一、重组人DFF45能抑制爪蟾卵非细胞体系中的凋亡特异核酸酶（论文文献综述）
张广智[1]（2010）在《不同毒力的牛分枝杆菌诱导树突状细胞凋亡的研究》文中研究指明牛结核病是由分枝杆菌引起的一种慢性消耗性人兽共患传染病,可以引起包括人和家畜以及野生动物发病的疾病,被国际动物卫生组织（OIE）定为B类传染病。”全球每年因结核病而使畜牧业产生的直接经济损失约为30亿美元。据统计,全世界约10%以上的人结核病是由牛分枝杆菌病原引起的。牛结核病给畜牧业的发展和人类健康带来重大影响,也同时成为世界性的公共卫生问题。鉴于牛结核病检测方法的不稳定性和疫苗的低保护力,研究牛分枝杆菌的致病机制势在必行。深入探讨牛结核分枝杆菌的致病机制,可以为牛结核的新型诊断方法和疫苗提供更多的理论依据和指导。牛分枝杆菌是细胞内寄生菌,因此细胞免疫和结核病的致病过程密切相关。而树突状细胞是牛分枝杆菌的宿主细胞之一。树突状细胞是目前发现的抗原递呈最强大,唯一在体内可以激活初始性T淋巴细胞的抗原递呈细胞。应用树突状细胞作为牛分枝杆菌的模式细胞,对于研究牛结核的致病机制有重大意义。细胞凋亡也称细胞程序性死亡,是由基因控制的细胞主动死亡的过程。通过细胞凋亡,机体可以清除损伤的细胞或者受病原微生物感染的细胞,以维持机体内环境的相对稳定。本实验室基因芯片结果显示,不同毒力的牛分枝杆菌可以引起树突状细胞不同程度的凋亡,且毒力型牛分枝杆菌引起的树突状细胞的凋亡比卡介苗程度要低。我们应用流式细胞术分析,酶联免疫吸附试验测定DNA片段化,荧光定量PCR, Western blot,通过荧光显微镜观察凋亡细胞的核形态等方法检测树突状细胞凋亡的情况。因此,本课题研究从牛分枝杆菌与树突状细胞的相互作用进行细胞凋亡的初步探讨,主要获得以下结果：1.流式细胞术检测感染树突状细胞细胞的凋亡树突状细胞在感染牛分枝杆菌后,应用PI法通过流式细胞仪测定感染后的树突状细胞的DNA含量变化。流式细胞术结果显示牛分支杆菌弱毒株BCG感染DCs后出现较高的亚二倍体峰,即毒力型牛分支杆菌抑制了DCs的凋亡。经统计学分析后显示,BCG感染组的细胞凋亡率是毒力型牛分支杆菌感染组凋亡率的2.5倍,t检验显示两组数据间差异极其显着（P<0.001）,2.DNA片段化测定感染树突状细胞细胞的凋亡应用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定感染牛分支杆菌后DCsDNA片段化的程度。ELISA结果显示相对于毒力型牛分支杆菌感染组,牛分支杆菌弱毒株BCG感染DCs后细胞质内DNA片段化程度要高。统计学分析显示BCG感染组的细胞凋亡率是毒力型牛分支杆菌感染组凋亡率的1.55倍,t检验显示两组数据间差异极显着（P<0.01）,即卡介苗可以比毒力型牛分支杆菌引起更高程度的细胞凋亡。3.荧光定量PCR检测凋亡相关基因的相对表达情况在荧光定量PCR中,我们选定caspase3, caspase8, caspase9和Dffa基因为目标基因,以β-actin为参照基因,相对于毒力型牛分枝杆菌感染组,卡介苗感染组的树突状细胞的caspase3, caspase8, caspase9,和Dffa基因的表达成上调趋势。其中caspase3, caspase9两个基因上调的倍数均在2.5倍以上,而BCG感染组DCs的caspase8和Dffa基因分别是毒力型牛分枝杆菌感染组DCs相关基因的1.2倍-1.3倍左右。Dffa基因上调倍数结果和芯片结果基本抑制,芯片结果显示相对于毒力型牛分支杆菌,BCG感染组DCs中Dffa基因上调了约0.5倍。凋亡相关基因的上调也再次证明了毒力型牛分枝杆菌抑制了树突状细胞的凋亡,而且由于caspase9基因上调倍数较大,caspase9是内源性细胞凋亡的主要参与基因,因此推测内源性细胞凋亡可能参与了BCG引起的DCs凋亡,相关验证试验正在继续。4. Western blot检测凋亡相关基因的表达相对于空白组细胞,BCG和毒力型牛分枝杆菌感染的树突状细胞的caspase8,9在蛋白水平都有所上调。相对于毒力型牛分枝杆菌感染组细胞,BCG感染组的caspase8,9基因在蛋白水平表达都呈上调趋势。也就是BCG和毒力型牛分枝杆菌都引起了树突状细胞的凋亡,而且毒力型牛分枝杆菌抑制了树突状细胞的凋亡。并且相对于空白组细胞,牛分枝杆菌感染组树突状细胞的caspase9在蛋白水平比caspase8上调的要多,因此推测牛分枝杆菌诱导的树突状细胞凋亡以内源性细胞凋亡为主。5.树突状状细胞核形态的评估应用核酸染料Hoechst33342对感染牛分支杆菌的DCs进行染色,发现作为细胞凋亡的典型特征之一的细胞皱缩和核凝聚现象也在本实验中被观察到。6.树突状细胞感染结核菌后相关细胞因子的表达应用ELISA检测试剂盒检测被感染的树突状细胞分泌细胞因子水平的变化情况,包括IL-1, IL-10, IL-12, TNF-α等。感染毒力型牛分枝杆菌的树突状细胞分泌IL-10和感染BCG的树突状细胞IL-10分泌量差异不大。感染BCG的树突状细胞分泌TNF-α的量是感染毒力型牛分枝杆菌感染组分泌量的1.6倍,IL-10, TNF-α相关数据经过统计学分析后分别为P>0.05和P<0.01,差异程度分别为IL-10差异不显着和TNF-α差异极显着。感染毒力型牛分枝杆菌的树突状细胞分泌IL-1,IL-12的量是感染BCG的树突状细胞分泌量的2倍和1.3倍。IL-1和IL-12数据经过统计学分析后分别为P<0.01和P<0.05,差异程度分别为IL-1差异极显着和IL-12差异显着。
