胶体金膜渗滤法测定HIV感染者唾液中分泌型IgA

胶体金膜渗滤法测定HIV感染者唾液中分泌型IgA

一、胶体金膜渗滤法测定HIV感染者唾液中分泌型IgA(论文文献综述)

尤英霞[1](2013)在《云南西部HIV阳性者弓形虫感染情况及感染免疫的初步研究》文中认为刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种广泛寄生于人和多种哺乳动物的机会性、专性细胞内寄生性原虫,可寄生在宿主除红细胞外的所有有核细胞中,引起严重的人兽共患弓形虫病。当人体感染弓形虫后,机体免疫功能正常者多呈无临床症状的隐性感染;但当机体免疫功能低下或缺陷时,可以导致严重的机会性感染,甚至导致病人病情恶化,预后不佳,甚至死亡。人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiency Virus, HIV)是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒,HIV侵入机体后主要侵犯机体的免疫系统,攻击和杀伤CD4+Th细胞与巨噬细胞系统,导致人体免疫力极度低下,从而继发各种严重的机会性感染和肿瘤,最终引起病人死亡。随着HIV感染率逐年升高,弓形虫感染引起的相关疾病越来越受到关注。云南省是我国多民族的边疆省份,是我国最早报告人体HIV感染和目前感染人数较多的省份之一。因此为了了解云南省HIV阳性人群弓形虫的感染情况及弓形虫感染后机体的免疫状况,我们进行了本次研究。1.研究目的1.1初步了解云南西部不同地域、民族、性别和年龄的HIV阳性人群弓形虫的感染情况。1.2初步研究HIV阳性者弓形虫感染后γ-干扰素、白细胞介素-2、白细胞介素-10和一氧化氮(IFN-γ、IL-2、IL-10、NO)浓度的变化。了解弓形虫感染后HIV阳性者的免疫功能状况。2.研究方法根据云南西部地区AIDS流行情况,在云南省大理、保山、德宏和临沧4州(市)采集HIV阳性者血清样本1839份,另收集当地HIV阴性人群血清样本180份做对照组。对采集的HIV阳性患者所有样本及当地HIV阴性人群血清样本,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbant assay,ELISA)检测弓形虫IgG/IgM抗体水平。对于弓形虫IgG/IgM抗体阳性的病人在初次检测6个月后进行追踪随访,再次采集血样用ELISA法测定两次样本的IFN-γ、IL-2、IL-10的浓度和硝酸还原酶法测定NO浓度,并与无弓形虫感染的HIV阳性者进行比较。3.研究结果3.1云南西部地区HIV阳性者弓形虫特异性抗体IgG、IgM阳性率分别为35.3%,1.8%;其中大理州、保山市、德宏州和临沧市IgG阳性率分别为30.9%,33%,41.9%,40.6%;IgM阳性率分别为1.1%,2.2%,3.0%,2.3%,四州市间统计学分析有显着差异(p﹤0.05)。HIV阴性者弓形虫特异性抗体IgG、IgM阳性率分别为23.3%、1.1%。3.2不同民族HIV阳性者弓形虫IgG、IgM抗体检测结果,景颇族弓形虫IgG、IgM抗体阳性率最高(56.7%,4.1%),回族的阳性率最低(20.6%,0%)。不同民族间弓形虫IgG阳性率有显着差异(p <0.05),IgM阳性率无显着差异(p﹥0.05)。3.3不同性别HIV阳性者弓形虫IgG、IgM抗体检测结果,男性36.1%,1.9%;女性34.2%,1.8%;男、女之间弓形虫IgG、IgM感染率无显着差异(p>0.05)。3.4不同年龄HIV阳性者弓形虫IgG、IgM抗体检测结果,弓形虫IgG抗体阳性率4160岁组最高(38.1%),小于20岁组最低(21.1%),IgM阳性率60岁以上组最高(3.2%),2140岁组最低(1.6%),不同年龄之间弓形虫IgG、IgM感染率无显着差异(p>0.05)。3.5HIV阳性弓形虫IgG抗体阳性者随访后血清IL-10(178.54±60.23)显着低于随访前(201.23±57.96),(p﹤0.05),IFN-γ、IL-2随访后(436.76±213.76,292.59±162.81)显着高于随访前(376.79±199.66,248.73±143.89),(p﹤0.05),NO随访后(84.18±78.15)略高于随访前(81.37±77.58),(p>0.05);HIV阳性弓形虫IgG、IgM抗体双阳性者血清IFN-γ、IL-2、IL-10、NO随访前后均无显着差异(p>0.05);HIV阳性弓形虫抗体阴性对照组随访前后血清IFN-γ、IL-2、IL-10、NO无显着差异(p>0.05);HIV阳性弓形虫IgG抗体阳性者其血清IFN-γ、IL-2均低于弓形虫IgG抗体阴性的HIV感染者,IL-10、NO浓度均高于弓形虫IgG抗体阴性的HIV感染者。4.结论4.1云南西部地区HIV阳性者弓形虫感染率较高。与地域、民族分布有关。4.2弓形虫慢性感染期主要以Th1型细胞分泌的细胞因子为主,可产生抗感染免疫。4.3患者体内的弓形虫复发或新近感染弓形虫时导致的急性感染,其细胞免疫可能受到一定程度的抑制。4.4HIV阳性者感染弓形虫后,会加速机体免疫功能损害。NO在弓形虫感染中对杀灭细胞内弓形虫、抑制虫体的生长繁殖起到了一定的作用。

