核纤层连系,形成趋于断裂但相对还较为完整的网状结构;双向凝胶电泳分析显示在姜黄素诱导MG-63细胞凋亡前后存在27个差异表达的核基质蛋白,经质谱分析,鉴定了其中的21个蛋白,其中在凋亡的MG-63细胞中表达上调的蛋白鉴定为:DNA断裂诱导转录子DNA-damage-inducible transcript 4-like、盘状结构域Discoidin、DNA聚合酶zeta等7种蛋白;表达下调的蛋白质为:Prohibitin、Glutamate dehydrogenase、Vimentin、Human Nucleophosmin、Heat-shock 70等14种蛋白。其中除Vimentin、Prohibitin、Nucleophosmin和Hsp70外,其余均为首次在核基质中发现的蛋白质。研究结果表明,7.5μg/mL姜黄素对人成骨肉瘤MG-63细胞的凋亡具有显着诱导作用,在MG-63细胞凋亡过程中不仅其核基质-中间纤维系统构型产生了与其相应非肿瘤细胞相对的凋亡特征性变化,而且其核基质蛋白组成也相应发生了明显改变。由此证实了与肿瘤细胞凋亡诱导相关特异核基质蛋白的存在及其对肿瘤细胞凋亡诱导的调控作用。
任君琳,王涛,许彦鸣,孟艳玲,温伟红,张瑞,张巍,杨安钢[10]（2007）在《重组抗HER2 ScFv/FDT/caspase-6基因的构建、表达及其活性鉴定》文中研究说明目的:构建重组抗HER2 ScFv/FDT/caspase-6基因的表达载体,转染SGC7901胃癌细胞后观察其促凋亡作用.方法:采用重组PCR法,将抗HER2的单链抗体（e23sFv）通过白喉毒素的Furin识别位点的编码序列（FDT）与人重构型caspase-6（RC6）基因重组,构建融合蛋白表达基因e23sFv-FDT-RC6.将所获得的重组基因克隆入真核表达载体pCMV,以脂质体法瞬时转染HER2阳性的SGC7901细胞和HER2阴性的HeLa细胞.MTT法检测目的基因转染后细胞的增殖情况.间接免疫荧光染色观察目的基因的表达对SGC7901细胞的促凋亡作用.结果:把e23sFv-RC6,e23sFv-FDT-RC6基因克隆入真核表达载体pCMV,酶切鉴定和基因测序证明目的基因序列正确.转染SGC7901和HeLa细胞后,Western Blot检测到目的蛋白的表达.MTT实验观察到转染pCMV-e23sFv-FDT-RC6的SGC7901细胞的增殖被明显抑制,间接免疫荧光染色可以观察到表达e23sFv-FDT-RC6融合蛋白的SGC7901细胞形态发生改变,部分细胞呈现典型凋亡特征.结论:重组抗HER2 ScFv/FDT/caspase-6基因的表达可促进HER2阳性SGC7901胃癌细胞的凋亡.