陈默[2]（2008）在《紫外线诱导家蚕卵巢细胞（BmN-SWU1）凋亡的研究》文中研究指明目前华中师大实验小组已经证明,在紫外线照射或杆状病毒诱导的昆虫细胞凋亡中,cytc从线粒体释放到细胞质中,提示了与哺乳动物细胞的凋亡相同,这表明线粒体在昆虫细胞凋亡中也具有重要作用。作为生物学、遗传学和发育生物学模式昆虫之一的家蚕,其细胞凋亡研究尚处于初始阶段,是否存在线粒体途径仍然未知。本研究以家蚕卵巢细胞BmN—SWU1细胞为实验材料,对紫外线诱导的细胞凋亡进行了初步的研究,获得了以下研究结果。1 Bmcytc基因克隆与信息分析本实验成功克隆了家蚕Bmcytc基因,cDNA长为570bp,ORF长324bp（ORF:84-407）,编码108个氨基酸残基,预测分子量为11.7kD。通过结构域预测,编码蛋白含有一个典型的cytc结构域。通过多序列比对显示,与NCBI登录的人、大鼠和果蝇（cytc—d和cytc—p）的蛋白序列相似性分别为75%,83%,75%和88%。基因组序列分析结果显示Bmcytc基因具有4个外显子,外显子/内含子边界处均符合GT-AG规则。参与凋亡时与凋亡蛋白酶激活因子（Apaf—1）相互作用的关键位点在家蚕细胞色素C中是基本保守的。2 UVC诱导家蚕BmN—SWU1细胞凋亡UVC处理家蚕BmN—SWU1细胞后,可诱导BmN—SWU1细胞产生典型细胞凋亡。光镜下可见细胞膜表面突出或形成小泡,细胞破裂成凋亡小体。UVC处理24h后,细胞几乎全部破裂成凋亡小体。Hoechest33258染色显示感染细胞核逐渐形变,直至破裂成小块而被凋亡小体包裹。BmN-SWU1细胞处理后DNA琼脂糖凝胶电泳成典型凋亡细胞DNA梯形电泳谱带。3 UVC诱导家蚕BmN—SWU1细胞凋亡时细胞内线粒体变化流式细胞仪对线粒体膜电位进行检测,结果表明,细胞经罗丹明（Rho—123）染色后在流式细胞仪上检测,UVC处理后12h的BmN-SWU1细胞中,膜电位下降的细胞明显增多,荧光峰左移,即朝荧光强度减少的方向移动,说明此时膜电位下降。Western Blotting检测蛋白cytc在细胞质和线粒体中的含量,结果显示BmN—SWU1细胞在处理后12h线粒体中的cytc被释放到了细胞质中,这与很多在哺乳动物中所作的结果相同。
陈华琴,陈铭珍,陈日玲,方希敏,徐小红,冯华俊[3]（2007）在《细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡时bcl-2 fas基因的表达》文中研究表明目的观察细胞色素C对急性髓系白血病M2型（AML-M2）（HL-60细胞）bcl-2、fas表达的影响,探讨细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的机制。方法将体外培养的HL-60细胞分成六组,细胞色素C终浓度分别为0（对照组）、9.375mg/L、18.75mg/L、37.5mg/L、75mg/L、150mg/L,用流式细胞仪检测细胞色素C对HL-60细胞的凋亡效应,用RT-PCR、westernblotting检测以凋亡为主的HL-60细胞中bcl-2、fas的表达水平。结果流式细胞仪检测表明细胞色素C终浓度分别为0、9.375mg/L、18.75mg/L、37.5mg/L时HL-60细胞是以凋亡效应为主的,bcl-2基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而降低,fas基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而增高,当细胞色素C浓度为75mg/L、150mg/L时,HL-60细胞是以坏死效应为主的。结论细胞色素C能够下调bcl-2mRNA及其蛋白的表达,上调fasmRNA及其蛋白的表达,从而可以诱导HL-60细胞的凋亡。