常艳萍[2](2013)在《Hp感染动物模型的建立及重组Bb-vacA-hpaA疫苗的免疫保护性研究》文中提出目的:1.构建幽门螺杆菌感染的SPF级BALB/c小鼠动物模型,为进一步研究幽门螺杆菌的致病机制、防治和疫苗研制提供基础。2.探讨重组Bb-vacA-hpaA疫苗对感染幽门螺杆菌的SPF级BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法:1.用幽门螺杆菌标准菌株ATCC43504灌胃感染SPF级BALB/c小鼠,根据胃粘膜组织学检查和快速尿素酶检测确定感染模型的建立。2.随机将BALB/c小鼠分为四组:疫苗组、Bb组、PBS组和空白对照组。疫苗组用幽门螺杆菌重组Bb-vacA-hpaA疫苗灌胃免疫小鼠;Bb组用Bb菌液灌胃小鼠;PBS组用PBS液灌胃小鼠;空白对照组不作任何处理。4w后除空白组外,其他各组小鼠用幽门螺杆菌标准菌株ATCC43504灌胃攻击。3.检测幽门螺杆菌攻击后各组以及空白组小鼠胃粘膜内幽门螺杆菌感染情况、胃组织病理切片、血清中幽门螺杆菌相关抗体以及胃粘膜和肠粘液的SIgA抗体水平;攻击前后疫苗组、Bb组和PBS组胃粘膜内IFN-γ和IL-4含量。4.用MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况,并用脾脏、胸腺指数评价幽门螺杆菌重组Bb-vacA-hpaA疫苗对SPF级BALB/c小鼠的免疫功能的增强作用。结果:1.通过胃粘膜的HE染色、镀银染色和幽门螺杆菌快速尿素酶试验结果显示:感染组的胃组织切片HE染色可见胃粘膜坏死、脱落、等典型炎性病变;镀银染色后胃粘膜内可见大量的Hp定植。成功建立幽门螺杆菌感染的SPF级BALB/c鼠动物模型。2.免疫攻击后各组胃组织切片结果显示:疫苗组快速尿素酶检测阴性的小鼠胃组织HE染色后未见典型炎性病变,镀银染色后胃粘膜内未见幽门螺杆菌定植;Bb组和PBS组的小鼠胃组织HE染色后可见胃粘膜坏死、脱落、充血、炎细胞浸润等典型炎性病变,镀银染色后胃粘膜内可见大量的幽门螺杆菌定植。空白组小鼠胃粘膜未见异常。3. ELISA法检测攻击后各组小鼠胃粘膜组织匀浆上清和血清中幽门螺杆菌相关抗体以及肠粘液的SIgA抗体水平显示:疫苗组的小鼠体内抗体水平和胃黏膜内细胞因子含量显着高于其他各组。4.MTT法检测表明重组Bb-vacA-hpaA疫苗对幽门螺杆菌抗原刺激的脾细胞增殖水平显着高于未免疫组。结论:1.成功建立幽门螺杆菌感染的SPF级BALB/c小鼠动物模型。2.重组Bb-vacA-hpaA疫苗对幽门螺杆菌感染有一定的免疫保护作用。