二、人重构型caspase-6基因在Hep-2细胞中的表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人重构型caspase-6基因在Hep-2细胞中的表达（论文提纲范文）
（1）肝癌靶向探针的设计和评价及靶向药物的合成和机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词对照表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 肝癌的危害性和特性 |
| 1.2 靶向pH探针特异性监测肝癌细胞的研究 |
| 1.3 肝癌细胞中微量有害金属的选择性监测 |
| 1.4 肝癌靶向治疗的研究 |
| 1.5 基于蛋白质组学的机理研究 |
| 1.6 本课题的科学意义和设计思路 |
| 1.6.1 课题的科学意义 |
| 1.6.2 课题设计思路 |
| 第二章 肝癌靶向pH探针的性能评价 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 试剂耗材 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验操作 |
| 2.2.1 探针溶液的光物理性质 |
| 2.2.2 探针的细胞荧光成像 |
| 2.2.3 探针对HepG2 细胞的毒性 |
| 2.2.4 统计分析 |
| 2.3 结果和讨论 |
| 2.3.1 探针对pH响应的光谱性质 |
| 2.3.2 探针与HepG2 细胞的亲和力比较 |
| 2.3.3 探针RDGal3 靶向HepG2 细胞的机理 |
| 2.3.4 探针RDGal3对HepG2 细胞的标记功能 |
| 2.3.5 半乳糖配体探针的细胞毒性 |
| 2.4 小结 |
| 第二章 肝癌细胞内Hg~(2+)靶向探针的性能评价 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 试剂耗材 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.2 实验操作 |
| 3.2.1 探针溶液的光学性质 |
| 3.2.2 探针监测细胞内Hg~(2+) |
| 3.2.3 探针对HepG2 细胞的毒性 |
| 3.2.4 统计分析 |
| 3.3 结果和讨论 |
| 3.3.1 探针对Hg~(2+)响应的光谱性能 |
| 3.3.2 探针对细胞内Hg~(2+)响应的比较 |
| 3.3.3 探针的细胞毒性 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 肝癌靶向药物合成、评价及治疗机理的研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 试剂耗材 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.2 实验操作 |
| 4.2.1 主要溶液配制 |
| 4.2.2 化合物合成 |
| 4.2.3 化合物对HepG2 细胞毒活性 |
| 4.2.4 基于蛋白质组学的治疗机理 |
| 4.3 结果和讨论 |
| 4.3.1 化合物结构表征 |
| 4.3.2 化合物的生物活性 |
| 4.3.3 化合物ISL1 肝癌靶向治疗机理 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 糖基金属卟啉合成、评价及肝癌靶向作用机理的研究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 试剂耗材 |
| 5.1.2 实验仪器 |
| 5.2 实验操作 |
| 5.2.1 主要溶液配制 |
| 5.2.2 化合物合成 |
| 5.2.3 化合物的荧光示踪 |
| 5.2.4 化合物对HepG2 细胞毒活性 |
| 5.2.5 基于蛋白质组学的机理分析 |
| 5.3 结果和讨论 |
| 5.3.1 化合物结构表征 |
| 5.3.2 化合物的示踪功能 |
| 5.3.3 化合物的生物活性 |
| 5.3.4 化合物ZnTPPGal抑制肝癌的机理 |
| 5.4 小结 |
| 结论和展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（2）香叶木苷诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 |