季哲[4]（2007）在《灵芝活性成分抗肿瘤作用机制的研究》文中研究说明灵芝（Ganoderma lucidum（curtis:Fr.）P.Karst.）在我国已有悠久的应用历史,可用于多种疾病的治疗。灵芝的化学、药理和临床等现代研究也证明灵芝具有抑制肿瘤、保肝、调节血压、降血糖、抗病毒、延缓衰老、抗炎等多种作用,其中灵芝的抗肿瘤作用更是近年来的热点。由于灵芝的化学成分十分复杂,难以得到纯化合物进行抗肿瘤活性及其作用机制的研究,限制了灵芝产业的深入发展。本研究室运用分离纯化与体外筛选模型相结合的方法,分别得到提高免疫功能的活性成分GLIS和诱导细胞凋亡的有效部位GLAI,本论文在前人工作的基础上对它们的作用机制进行探讨,为将来的进一步研究和开发建立了基础。1.灵芝多糖GLIS的免疫刺激活性研究灵芝多糖GLIS是经过多步色谱分离纯化得到的糖蛋白组分,以前的研究发现GLIS可以激活淋巴细胞,并能够特异性地刺激淋巴B细胞增殖,增加NK细胞的活性。本论文在前人工作的基础上,探讨了GLIS对小鼠巨噬细胞株RAw264.7、小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMMs）和小鼠淋巴细胞（MSLs）的免疫调节作用,并对激活巨噬细胞的作用机理进行了研究。GLIS处理小鼠巨噬细胞株RAW264.7后,发现其形态发生了变化,如体积变大,并且形成伪足;同时发现GLIs能刺激RAW264.7细胞呼吸爆发,产生大量活性氧,并刺激RAW264.7细胞释放NO,两项实验结果证明GLIS可激活免疫巨噬细胞的氧依赖杀伤机制;GLIS还刺激RAW264.7细胞增加IL-1β、IL-12p35和IL-12p40细胞因子mRNA的表达,而细胞因子TNF-α、IL-6和IL-18 mRNA的表达则基本无变化;另外还发现其分泌TNF-α、IL-1β和IL-12细胞因子的量明显增加。GLIS处理小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMMs）后,也发现其体积变大,并且形成伪足;同时GLIS也能刺激BMMs呼吸爆发,产生大量活性氧;并刺激BMMs释放NO,结果与RAW264.7细胞株实验相同;GLIS刺激BMMs后相关细胞因子的表达也增加,在mRNA水平,IL-6、IL-12p35和IL-12p40明显增加,TNF-α、IL-1β和IL-18也有所增加。在蛋白水平,TNF-α、IL-1β和IL-12三种细胞因子的表达明显增加。GLIS还可以可刺激淋巴细胞增殖,并且可刺激其呼吸爆发。研究结果显示GLIS通过激活巨噬细胞氧依赖杀伤系统及刺激其表达细胞因子达到全面激活免疫功能进行抗肿瘤的目的。2.灵芝三萜GLAI诱导肠癌细胞凋亡作用研究灵芝三萜GLAI是通过活性跟踪经多步分离纯化从灵芝子实体中分离得到的一个有效部位,对GLAI的理化性质研究发现,其三萜含量为62.8%;HPLC检测发现GLAI含有8个峰,其中有两个峰确定为灵芝酮二醇和丹芝醇A。GLAI对多种肿瘤细胞株具有抑制活性,包括小鼠淋巴癌L1210细胞株、人淋巴癌K562细胞株、人肠癌SW620细胞株和人乳腺癌MCF7细胞株。GLAI处理SW620细胞后,其细胞形态出现明显的变化,细胞变圆、皱缩,体积变小,并可观察到凋亡小体的产生;经过Hoechst 3258荧光染色和annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测,证明SW620细胞发生了凋亡:研究还发现,GLAI处理SW620细胞后,凋亡关键酶Caspase-3的活性明显增高;同时发现,随着药物浓度和作用时间的增加,凋亡抑制基因BCL-2 mRNA的表达,逐渐减少;而凋亡促进基因BAX mRNA的表达随之增加;另外发现,凋亡重要相关因子P53蛋白的表达随着药物浓度的增加而增加,而凋亡抑制蛋白XIAP则随着浓度的增加而减少。研究结果显示GLAI能够通过激活Caspase-3酶途径诱导肠癌细胞SW620凋亡,同时通过上调凋亡促进因子的表达,下调凋亡抑制因子的表达达到诱导SW620细胞凋亡的效果。综上所述,灵芝的抗肿瘤作用一方面是通过灵芝多糖激活免疫细胞,通过提高免疫系统的能力来达到消除肿瘤的目的;另一方面是通过灵芝三萜诱导肿瘤细胞凋亡,从而达到消除肿瘤的效果。因此灵芝的抗肿瘤作用可能是多途径共同作用的结果。
刘丽君[5]（2006）在《Cytc对杆状病毒诱导斜纹夜蛾细胞凋亡的影响》文中进行了进一步梳理我们以前的研究结果已证明,在芹菜夜蛾核型多角体病毒（Syngrapha falcifera multiple nuclear polyhedrosis virus,SfaMNPV）诱导斜纹夜蛾（Spodoptera litura Cells,SL-1）细胞凋亡过程中,细胞色素c（Cytochrome c,cytc）随着诱导时间的延长,不断从线粒体释放到细胞质中。本实验仍然以SfaMNPV诱导SL-1细胞的凋亡系统为研究对象,利用环孢菌素A（Cyclosprin A,CSA）对线粒体膜完整性的保护作用,进一步研究了cytc对此凋亡系统的影响作用。