钱为民[3](2013)在《微量明胶颗粒凝集法检测龈沟液和口腔黏膜渗出液HIV-1抗体的研究》文中研究指明[目的]本实验通过微量明胶颗粒凝集法(Gelatin particles Aggregation Less-Sensitive method, PA-LS)对三组研究对象的龈沟液(Gingival Crevicular Fluid, GCF)和口腔黏膜渗出液(Oral Mucosal Transudate, OMT)进行人类免疫缺陷病毒-1(Human Immunodeficiency Virus-1, HIV-1)抗体检测,检验PA-LS检测GCF和OMT样本HIV-1抗体的可行性,为口腔科门诊患者非侵入性HIV-1抗体椅旁检测的研究提供依据。[方法]三组研究对象共1116例,其中包括HIV-1阳性组50例抗体阳性确认者、高危人群组666例吸毒人员和普通人群组400例普通人,分别采集上述三组人群GCF和OMT样本用PA-LS进行HIV-1抗体检测,666例吸毒人员同时采集静脉血液用ELISA检测血清样本HIV-1抗体。50例HIV-1阳性确认者GCF和OMT样本检测结果为阴性或可疑者,采集静脉血液用ELISA对血清样本进行复检并以WB确认;666例吸毒人员GCF、OMT或血清样本检测结果出现阳性或可疑者,血清样本进行WB确认;400例普通人GCF和OMT样本检测结果为阳性或可疑者,采集静脉血液用ELISA对血清样本进行复检并以WB确认。以WB确认的最终结果评价PA-LS检测GCF和OMT样本HIV-1抗体的灵敏度、特异度、漏诊率、误诊率、阳性预测值和阴性预测值;以ELISA检测血清样本结果作为标准,采用诊断试验的一致性检验和χ2检验对实验数据进行统计学分析,PA-LS检测GCF和OMT样本结果分别与ELISA检测血清样本结果对比,Kappa>0.8说明两种检测方法检测结果具有高度一致性,P>0.05则说明两种检测方法间差异无统计学意义。[结果](1)50例HIV-1阳性组:PA-LS检测GCF样本HIV-1抗体灵敏度为100%,漏诊率为0;PA-LS检测OMT样本HIV-1抗体灵敏度为100%,漏诊率为O。(2)666例高危人群组:PA-LS检测GCF样本HIV-1抗体灵敏度为100%,特异度为99.10%,漏诊率为0,误诊率为0.90%,阳性预测值为95.57%,阴性预测值为100%;用一致性检验进行统计学分析:PA-LS检测GCF样本中HIV-1抗体与ELISA检测血清样本中HIV-1抗体,两种检测方法检测结果具有高度一致性(Kappa>0.8),用χ2检验对数据进行统计学分析:两种检测方法间的差异无统计学意义(P>0.05)。PA-LS检测OMT样本HIV-1抗体灵敏度为100%,特异度为97.49%,漏诊率为0,误诊率为2.51%,阳性预测值为88.52%,阴性预测值为100%;用一致性检验对数据进行统计学分析:PA-LS检测OMT样本中HIV-1抗体与ELISA检测血清样本中HIV-1抗体,两种方法检测结果具有高度一致性(Kappa>0.8),用χ2检验对数据进行统计学分析:两种检测方法间的差异有统计学意义(P<0.05)。(3)400例普通人群组:PA-LS检测GCF样本HIV-1抗体结果均为阴性;PA-LS检测OMT样本HIV-1抗体,结果为阴性399例,可疑1例,对结果为可疑的OMT样本用PA-LS进行复检结果呈阴性。[结论]在本实验中,较之ELISA检测血清样本HIV-1抗体,PA-LS检测GCF样本HIV-1抗体具有无侵入性,准确性高的特点;(2)较之ELISA检测血清样本中HIV-1抗体,PA-LS检测OMT样本HIV-1抗体具有无侵入性的特点,但准确性较GCF样本低。