| 1.1.1 课题背景 |
| 1.1.2 研究的目的和意义 |
| 1.2 香叶木苷的研究现状 |
| 1.2.1 国内研究进展 |
| 1.2.2 国外研究进展 |
| 1.3 肝癌细胞增殖侵袭的研究现状 |
| 1.4 细胞凋亡通路研究现状 |
| 1.4.1 死亡受体通路 |
| 1.4.2 内质网凋亡通路 |
| 1.4.3 线粒体凋亡通路 |
| 1.5 课题研究内容 |
| 1.5.1 主要研究内容 |
| 1.5.2 技术路线 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验试剂及材料 |
| 2.1.1 试剂与材料 |
| 2.1.2 试剂的配制 |
| 2.1.3 细胞株 |
| 2.2 实验仪器及设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验细胞的培养 |
| 2.3.2 细胞形态学观察 |
| 2.3.3 MTT比色法 |
| 2.3.4 细胞划痕实验 |
| 2.3.5 细胞克隆形成实验 |
| 2.3.6 细胞周期的测定 |
| 2.3.7 细胞蛋白的提取及浓度检测 |
| 2.3.8 REAL-TIME PCR基因表达检测 |
| 2.3.9 WESTERN BLOT蛋白表达检测 |
| 2.3.10 生物信息学分析方法 |
| 2.3.11 统计学数据分析 |
| 第3章 香叶木苷对肝癌HEPG2 细胞的抑制作用 |
| 3.1 香叶木苷处理后的HEPG2 细胞的形态学变化 |
| 3.2 香叶木苷对HEPG2 细胞的体外增殖抑制作用 |
| 3.3 香叶木苷对HEPG2 细胞迁移功能的抑制作用 |
| 3.4 香叶木苷对HEPG2 细胞克隆形成能力的抑制作用 |
| 3.5 香叶木苷对HEPG2 细胞周期中G_0/G_1期的影响 |
| 3.6 本章小结 |
| 第4章 香叶木苷作用后HEPG2 细胞基因差异表达分析 |
| 4.1 HCC相关基因的生物信息学分析 |
| 4.1.1 PI3K/AKT信号通路基因的生物信息学分析 |
| 4.1.2 RAS/RAF/MEK/ERK信号通路基因的生物信息学分析 |
| 4.2 香叶木苷对线粒体途径中BAX和 BCL-2 基因表达的影响 |
| 4.3 香叶木苷对细胞凋亡关键靶点CASPASE-3 基因表达的影响 |
| 4.4 香叶木苷对RAS/RAF/MEK/ERK通路基因表达的影响 |
| 4.5 香叶木苷对AKT通路基因表达的影响 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 香叶木苷作用后HEPG2 细胞凋亡及增殖相关蛋白差异表达 |
| 5.1 香叶木苷对线粒体途径中BAX和 BCL-2 蛋白表达的影响 |
| 5.2 香叶木苷对细胞凋亡关键靶点CASPASE-3 蛋白表达的影响 |
| 5.3 香叶木苷对RAS/RAF/MEK/ERK蛋白表达的影响 |
| 5.4 香叶木苷对AKT通路蛋白表达的影响 |
| 5.5 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ BCA蛋白质浓度测定方法 |
| 附录Ⅱ 细胞中总RNA的提取方法 |
| 致谢 |
（3）凋亡相关蛋白Caspase3在头颈肿瘤的研究进展（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 Caspase家族的基本结构及功能 |
| 2 Caspase-3的激活及与凋亡的关系 |
| 2.1 死亡受体途径 |
| 2.2 线粒体途径 |
| 2.3 内质网途径 |
| 2.4 Caspase-3在Caspase凋亡通路中的地位 |
| 3 c-IAP1的Caspase-3调控及凋亡抑制作用 |
| 3.1 c-IAP1与IAPs家族 |
| 3.2 c-IAP1的基本结构与功能 |
| 3.3 c-IAP1对Caspase-3的调控 |
| 4 Caspase3在头颈肿瘤中的研究进展 |
| 4.1 Caspase-3与喉癌发生发展的相关研究进展 |
| 4.2 Caspase-3与鼻咽癌发生发展的相关研究进展 |
| 4.3 Caspase-3在头颈肿瘤治疗的研究进展 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 |