完成的工作包括以下几个方面: （1） cytc的释放与线粒体膜电位的关系 用流式细胞仪检测线粒体膜电位（ΔΨm）的变化,并用western检测线粒体与细胞质中cytc的变化。结果表明病毒感染4hr后即出现膜电位的下降,且下降趋势呈时间依赖性;而病毒加CSA处理后的细胞其线粒体膜电位下降趋势并不明显。Western检测到病毒感染实验组,随感染时间的延长,线粒体中cytc的量逐渐降低,细胞质中cytc的量逐渐升高;而病毒加CSA处理组,线粒体中cytc的量并没有随着感染时间的延长而明显降低,即CSA抑制了线粒体膜电位的降低和cytc从线粒体到细胞质的转位。这表明在SfaMNPV这种凋亡诱导因子的作用下,cytc从线粒体到细胞质的转位可能依赖于线粒体膜的通透性。 （2） cytc对caspase-3的活性及凋亡形态的影响 对caspase-3的活性检测,首先用caspase-3特异性序列人工合成荧光底物AC-DEVD-AFC与所提取的细胞裂解液成份反应,置荧光分光光度计上检测,结果显示SfaMNPV感染4小时后即检测到caspase-3的活性,且其活性呈时间依赖性增强。用caspase-3兔抗多克隆抗体进行western检测,procaspase-3的表达量逐渐减少,即caspase-3活性逐渐增加。而病毒加CSA处理组的荧光强度值与procaspase-3的表达量都没有明显的变化。表明CSA抑制了caspase-3的活性。 对细胞凋亡形态学观察,分别对三个实验组的细胞进行DAPI染色,DNA电泳,置荧光显微镜下与紫外灯下观察、拍照,其结果显示CSA处理后的细胞经DAPI染色未被检测到凋亡小体,DNA电泳也未检测到有梯形条带。我们的实验还证明了在处理时间范围内CSA本身对细胞并不致死,因此我们推测CSA保护了线粒体膜的完整性,抑制cytc从线粒体释放到细胞质中,从而抑制caspase-3的活化与DNA片段化的下游事件,这提示了cytc在杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡中的重要作用。
卢智刚,杨巍,曹圻,陶伟,胡建成,翟中和[6]（2001）在《爪蟾卵提取物中凋亡特异核酸酶抑制物的鉴定》文中研究指明细胞色素ｃ加至非洲爪蟾（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）卵提取物Ｓ－１５０中，能诱导外源细胞核发生凋亡．诱导过程中，爪蟾凋亡特异核酸酶ＸＡＤ被激活，在核小体间切割染色质，形成ＤＮＡ梯（ｌａｄｄｅｒ）．实验表明，正常卵提取物中大量存在凋亡特异核酸酶ＸＡＤ抑制因子ＩＸＡＤ，抑制ＸＡＤ的核酸酶活性；ＩＸＡＤ分子量约４０ｋｕ，正常状态下以二聚体形式或与ＸＡＤ形成复合体存在；凋亡过程中ＩＸＡＤ被降解，导致ＸＡＤ被释放激活．Ｗｅｓｔｅｒｎ检测和交叉抑制实验显示ＩＸＡＤ与ＤＦＦ４５在结构与功能上可能同源．实验结果进一步证明凋亡途径在进化上的保守性．
杨巍,卢智刚,张岚,翟中和[7]（2001）在《重组人DFF45能抑制爪蟾卵非细胞体系中的凋亡特异核酸酶》文中研究表明利用RT PCR技术从人宫颈癌细胞系HeLa的总RNA中扩增了人DNA断裂因子 （DFF） 4 5的cDNA ,将其克隆到pET 2 8a（+ ）表达载体中 ,经IPTG诱导在大肠杆菌BL2 1（DE3）中获得了高效表达。表达的DFF45重组蛋白占菌体总蛋白质的 5 6 .6 % ,并位于细胞的可溶性组分中。利用融合在DFF45N端的His·Tag ,采用亲和层析的方法纯化重组蛋白 ,再经热变性处理去除杂蛋白后 ,获得了电泳纯的DFF45。将纯化的重组人DFF45加入到爪蟾卵非细胞凋亡体系中 ,可有效地抑制外源λDNA的水解 ,并可抑制外源鸡红细胞核形成凋亡特有的DNA梯。实验结果说明爪蟾卵非细胞体系中确实存在凋亡特异核酸酶 ,而且其活性可为重组人DFF45所抑制
二、重组人DFF45能抑制爪蟾卵非细胞体系中的凋亡特异核酸酶（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、重组人DFF45能抑制爪蟾卵非细胞体系中的凋亡特异核酸酶（论文提纲范文）
（1）不同毒力的牛分枝杆菌诱导树突状细胞凋亡的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1. 文献综述 |
| 前言 |
| 1.1 细胞凋亡的研究进展 |
| 1.1.1 细胞凋亡的概念 |
| 1.1.2 细胞凋亡与机体免疫 |
| 1.1.3 细胞凋亡的生物学特征及检测方法 |
| 1.1.4 细胞凋亡的信号通路及相关调控基因 |
| 1.1.4.1 细胞凋亡的信号通路 |
| 1.1.4.2 细胞凋亡的相关调节基因 |
| 1.2 结核分支杆菌与细胞凋亡 |