蔺学芳[4](2008)在《HIV-1包膜糖蛋白gp120s在大肠杆菌中的表达纯化和初步应用》文中指出人类免疫缺陷病毒(HIV)是引起艾滋病的病原体,分为两型:HIV-1和HIV-2,主要为HIV-1。它和一般的病毒有明显的差别,首先是其基因组相对复杂,编码更多的蛋白质来调控病毒潜伏、激活、转录与复制等过程,其次是它在宿主个体内变异迅速。鉴于HIV-1包膜糖蛋白gp120是HIV-1的主要抗原成分,是检测HIV抗体诊断试剂盒的重要组成成分,也是制备抗gp120单克隆抗体必需的免疫原,应用广泛,意义十分重大。本研究利用分子生物学手段,将gp120的部分编码基因(命名为gp120s)重组到大肠杆菌的表达载体中,并成功地进行了蛋白表达。外膜糖蛋白gp120s的编码基因的克隆和在大肠杆菌中的表达。用聚合酶链式反应PCR从HIV-1型国际标准株pHXB2-gp160的基因序列中扩增出糖蛋白片段基因537bp,插入质粒pET32a中构成重组表达质粒pET32a-gp120s,将其转化大肠杆菌BL21后获得了高效表达,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析其表达产物证实蛋白得到表达且主要存在于包涵体中,凝胶扫描成像分析证实其表达量占菌体总蛋白的45.35%。在诱导4个小时蛋白表达量最大,以包涵体的形式表达。包涵体经过洗涤、溶解、复性和过镍柱后,其纯度达到85%,表明已获得高纯度的目的蛋白。用纯化的重组gp120蛋白作为包被抗原,间接ELISA对5份已知HIV阳性血清中的gp120抗体进行检测,结果表明该纯化蛋白具有一定的抗原活性,能特异性地与HIV抗体反应。本研究在大肠杆菌中成功表达了gp120s蛋白,为进一步发展HIV诊断试剂,研究AIDS亚单位疫苗奠定了一定的基础,为研究HIV主要抗原蛋白的性质提供可能,也为制备HIV-1的诊断抗原和基因工程重组疫苗打下基础。人细胞色素2A6作为细胞色素P450家族中重要的一员在许多药物的代谢过程中发挥着重要的作用。本研究利用体外重组技术,克隆及表达CYP2A6野生株,建立了一个研究CYP2A6酶的平台。通过对野生型进行酶动力学分析和药物抑制高通量筛选,测定酶动力学常数和药物抑制常数,所得数据可为以后研究其多态性等位基因在药物代谢中的作用和在新药开发早期进行新药评价提供重要的信息。通过定点突变法得到CYP2A6野生型的cDNA(1.5Kb),并将之克隆到酵母表达载体pYES2/CT上,通过测序得以证实;重组质粒转入已经整合了细胞色素P450氧化还原酶基因(POR)的酿酒酵母中,半乳糖诱导表达目的蛋白,利用SDS-PAGE和Western Blot分析表达产物,结果表明菌株得到表达,所得蛋白约为55Kd,与预期大小相同。大量诱导高表达菌株并制备微粒体蛋白,将所制备的微粒体用CO还原示差光谱法进行P450含量测定,在450nm处有吸收峰,含量为23.8 pmol/mg。用适量微粒体蛋白与2A6特异性荧光底物Coumarin进行酶学反应,所得数据用非线性回归分析法计算出Km值、Vmax值和内在清除率CLint值(Vmax/Km),结果表明:酶活很好,得到相应值均与相关报导相近。将底物浓度固定,与系列浓度的抑制剂共同孵育,用荧光检测技术测定已知抑制剂对重组CYP2A6野生型酶的抑制常数,结果表明:CYP2A6特异性抑制剂反苯环丙胺对重组CYP2A6野生型酶有特异性抑制,IC50约为0.05μM,与相关报道数据接近。本文同时用高效液相色谱法初步检测CYP4502A6的酶动力学,摸索条件,所得数据同荧光分析法计算其Km值、Vmax值和内在清除率CLint值(Vmax/Km),与荧光分析法比较,具有非常好的一致性,在说明这个酶稳定性好的同时,也说明这两种方法的科学一致性,使实验结果更加可信。本研究成功构建了CYP2A6野生型基因的酿酒酵母表达体系,所诱导制备的酵母微粒体蛋白活性良好而稳定,所建立的CYP2A6体外生化检测系统和药物高通量抑制筛选系统高效、灵敏、简便,从而为下一步研究与CYP2A6有关的药物-药物相互作用奠定基础,同时也有助于临床上的降低不良反应和提高药效。

冯劼[5](2006)在《重组HIV-1包膜糖蛋白gp120和gp41的表达、纯化及初步应用》文中进行了进一步梳理人类免疫缺陷病毒(HIV)是引起艾滋病的病原体,分为两型:HIV-1和HIV-2,主要为HIV-1。它和一般的病毒有明显的差别,首先是其基因组相对复杂,编码更多的蛋白质来调控病毒潜伏、激活、转录与复制等过程,其次是它在宿主个体内变异迅速。鉴于HIV-1包膜糖蛋白gp120和gp41是HIV-1的主要抗原成分,是检测HIV抗体诊断试剂盒的重要组成成分,也是制备抗gp120和gp41单克隆抗体必需的免疫原,应用广泛,意义十分重大。本研究利用分子生物学手段,将gp120和gp41的编码基因分别重组到毕赤酵母及大肠杆菌的表达载体中,并成功地进行了蛋白表达。 外膜糖蛋白gp120的编码基因的克隆和在毕赤酵母中的表达。以质粒pHXB2-gp160为模板进行PCR,扩增出gp120抗原的全长DNA(gp120L)和短片段DNA(gp120S),构建了酵母表达载体pPICZ α A-gp120L和pPICZ α A-gp120S。将重组质粒线性化后转化到毕赤酵母GS115细胞株,使gp120基因同源重组整合到毕赤酵母的染色体上,经过选择培养基、PCR鉴定、Zeocin抗性筛选后,将得到的阳性菌株进行甲醇诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot分析表达产物,结果表明gp120L基因没有得到表达,gp120S基因在酵母胞内有微量表达,表达产物为19 kD。 跨膜糖蛋白gp41短片段基因在大肠杆菌中的表达、纯化及初步应用。同样以pHXB2-gp160为模板进行PCR,扩增出gp41抗原短片段DNA,构建重组表达质粒pET32a-gp41S,转化大肠杆菌BL21(DE3)plys,用IPTG诱导表达,表达产物经过SDS-PAGE和Western blot分析证实35.5 kD的目的蛋白gp41S主要存在于包涵体中,凝胶扫描成像分析证实其表达量占菌体总蛋白的10%以上。包涵体经过洗涤、溶解和复性后,纯度可达90%以上,表明已获得高纯度的目的蛋白。用纯化的重组gp41蛋白作为包被抗原,应用间接ELISA法对4份HIV阳性血清中的gp41抗体进行检测,结果表明该纯化蛋白具有一定的抗原活性,能特异性地与HIV抗体反应。用该蛋白免疫小鼠,经过三次免疫后抗体效价可达