（4）日本鳗鲡Caspase6基因的克隆和表达分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 Caspase基因在鱼类中的研究进展 |
| 1.2 研究的目的和意义 |
| 1.3 主要研究内容和技术路线 |
| 1.3.1 主要研究内容 |
| 1.3.2 技术路线 |
| 第2章 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物以及菌株 |
| 2.1.2 仪器设备 |
| 2.1.3 试剂及其试剂配制 |
| 2.1.4 引物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 日本鳗鲡组织总RNA的提取 |
| 2.2.2 cDNA第一条链的合成及目的基因片段的获取 |
| 2.2.3 SMART-RACE技术获取目的基因全长 |
| 2.2.4 目的基因片段的割胶纯化 |
| 2.2.5 DNA与质粒载体的连接 |
| 2.2.6 感受态细胞的制备 |
| 2.2.7 感受态细胞的转化及筛选 |
| 2.2.8 质粒插入片段的检测 |
| 2.2.9 重组质粒测序和质粒提取 |
| 2.2.10 细胞转染重组表达载体的构建 |
| 2.2.11 原核重组表达载体的构建及鉴定 |
| 2.2.12 重组蛋白的表达纯化与复性 |
| 2.2.13 利用纯化蛋白制备多克隆抗体 |
| 2.2.14 酶联免疫分析(间接ELISA法) |
| 2.2.15 HEK-293T细胞的复苏与培养 |
| 2.2.16 AjCasp6基因在细胞中的的定位 |
| 2.2.17 日本鳗鲡肝脏和脾脏细胞的培养 |
| 2.2.18 日本鳗鲡细胞系的冻存与复苏 |
| 2.2.19 日本鳗鲡各组织及肝脏和脾脏细胞中表达 |
| 2.2.20 目的基因的生物信息学分析 |
| 2.2.21 数据获取处理与分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 日本鳗鲡各组织总RNA的提取结果 |
| 3.2 RACE-PCR扩增结果 |
| 3.3 AjCasp6基因序列分析 |
| 3.3.1 AjCasp6的cDNA序列分析 |
| 3.3.2 AjCasp6其他物种Caspase6多重比分析 |
| 3.3.3 AjCasp6其他物种Caspase6系统进化树分析 |
| 3.3.4 日本鳗鲡的AjCasp6的空间结构模拟 |
| 3.4 AjCasp6基因在体内和体外表达分析 |
| 3.4.1 AjCasp6基因在日本鳗鲡各组织中表达分析 |
| 3.4.2 AjCasp6基因在肝脏细胞系中的表达变化 |
| 3.5 原核表达及其检测 |
| 3.5.1 原核重组表达载体的构建结果 |
| 3.5.2 重组载体的原核表达结果及检测 |
| 3.6 AjCasp6蛋白的间接ELISA特异性实验结果 |
| 3.7 日本鳗鲡肝脏细胞系的原代培养和传代培养 |
| 3.7.1 日本鳗鲡肝脏细胞系的原代培养 |
| 3.7.2 日本鳗鲡肝脏细胞系的传代培养 |
| 3.8 不同传代比例对JEL增殖曲线的影响及群体倍增时间分析 |
| 3.9 AjCasp6基因在人类293细胞系中的转染和定位 |
| 3.9.1 AjCasp6基因在人类293细胞系中的转染 |
| 3.9.2 AjCasp6基因在人类293细胞系中的亚细胞定位 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论和展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成果情况 |
（5）细胞凋亡与骨肉瘤（论文提纲范文）
| 1 与骨肉瘤相关的细胞凋亡途径 |
| 1.1 死亡受体配体途径 |
| 1.2 线粒体途径 |
| 2 与骨肉瘤相关的细胞凋亡因子 |
| 2.1 Bcl-2家族蛋白 |
| 2.2 IAPs家族 |
| 2.3 p53 |
| 2.4 caspases家族 |
| 3 针对细胞凋亡的骨肉瘤治疗 |
| 3.1 放疗 |
| 3.2 化疗 |
| 3.3 热疗 |
| 3.4 基因治疗 |
| 3.5 其它应用 |
| 4 结语 |
（6）免疫凋亡素e23sFv-Fdt-RC6对HER2阳性胶质瘤细胞U251的杀伤作用（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 pCMV-e23sFv-Fdt-RC6表达载体的构建 |