| 1.2.1 结核病病原及其宿主细胞 |
| 1.2.2 caspase与结核分支杆菌诱导的细胞凋亡 |
| 1.2.3 结核分枝杆菌相关蛋白和细胞凋亡的研究 |
| 1.2.4 结核分枝杆菌相关蛋白和细胞凋亡的研究 |
| 1.2.5 高毒力结核分枝杆菌抑制细胞凋亡 |
| 1.3 树突状细胞凋亡的生物学意义 |
| 1.3.1 树突状细胞的生物学特性 |
| 1.3.2 免疫细胞和结核分支杆菌相互作用的研究 |
| 1.3.3 树突状细胞凋亡的相关研究 |
| 1.3.4 树突状细胞凋亡的生物学意义 |
| 2. 研究目的与意义 |
| 3. 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 菌种及实验动物 |
| 3.1.2 细胞 |
| 3.1.3 培养基 |
| 3.1.4 荧光定量PCR相关引物 |
| 3.1.5 主要试剂 |
| 3.2 标准菌株的培养计数 |
| 3.3 树突状细胞的培养与鉴定 |
| 3.3.1 树突状细胞的培养 |
| 3.3.2 树突状细胞的鉴定 |
| 3.4 树突状细胞细菌感染实验 |
| 3.5 树突状细胞凋亡检测 |
| 3.5.1 流式细胞仪测定细胞周期 |
| 3.5.2 ELISA检测DNA片段化 |
| 3.5.3 Real time PCR检测凋亡相关基因的转录水平表达情况 |
| 3.5.3.1 树突状细胞RNA的提取 |
| 3.5.3.2 提取RNA反转录合成cDNA |
| 3.5.3.3. 荧光定量PCR反应 |
| 3.5.4 Western Blot检测部分凋亡蛋白 |
| 3.5.5 凋亡细胞的核形态评估 |
| 3.6 树突状细胞感染后细胞因子的表达 |
| 4. 结果 |
| 4.1 树突状细胞分化与纯度鉴定 |
| 4.2 细胞周期测定分析树突状细胞凋亡 |
| 4.3 ELISA检测DNA片段化评价树突状细胞细胞凋亡 |
| 4.4 Real time PCR检测凋亡相关基因的转录水平表达情况 |
| 4.5 Western Blot检测部分凋亡蛋白 |
| 4.6 树突状细胞凋亡的细胞核形态评估 |
| 4.7 细胞因子的表达 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 未成熟树突状细胞的培养 |
| 5.2 感染用标准菌株的培养和计数 |
| 5.3 不同毒力的牛分支杆菌诱导树突状细胞凋亡的结果比较与分析 |
| 5.4 牛分支杆菌诱导DCs凋亡差异与结核病致病机理的之间的关系 |
| 5.5 不同毒力的牛分支杆菌诱导树突状细胞凋亡信号通路的初步探讨 |
| 5.6 感染不同毒力的牛分支杆菌后树突状细胞分泌细胞因子的情况 |
| 6. 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）紫外线诱导家蚕卵巢细胞（BmN-SWU1）凋亡的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 细胞凋亡概述 |
| 1.1.1 细胞凋亡概念 |
| 1.1.2 细胞凋亡的特征 |
| 1.1.3 细胞凋亡的生物学意义 |
| 1.2 细胞凋亡途径 |
| 1.2.1 线粒体凋亡信号途径 |
| 1.2.2 死亡受体凋亡信号途径 |
| 1.2.3 内质网凋亡信号途径 |
| 1.3 UV诱导的细胞凋亡 |
| 1.3.1 UV诱变机理 |
| 1.3.2 UV诱导的细胞凋亡 |
| 1.3.3 UV诱导的细胞凋亡可能机制 |
| 1.4 细胞凋亡检测常用方法 |
| 1.4.1 形态学观察 |
| 1.4.2 DNA Ladder分析 |
| 1.4.3 mRNA水平的检测 |
| 1.4.4 抗体法 |
| 1.4.5 酶活性测定 |
| 1.4.6 TUNEL |
| 1.4.7 流式细胞仪分析 |
| 1.5 家蚕细胞凋亡研究现状与前景 |
| 第二章 引言 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 研究目的和意义 |
| 2.3 主要内容和技术路线 |
| 2.3.1 主要内容 |
| 2.3.2 技术路线 |
| 第三章 材料与方法 |
| 3.1 主要材料和试剂 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 培养基及血清 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 主要药品 |
| 3.1.5 主要试剂的配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 信息分析 |
| 3.2.2 Bmcytc基因克隆 |