柏兵[6](2003)在《C3d单抗的研制及其在滴金免疫测定C3d方面的初步应用》文中研究指明背景 C3d是补体C3的裂解片段,是补体系统活化的标志。在多种补体系统参与的感染性疾病和自身免疫性疾病中,测定血浆C3d水平,有助于判断病情和疗效。在过去的近二十年中,C3d一直是研究的热点,国外不但对C3d的生成过程、分子结构、生物学活性等作了基础性研究,还研究了某些感染性疾病和自身免疫性疾病中C3d水平的变化,国内在这方面也作了不少实验研究。目前,市场上还没有C3d的纯品及其单抗供应,为了在临床上推广应用C3d的测定,并为深入研究提供方便,我们利用菊糖-C3b和PEG等,制备了C3d单抗和多抗,并研制了免疫金层析试条,对轻、中重型肝炎患者的血浆C3d水平进行测定,并对其临床意义作了初步研讨。 目的 研制C3d单抗并标记肢体金,利用免疫金层析测试法(immunochromatographic assay)快速、简便测定轻型、中重型乙型病毒性肝炎患者血浆C3d水平,以判断其体内补体活化情况。 方法 1.C3d单克隆抗体的制备 用菊糖活化并结合人新鲜血清中的补体C3b成分,制备菊糖-C3b,以此作为抗原去免疫BALB/c小鼠,制备杂交瘤。以羊抗C3IgG包被酶标反应板,并从人老化血清中捕获C3d,以此检测BALB/c小鼠血清C3d抗体,并筛选阳性杂交瘤。待BALB/c小鼠血清抗C3d阳性时,将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合并用HAT培养基作选择性培养,通过检测杂交瘤上清中分泌C3d单抗情况,筛选阳性杂交瘤细胞,经扩增和多次亚克隆,直至所有单个细胞形成的克隆培养上清均呈C3d抗体阳性,可确定为单克隆抗体细胞系建立。将杂交瘤于BALB/c小鼠腹水中扩增,检测C3d单抗并收集和提纯。 2.C3d单抗的特异性的分析 利用protein G柱亲和层析提取单抗IgG和C3d复合体,一并做SDS-PAGE,根据分子量,判断与单抗特异结合的是否为C3d,间接证明C3d单抗的特异性。 南京医科大学硕士学位论文3.C3d单抗标i己胶体金 将提纯的C3d单抗屹G进行低盐透析, 确定与胶体金标记的最适量,并在 pH约 8、0下进行标记。离。。 浓缩。4.免疫金层析试条的制备 利用提纯的羊抗人瞩lgG和羊抗鼠 lgG分别在硝酸纤维膜上划线并封J札 与吸样材料、玻璃纤维膜 (免疫金垫料)、吸水材料组合在一起制备免疫金层析试条。根据 所测定的 30例正常人和 30例轻型、30例中重型肝炎患者血浆 C3d 水平确定试条应达到的检测限,通过在免疫金中加入不同浓度的 未标记胶体金(游离)的同克隆 C3d单抗来调整检测限。用这些 检测限不同的试条分别去测定样品中的C3d。结果l.SDS-PAGE电泳图上,出现清晰的三根条带,根据分子量 marker 判断,其分子量范围与lgG的轻链、重妓及C3d相符。2.免疫金中未力 C3d游离单抗的试条勺灵敏度在 6-。10ng/ml(试条 1),力 0.lug/ml、0.Zug/nil游离单j;U0) 灵敏度则分另IJ为:10-15ng/ml (试条11)、15-20ng/ml。30佃J正常人在试条1和11检测下老为 阴性】 一 型U门二仅在试壳N立力卜-为3iH性】 而中上型j汁炎在试余 和*检坝下老为阳性。结论l.在没有 C3d纯品的情况下,利用菊糖C3b作为抗原;酶标反应板 包被C3 IgG多抗再捕获C3d作C3d单抗检测板,lA而制备C3d 单抗的方法是切实可行的。2.用proteinG亲和柱提取单抗及其抗原;将该复合物一并做 SDS-PAGE,分析单克隆抗体的特异性,该方法比较简便。3.通过在免疫金中加入游离的同克隆单抗,可以灵活控制斑点金免 疫层析试条的灵敏度。{本免疫金层析测试法测定肝炎患者瞩d水平,可以判断补体活化 程度,辅助诊断乙型肝炎轻重分型。有初步的临床应用价值,并 有待于进一步开发研究。