| 1.2.2 细胞转染 |
| 1.2.3 Western blot检测 |
| 1.2.4 Annexin V FITC/PI双染法FCM凋亡检测 |
| 1.2.5 MTT实验 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组pCMV-e23sFv-Fdt-RC6真核表达载体构建 |
| 2.2 重组蛋白在胶质瘤细胞系U251中的表达 |
| 2.3 重组蛋白诱导U251细胞发生凋亡 |
| 2.4 靶向活性caspase-6对U251细胞增殖的影响 |
| 3 讨论 |
（7）PFP、GrB真核共表达载体的构建及表达分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 引物合成及序列扩增 |
| 1.3 重组质粒的构建、测序 |
| 1.4 RT-PCR |
| 1.5 间接免疫荧光分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 RT-PCR扩增GrB全长cDNA |
| 2.2 RT-PCR扩增PFP全长cDNA |
| 2.3 重组质粒pVAX1-PFP的构建以及鉴定 |
| 2.4 重组质粒pVAX1-PFP-GrB的构建以及鉴定 |
| 2.5 重组质粒pVAX1-PIG的构建以及鉴定 |
| 2.6 RT-PCR检测结果 |
| 2.7 间接免疫荧光检测结果 |
| 3 讨论 |
（8）TRAIL联合化疗药物诱导HEP-2、HNE-1细胞株凋亡的研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 论文正文：TRAIL 联合化疗药物诱导HEP-2、HNE-1 细胞株凋亡的研究 |
| 前言 |
| 第一部分 TRAIL 联合5-FU、DDP 抑制HEP-2、HNE-1 细胞株增殖的研究 |
| 前言 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 TRAIL 联合5-FU、DDP 诱导HEP-2、HNE-1 细胞凋亡的研究及可能机制的探讨 |
| 前言 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 文献综述 TRAIL 与肿瘤的治疗 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 |
（9）核基质蛋白在人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中的变化研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 一 细胞凋亡及其调控机理的研究意义及其问题 |
| 二 细胞核基质在细胞生命活动中的重要作用 |
| 三 细胞核基质在细胞凋亡中的变化研究 |
| 四 成骨细胞及其凋亡研究的重要理论与实践意义 |
| 4.1 成骨细胞的生物学特性 |
| 4.2 成骨细胞凋亡的研究 |
| 4.3 成骨细胞凋亡研究中所存在的问题 |
| 五 姜黄素及其在细胞凋亡研究中的应用 |
| 六 本研究拟解决的具体科学问题及其意义 |
| 材料与方法 |
| 一 细胞培养与诱导凋亡处理 |
| 1.1 细胞培养 |
| 1.2 诱导凋亡物与诱导凋亡处理 |
| 二 生长曲线测定 |
| 三 细胞周期测定 |
| 四 HE 染色细胞形态光镜样品制备 |
| 五 透射电子显微镜观察样品制备 |
| 六 Hoechst 染色 |
| 七 DNA 电泳 |
| 八 成骨肉瘤细胞凋亡相关基因免疫细胞化学观察样品制备 |
| 8.1 人成骨肉瘤 MG-63 细胞相关抑凋亡基因突变型p53、bcl-2 产物表达观察样品制备 |
| 8.2 人成骨肉瘤 MG-63 细胞相关促凋亡基因bax、fas 产物表达观察样品制备 |
| 九 核基质-中间纤维系统选择性抽提整装光镜和电镜观察样品制备 |
| 9.1 核基质-中间纤维（NM-IF）的选择性抽提 |
| 9.2 核基质-中间纤维（NM-IF）的选择性抽提光镜样品的制备与观察 |
| 9.3 核基质-中间纤维（NM-IF）的选择性抽提电镜样品的制备与观察 |
| 十 核基质样品的选择性抽提 |
| 十一 双向凝胶电泳分析 |
| 十二 质谱生物学鉴定 |
| 12.1 核基质蛋白点 MALDI-TOF 质谱样品制备 |