| 3.2.3 紫外线处理细胞 |
| 3.2.4 Hoechest33258核染色 |
| 3.2.4 细胞DNA提取与电泳分析 |
| 3.2.5 细胞线粒体膜电位检测 |
| 3.2.6 细胞质及线粒体组分制备 |
| 3.2.8 Western Blotting分析 |
| 第四章 结果与分析 |
| 4.1 Bmcytc基因的克隆及信息分析 |
| 4.1.1 Bmcytc基因的克隆 |
| 4.1.2 Bmcytc基因的序列分析 |
| 4.2 UVC诱导BmN—SWU1细胞凋亡 |
| 4.2.1 光学显微镜观察 |
| 4.2.2 Hochest33258核染 |
| 4.2.3 DNA电泳检测结果 |
| 4.3 线粒体膜电位的变化 |
| 4.4 UVC诱导BmN—SWU1细胞凋亡时线粒体中的cytc的变化 |
| 第五章 小结 |
| 5.1 Bmcytc基因克隆与信息分析 |
| 5.2 UVC诱导BmN—SWU1细胞凋亡的检测 |
| 5.3 UVC诱导BmN—SWU1细胞凋亡时线粒体的变化 |
| 第六章 讨论 |
| 6.1 Bmcytc基因与细胞凋亡 |
| 6.2 对家蚕细胞凋亡信号通路的初步分析 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 论文发表 |
| 部分缩写的中英文对照 |
| 致谢 |
（4）灵芝活性成分抗肿瘤作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号与缩略语 |
| 第一章 文献综述 |
| 一、灵芝的研究概况 |
| 灵芝简介 |
| 1 灵芝的化学成分 |
| 1.1 多糖 |
| 1.2 三萜类化合物 |
| 1.3 其它化学成分 |
| 1.3.1 核苷类 |
| 1.3.2 甾醇类 |
| 1.3.3 生物碱类 |
| 1.3.4 呋喃衍生物类 |
| 1.3.5 氨基酸多肽类 |
| 1.3.6 其它 |
| 2 灵芝的药理活性 |
| 2.1 调节免疫作用 |
| 2.2 抗肿瘤作用 |
| 2.3 其他药理作用 |
| 2.3.1 降血糖作用 |
| 2.3.2 保肝作用 |
| 2.3.3 抗衰老作用 |
| 2.3.4 抗炎镇痛作用 |
| 2.3.5 保护心脏作用 |
| 2.3.6 抗凝血作用 |
| 二、生物免疫疗法在抗肿瘤中的应用 |
| 1 肿瘤治疗概述 |
| 2 免疫疗法的原理 |
| 3 免疫疗法的分类 |
| 3.1 特异性自动(主动)免疫疗法 |
| 3.2 特异性被动免疫疗法 |
| 3.3 过继免疫治疗 |
| 3.4 非特异性免疫疗法 |
| 4 免疫疗法的应用 |
| 4.1 全肿瘤细胞疫苗 |
| 4.2 基因修饰疫苗 |
| 4.3 DC疫苗 |
| 4.4 自体T淋巴细胞疗法 |
| 4.5 同种异体淋巴细胞疗法 |
| 5 免疫疗法的局限性及其发展趋势 |
| 三、细胞凋亡在抗肿瘤中的应用 |
| 1 细胞凋亡的生物学意义 |
| 2 细胞凋亡的形态学和生化特征 |
| 3 细胞凋亡的途径 |
| 3.1 细胞凋亡的死亡受体途径 |
| 3.2 细胞凋亡的线粒体途径 |
| 4 细胞凋亡的调控 |
| 4.1 caspases蛋白酶的活化及其在凋亡通路中的主导作用 |
| 4.1.1 caspases的结构与特征 |
| 4.1.2 caspases的活化 |
| 4.1.3 caspases对细胞结构的降解 |
| 4.2 细胞凋亡的基因调控 |
| 4.3 Bcl-2家族蛋白与凋亡调控 |
| 5 凋亡与肿瘤的关系 |
| 四、选题依据 |
| 第二章 灵芝多糖GLIS的免疫调节作用研究 |
| 一、前言 |
| 1 灵芝多糖免疫调节作用的研究现状 |
| 2 已有的工作基础 |
| 3 存在问题与研究目标 |
| 二、材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验材料与药物 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 细胞株 |
| 1.4 试剂配制 |
| 1.4.1 细胞培养相关试剂 |
| 1.4.2 细胞活性试验相关试剂 |
| 1.4.3 Griess试剂 |
| 1.4.4 Luminol发光液 |
| 1.4.5 RT-PCR相关试剂 |
| 1.4.6 ELISA相关试剂 |
| 1.5 仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 单糖组成分析 |
| 2.2 蛋白含量测定 |
| 2.3 小鼠脾淋巴细胞(MSLs)的分离制备 |
| 2.4 小鼠RAW264.7巨噬细胞株的培养 |