艾桂萍[7](2002)在《胶体金膜渗滤法测定HIV感染者唾液中分泌型IgA》文中研究表明目的 建立胶体金膜渗滤方法定量测定唾液中分泌型IgA ,观察HIV感染者粘膜免疫功能的改变。 方法 用自行建立的胶体金膜渗滤定量测定方法分别测定HIV病人和HIV携带者唾液中总IgA和IgA1,计算IgA1/IgA比值 ,并且与健康人比较。结果 胶体金膜渗滤方法与速率散射方法测定IgA相关性好 (r =0 .918)。HIV病人唾液中IgA和IgA1/IgA比值明显低于健康人 (P <0 0 0 1) ,HIV携带者唾液中总IgA高于健康人 (P <0 0 0 1) ,IgA1/IgA比值明显低于健康人 (P <0 0 1) ,即以IgA2 升高为主。结论 胶体金膜渗滤法可以作为定量测定方法用于唾液中IgA的快速测定。HIV感染早期粘膜免疫功能略有增强 ,HIV病人粘膜免疫功能明显降低

二、胶体金膜渗滤法测定HIV感染者唾液中分泌型IgA(论文开题报告)

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、胶体金膜渗滤法测定HIV感染者唾液中分泌型IgA(论文提纲范文)

(1)云南西部HIV阳性者弓形虫感染情况及感染免疫的初步研究(论文提纲范文)

目录
摘要
Abstract
前言
第一部分:云南西部 HIV 阳性者弓形虫感染情况调查
    1.实验材料
    2.试验方法
    3. 统计学处理
    4. 结果
    5. 讨论
第二部分 云南西部 HIV 阳性者弓形虫感染免疫的初步研究
    1.实验材料
    2.试验方法
    3. 统计学处理
    4. 结果
    5. 讨论
全文结论
参考文献
附录
综述
    参考文献
致谢

(2)Hp感染动物模型的建立及重组Bb-vacA-hpaA疫苗的免疫保护性研究(论文提纲范文)

英汉缩略语名词对照
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 Hp感染动物模型的建立
    引言
    材料和方法
        1. 实验材料
        2. 实验方法
    结果
    讨论
    小结
第二部分 重组幽门螺杆菌Bb-vacA-hpaA候选疫苗的免疫保护性研究
    引言
    材料和方法
        1. 实验材料
        2. 实验方法
        3 标本检测
        4 统计学处理
    结果
    讨论
    小结
全文总结
参考文献
附录 (攻读硕士期间发表的论文)
文献综述
    参考文献
致谢

(3)微量明胶颗粒凝集法检测龈沟液和口腔黏膜渗出液HIV-1抗体的研究(论文提纲范文)

符号说明
中文摘要
英文摘要
引言
材料与方法
结果
讨论
结论
存在的问题与展望
参考文献
附表
发表文章
综述
    参考文献
致谢

(4)HIV-1包膜糖蛋白gp120s在大肠杆菌中的表达纯化和初步应用(论文提纲范文)