| 12.2 核基质蛋白点 MALDI-TOF 质谱分析 |
| 十三 蛋白质数据库查询 |
| 实验结果 |
| 一 姜黄素对人成骨肉瘤 MG-63 细胞凋亡的诱导作用 |
| 1 姜黄素对 MG-63 细胞增殖与细胞周期的影响 |
| 1.1 姜黄素对人成骨肉瘤 MG-63 细胞生长的影响 |
| 1.2 姜黄素对人成骨肉瘤MG-63 细胞周期的影响 |
| 2 姜黄素对 MG-63 细胞形态与超微结构变化的影响 |
| 2.1 光学显微镜观察 |
| 2.2 透射电子显微镜观察 |
| 3 姜黄素对 MG-63 细胞核与 DNA 的作用 |
| 3.1 姜黄素对 MG-63 细胞核的裂解作用 |
| 3.2 姜黄素对 MG-63 细胞 DNA 的降解作用 |
| 4 姜黄素对 MG-63 细胞p53 、bcl-2、bax 和fas 等凋亡相关基因表达的影响 |
| 4.1 姜黄素对 MG-63 细胞p53 基因表达的影响 |
| 4.2 姜黄素对 MG-63 细胞bcl-2 基因表达的影响 |
| 4.3 姜黄素对 MG-63 细胞bax 基因表达的影响 |
| 4.4 姜黄素对 MG-63 细胞fas 基因表达的影响 |
| 二 姜黄素对人成骨肉瘤 MG-63 细胞核基质－中间纤维系统构型变化的影响 |
| 1 光学显微镜观察 |
| 2 电子显微镜观察 |
| 2.1 核基质 |
| 2.2 核纤层 |
| 2.3 中间纤维 |
| 三 姜黄素对人成骨肉瘤 MG-63 细胞核基质蛋白表达的影响 |
| 1 双向凝胶电泳分析 |
| 2 生物质谱鉴定 |
| 讨论 |
| 一 姜黄素对人成骨肉瘤 MG-63 细胞凋亡的诱导作用 |
| 1. 姜黄素对 MG-63 细胞增殖的抑制与细胞周期的影响 |
| 2. 姜黄素对 MG-63 细胞形态与超微结构的影响 |
| 3. 姜黄素对 MG-63 细胞细胞核以及 DNA 的影响 |
| 4. 姜黄素对 MG-63 细胞凋亡相关基因的作用 |
| 小结 |
| 二 人成骨肉瘤细胞凋亡过程中核基质－中间纤维系统的构型变化 |
| 三 人成骨肉瘤 MG-63 细胞凋亡过程中核基质蛋白的组成变化 |
| 四 差异核基质蛋白在人成骨肉瘤 MG-63 细胞凋亡过程中的功能作用 |
| 4.1 核基质结构蛋白 Vimentin |
| 4.2 Prohibitin |
| 4.3 Nucleophosmin |
| 4.4 Hsp70 |
| 4.5 其它 |
| 小结 |
| 五 特异核基质蛋白在 MG-63 细胞诱导凋亡中的调控作用 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 版图说明 |
| 致谢 |
四、人重构型caspase-6基因在Hep-2细胞中的表达（论文参考文献）
- [1]肝癌靶向探针的设计和评价及靶向药物的合成和机理研究[D]. 胡炜. 广西大学, 2020(07)
- [2]香叶木苷诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究[D]. 杨雨茗. 哈尔滨工业大学, 2019
- [3]凋亡相关蛋白Caspase3在头颈肿瘤的研究进展[D]. 骆小华. 重庆医科大学, 2018(01)
- [4]日本鳗鲡Caspase6基因的克隆和表达分析[D]. 张在鹏. 集美大学, 2016(05)
- [5]细胞凋亡与骨肉瘤[J]. 李梅,张余. 中国骨科临床与基础研究杂志, 2011(04)
- [6]免疫凋亡素e23sFv-Fdt-RC6对HER2阳性胶质瘤细胞U251的杀伤作用[J]. 张雷鸣,任君琳,孟艳玲,杨双武,许彦鸣,杨安钢,张剑宁. 细胞与分子免疫学杂志, 2011(01)
- [7]PFP、GrB真核共表达载体的构建及表达分析[J]. 李秀英,夏良平,赖延东. 中国免疫学杂志, 2008(06)
- [8]TRAIL联合化疗药物诱导HEP-2、HNE-1细胞株凋亡的研究[D]. 余晓燕. 重庆医科大学, 2008(01)
- [9]核基质蛋白在人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中的变化研究[D]. 郑燕彬. 厦门大学, 2007(07)
- [10]重组抗HER2 ScFv/FDT/caspase-6基因的构建、表达及其活性鉴定[J]. 任君琳,王涛,许彦鸣,孟艳玲,温伟红,张瑞,张巍,杨安钢. 第四军医大学学报, 2007(03)