| 2.5 L929细胞的培养 |
| 2.6 小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs)的制备和培养 |
| 2.7 细胞活性测定 |
| 2.8 细胞呼吸爆发测定 |
| 2.9 巨噬细胞NO产量测定 |
| 2.10 RT-PCR法检测细胞因子基因表达 |
| 2.10.1 总RNA的提取 |
| 2.10.2 RNA反转录 |
| 2.10.3 PCR反应 |
| 2.11 ELISA法检测细胞因子 |
| 三、结果与分析 |
| 1 灵芝多糖GLIS的理化性质分析 |
| 1.1 灵芝提取物刺激细胞活性实验 |
| 1.2 灵芝多糖GLIS的单糖组成和蛋白含量分析 |
| 2 GLIS对小鼠巨噬细胞株RAW264.7的免疫调节作用 |
| 2.1 RAW264.7细胞形态的变化 |
| 2.2 灵芝多糖GLIS对RAW264.7释放NO量的影响 |
| 2.3 灵芝多糖GLIS对RAW264.7的呼吸爆发的影响 |
| 2.4 灵芝多糖GLIS对RAW264.7细胞表达相关细胞因子mRNA水平的影响 |
| 2.4.1 不同浓度GLIS对细胞因子mRNA表达水平的影响 |
| 2.4.2 不同处理时间对细胞因子mRNA表达水平的影响 |
| 2.5 灵芝多糖GLIS对RAW264.7细胞分泌不同细胞因子的影响 |
| 3 GLIS对小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs)的免疫调节作用的研究 |
| 3.1 经GLIS处理后BMMs细胞形态的变化 |
| 3.2 灵芝多糖GLIS对BMMs细胞活性的影响 |
| 3.3 灵芝多糖GLIS对BMMs释放NO量的影响 |
| 3.4 灵芝多糖GLIS对BMMs产生呼吸爆发的影响 |
| 3.5 灵芝多糖GLIS对BMMs细胞表达相关细胞因子mRNA水平的影响 |
| 3.6 灵芝多糖GLIS对BMMs细胞分泌不同细胞因子的影响 |
| 4 GLIS对小鼠脾淋巴细胞(MSLs)的免疫调节作用的研究 |
| 4.1 灵芝多糖GLIS对MSLs呼吸爆发的影响 |
| 四、结论 |
| 第三章 灵芝三萜成分对肿瘤细胞的致凋亡作用 |
| 一、前言 |
| 1 灵芝三萜抗肿瘤作用研究概况 |
| 2 已有的工作基础 |
| 3 存在的问题和研究目标 |
| 二、材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 药物 |
| 1.2 试剂配制 |
| 1.2.1 三萜测定相关试剂 |
| 1.2.2 细胞培养相关试剂 |
| 1.2.3 肿瘤抑制试验相关试剂 |
| 1.2.4 荧光染色试剂 |
| 1.2.5 annexin V-FITC/PI双染试剂 |
| 1.2.6 RT-PCR相关试剂 |
| 1.2.7 Caspase-3检测试剂 |
| 1.2.8 Western-blot相关试剂 |
| 1.3 细胞株 |
| 1.4 仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 GLAI中三萜含量的测定 |
| 2.2 GLAI HPLC分析 |
| 2.3 悬浮肿瘤细胞株的培养(L1210) |
| 2.4 贴壁肿瘤细胞株的培养(SW620、K562和MCF7) |
| 2.5 抑制肿瘤细胞增殖实验 |
| 2.6 Hoechst3258荧光染色 |
| 2.7 annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测 |
| 2.8 RT-PCR法检测细胞因子基因表达变化 |
| 2.8.1 总RNA的提取 |
| 2.8.2 RNA反转录 |
| 2.8.3 PCR反应 |
| 2.9 GLAI处理对SW620细胞Caspase-3酶活性变化的检测 |
| 2.10 Western-blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达 |
| 2.10.1 不同浓度药物处理细胞 |
| 2.10.2 蛋白样品制备 |
| 2.10.3 BCA法测蛋白含量 |
| 2.10.4 SDS—PAGE电泳 |
| 2.10.5 硝酸银染色 |
| 2.10.6 转膜 |
| 2.10.7 丽春红染色 |
| 2.10.8 免疫反应 |
| 2.10.9 显色 |
| 三、结果与分析 |
| 1 样品的制备 |
| 1.1 样品的分离纯化 |
| 1.2 灵芝三萜抑制肿瘤细胞增殖活性比较 |
| 1.3 样品的理化性质分析 |
| 1.3.1 GLAI三萜含量的测定 |
| 1.3.2 GLAI HPLC分析 |
| 2 GLAI对SW620凋亡的影响 |