第一部分
    英文缩略语表
    中文摘要
    Abstract
    第一章 文献综述
        1.HIV研究进展
        1.1 艾滋病流行趋势
        1.2 HIV的分型
        1.3 HIV的分子生物学特征
        1.4 HIV的传播途径
        1.5 HIV的生活周期
        1.6 病毒感染和复制
        1.7 HIV感染的机理
        2.HIV-1包膜糖蛋白gp120的研究进展
        2.1 包膜糖蛋白前体gp160的合成和加工
        2.2 外膜糖蛋白gp120与受体识别
        2.2.1 gp120的结构
        2.2.2 gp120与CD4
        2.2.3 gp120的共受体
        2.3 跨膜糖蛋白gp41与病毒-细胞融合
        2.3.1 融膜肽
        2.3.2 gp41膜外侧区的螺旋六员束结构
        2.4 HIV-1入侵机制
        3.HIV诊断与检测的现状
        3.1 血清学实验
        3.1.1 ELISA实验:
        3.1.2 快速检测(RT)实验:
        3.1.3 尿液HIV抗体检测:
        3.1.4 确认试验
        3.2 HIV P24抗原检测
        3.3 核酸检测
        3.4 基因芯片技术的应用
        3.5 CD4/CD8细胞计数
        4.论文研究的目的和意义
    第二章 HIV-1 gp120s在大肠杆菌中的表达、鉴定、纯化和初步应用
        1.材料
        1.1 菌种和质粒
        1.2 材料和试剂
        1.3 实验器材
        1.4 主要溶液配制
        2.方法
        2.1 PCR反应扩增目的基因
        2.2 重组大肠杆菌工程菌的构建
        2.2.1 重组质粒的构建
        2.2.2 大肠杆菌BL21感受态细胞的制备
        2.2.3 重组表达载体的转化
        2.2.4 转化子的PCR鉴定
        2.3 目的蛋白的表达和鉴定
        2.3.1 小量诱导表达
        2.3.2 工程菌的诱导表达
        2.3.4 表达蛋白的可溶性分析
        2.3.5 最佳诱导时间的筛选
        2.3.6 Western blot分析
        2.4 重组蛋白的纯化
        2.4.1 包涵体的提取与纯化
        2.4.2 镍柱亲和纯化目的蛋白
        2.5 纯化蛋白的初步应用
        3.结果
        3.1 gp120s的PCR扩增结果
        3.2 重组表达载体的构建及鉴定
        3.3 工程菌的诱导表达
        3.4 表达蛋白的可溶性分析
        3.5 最适诱导时间筛选结果
        3.6 pET32a-gp120s表达产物的Western-Blot分析
        3.7 包涵体的变性、复性
        3.8 表达产物蛋白的纯化
        3.9 初步应用分析
        4 讨论
        5 小结
        5.1.结论
        5.2.今后工作的展望
        参考文献
第二部分
    英文缩略语表
    中文摘要
    Abstract
    前言
    第一章 文献回顾
        1 人肝细胞色素P450及其在药物代谢中作用的研究进展
        1.1 CYP的命名与分布
        1.2 CYP在药物代谢中的作用及其功能成分
        1.3 与CYP有关的药物代谢研究方法进展
        2 CYP2A6研究进展
        2.1 CYP2A6基因染色体定位及遗传特征
        2.2 CYP2A6酶
        2.3 影响CYP2A6活性的因素
    第二章 CYP2A6野生株在酿酒酵母中的表达、鉴定
        1 材料
        1.1 菌株和质粒
        1.2 试剂
        1.3 主要溶液和培养基
        1.4 主要仪器
        2 方法
        2.1 pYES2/CT-CYP2A6重组表达载体的构建
        2.1.1 PCR引物设计
        2.1.1.1 2A6-WT的回复突变引物
        2.1.1.2 2A6模板的获取
        2.1.2 回复突变获得CYP2A6的cDNA并构建重组表达载体
        2.1.3 CYP2A6野生株重组表达载体的构建及鉴定
        2.2 重组酵母菌株的构建
        2.2.1 酵母感受态细胞的制备
        2.2.2 电转化并筛选重组菌株
        2.3 目的蛋白的表达和鉴定
        2.3.1 重组表达菌株的诱导表达
        2.3.2 酵母菌体样品的处理
        2.3.3 SDS-PAGE分析
        2.3.4 Western blot分析
        2.4 酵母微粒体的制备和检测
        2.4.1 重组酵母菌株的大量诱导表达
        2.4.2 酵母微粒体的制备
        2.4.3 酵母微粒体蛋白测定
        2.4.4 重组CYP2A6微粒体蛋白表达量免疫印迹分析
        2.4.5 微粒体中CYP2A6含量测定
        3 结果
        3.1 pYES2/CT-CYP2A6重组表达载体的构建
        3.1.1 CYP2A6野生株cDNA
        3.1.2 回复突变法扩增2A6 DNA
        3.1.3 CYP2A6重组质粒的鉴定
        3.2 目的蛋白的Western Blot分析
        3.3 CYP2A6微粒体的检测
        3.3.1 BSA标准曲线绘制
        3.3.3 CYP2A6含量测定
        4 讨论
    第三章 人重组CYP2A6多态性酶的酶学分析和药物高通量筛选
        1 材料
        1.1 酵母微粒体
        1.2 主要试剂
        1.3 主要溶液
        1.4 主要仪器
        2 方法
        2.1 酵母微粒体酶活性鉴定
        2.2 酶动力学分析
        2.3 反苯环丙胺对人重组CYP2A6野生株的抑制反应
        2.4 药物高通量筛选
        3 结果
        3.1 酶活性的鉴定
        3.2 酶动力学常数的测定
        3.3 反苯环丙胺对CYP 2A6野生株的抑制反应
        3.4 药物高通量筛选
        4 讨论
    第四章 基于HPLC分析人重组CYP2A6的酶动力学
        1 材料
        1.1 酵母微粒体
        1.2 主要试剂
        1.3 主要溶液
        1.4 主要仪器
        2 方法
        2.1 HPLC条件的确立
        2.2 HPLC最佳方案确定
        2.3 反应条件线性的优化
        2.4 标准曲线的建立
        2.5 酶动力学分析
        2.6 反苯环丙胺的抑制反应
        3 试验结果
        3.1 HPLC条件的确立
        3.2 HPLC最佳方案确定
        3.3 反应条件线性的优化
        3.4 标准曲线的建立
        3.5 酶动力学分析
        3.6 反苯环丙胺的抑制反应
        4 讨论
        5 小结
        5.1.结论
        5.2.今后工作的展望
        参考文献
致谢

(5)重组HIV-1包膜糖蛋白gp120和gp41的表达、纯化及初步应用(论文提纲范文)

英文缩略语表
中文摘要
英文摘要
第一章 前言
    1. HIV研究进展
    2. HIV-1包膜糖蛋白gp120和gp41的研究进展
    3. HIV诊断与检测的现状
    4. 论文研究的目的和意义
第二章 HIV-1 gp120在毕赤酵母中的表达、鉴定
    1. 材料
    2. 方法
        2.1 PCR反应扩增目的基因
        2.2 重组酵母工程菌的构建
        2.3 目的蛋白的表达和鉴定
    3. 结果
    4. 讨论
第三章 HIV-1 gp41在大肠杆菌中的表达、纯化及初步应用
    1. 材料
    2. 方法
        2.1 PCR反应扩增目的基因
        2.2 重组原核工程菌的构建
        2.3 重组蛋白的诱导表达
        2.4 重组蛋白的纯化
        2.5 纯化蛋白的初步应用
    3. 结果
    4. 讨论
小结
参考文献
致谢

(6)C3d单抗的研制及其在滴金免疫测定C3d方面的初步应用(论文提纲范文)

中文摘要(单克隆抗体;补体;C3d;胶体金;免疫金)
英文摘要(monoclonal antibody, complement, C3d, immunogold, colloidal gold)
引言(综述 前言)
材料与方法
    一. C3d单克隆抗体的制备
        1 抗原准备
        2 菊糖-C3b免疫BALB/c小鼠
        3 用终浓度为11%的PEG6000分离C3d与C3的其它裂解成分
        4 单抗与杂交瘤检测方法的建立
        5 杂交瘤的融合与培养
        6 C3d单抗鉴定
        7 阳性杂交瘤的扩增
    二. 斑点金免疫层析试纸条的研制
        1 C3d单抗标记胶体金
        2 斑点金免疫层析试条的设计与制备
        3 根据正常人和肝炎患者C3d水平确立试条检测限
        4 试条检测限的调整
        5 试条在检测乙肝患者血浆C3d水平方面的初步应用
结果
    一 SDS-PAGE分析C3d单抗特异性结果
    二 30例正常人、30例轻型肝炎、30例中重型肝炎患者血浆C3d水平
    三 试条的灵敏度
    四 用免疫金中不加游离单抗与加0.1μg/ml游离C3d单抗的两种试条分别检测正常人和肝炎患者血浆C3d水平的结果
讨论
小结
参考文献
致谢
附录

(7)胶体金膜渗滤法测定HIV感染者唾液中分泌型IgA(论文提纲范文)

1 材料与方法
    1.1 标本的收集和保存
    1.2 抗体包被
    1.3 胶体金标记抗体的制备
    1.4 样品的稀释
    1.5 测定
    1.6 方法学评价
2 结果
    2.1 方法的精密度
    2.2 胶体金膜渗滤法与速率散射法的比较
    2.3 健康人与HIV感染者唾液中IgA、IgA1的测定
3 讨论

四、胶体金膜渗滤法测定HIV感染者唾液中分泌型IgA(论文参考文献)

  • [1]云南西部HIV阳性者弓形虫感染情况及感染免疫的初步研究[D]. 尤英霞. 大理学院, 2013(12)
  • [2]Hp感染动物模型的建立及重组Bb-vacA-hpaA疫苗的免疫保护性研究[D]. 常艳萍. 大理学院, 2013(S2)
  • [3]微量明胶颗粒凝集法检测龈沟液和口腔黏膜渗出液HIV-1抗体的研究[D]. 钱为民. 昆明医科大学, 2013(02)
  • [4]HIV-1包膜糖蛋白gp120s在大肠杆菌中的表达纯化和初步应用[D]. 蔺学芳. 西北大学, 2008(08)
  • [5]重组HIV-1包膜糖蛋白gp120和gp41的表达、纯化及初步应用[D]. 冯劼. 西北大学, 2006(09)
  • [6]C3d单抗的研制及其在滴金免疫测定C3d方面的初步应用[D]. 柏兵. 南京医科大学, 2003(01)
  • [7]胶体金膜渗滤法测定HIV感染者唾液中分泌型IgA[J]. 艾桂萍. 临床检验杂志, 2002(06)

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胶体金膜渗滤法测定HIV感染者唾液中分泌型IgA
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