| 2.1 GLAI抑制不同肿瘤细胞增殖 |
| 2.2 SW620经GLAI处理后细胞形态的变化 |
| 2.3 GLAI处理SW620细胞Hoechst3258荧光染色结果 |
| 2.4 GLAI处理SW620细胞annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪分析 |
| 2.5 GLAI处理对SW620细胞凋亡基因mRNA表达变化的影响 |
| 2.6 GLAI处理SW620细胞Caspase-3酶活性变化的检测 |
| 2.7 SW620细胞经GLAI处理后细胞凋亡相关蛋白的表达变化 |
| 四、结论 |
| 第四章 全文讨论 |
| 一、灵芝具有多相抗肿瘤的活性 |
| 二、GLIS多糖通过免疫激活抗肿瘤 |
| 三、GLIS可特异性激活巨噬细胞 |
| 四、GLAI可诱导肠癌细胞凋亡 |
| 五、GLAI诱导肠癌凋亡的相关信号传导途径中的蛋白发生变化 |
| 六、灵芝单一活性物质与多种活性物质作用的比较 |
| 第五章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文目录 |
（5）Cytc对杆状病毒诱导斜纹夜蛾细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| Ⅰ 前言 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 细胞凋亡的信号传导通路 |
| 1.2.1 线粒体凋亡信号通路 |
| 1.2.2 死亡受体凋亡信号通路 |
| 1.2.3 内质网凋亡信号通路 |
| 1.3 凋亡通路的调节 |
| 1.3.1 核转录因子以线粒体为中介对细胞凋亡的调节 |
| 1.3.2 Bcl-2蛋白家族对细胞凋亡的调节 |
| 1.3.3 Ca~(2+)对细胞凋亡的调节 |
| 1.4 半胱氨酸蛋白酶的特征以及在细胞凋亡中的作用 |
| 1.5 本研究的背景 |
| Ⅱ 实验材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 昆虫细胞、病毒 |
| 2.1.2 培养基溶液的配制 |
| 2.1.3 主要药品与试剂 |
| 2.1.4 溶液的配制 |
| 2.1.5 实验所用仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 甜菜夜蛾人工饲养、感染与病毒的虫体活化 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 实验分组及细胞处理 |
| 2.2.4 DAPI检测 |
| 2.2.5 线粒体跨膜电位的检测(△ψm) |
| 2.2.6 亚细胞组分的制备 |
| 2.2.7 Western blotting分析 |
| 2.2.8 细胞DNA的提取与电泳分析 |
| 2.2.9 荧光定量法检测caspase-3活性 |
| Ⅲ 实验结果与分析 |
| 3.1 环孢菌素A对线粒体膜电位变化的影响 |
| 3.2 细胞色素c从线粒体到细胞质的转位 |
| 3.3 环孢菌素A对SfaMNPV诱导SL-1细胞凋亡的影响 |
| 3.4 细胞色素c从线粒体到细胞质的释放对caspase-3活性的影响 |
| Ⅳ 讨论 |
| 4.1 线粒体膜通透性对cytc释放的影响 |
| 4.2 cytc的释放对caspase-3的活性及SL-1细胞凋亡形态变化的影响 |
| Ⅴ 参考文献 |
| 硕士期间发表的论文 |
| 致谢 |
四、重组人DFF45能抑制爪蟾卵非细胞体系中的凋亡特异核酸酶（论文参考文献）
- [1]不同毒力的牛分枝杆菌诱导树突状细胞凋亡的研究[D]. 张广智. 华中农业大学, 2010(05)
- [2]紫外线诱导家蚕卵巢细胞（BmN-SWU1）凋亡的研究[D]. 陈默. 西南大学, 2008(09)
- [3]细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡时bcl-2 fas基因的表达[J]. 陈华琴,陈铭珍,陈日玲,方希敏,徐小红,冯华俊. 国际输血及血液学杂志, 2007(05)
- [4]灵芝活性成分抗肿瘤作用机制的研究[D]. 季哲. 南京农业大学, 2007(01)
- [5]Cytc对杆状病毒诱导斜纹夜蛾细胞凋亡的影响[D]. 刘丽君. 华中师范大学, 2006(08)
- [6]爪蟾卵提取物中凋亡特异核酸酶抑制物的鉴定[J]. 卢智刚,杨巍,曹圻,陶伟,胡建成,翟中和. 科学通报, 2001(11)
- [7]重组人DFF45能抑制爪蟾卵非细胞体系中的凋亡特异核酸酶[J]. 杨巍,卢智刚,张岚,翟中和. 生物化学与生物物理学报, 2001(01)