放疗对异体神经移植组织学变化的影响

一、放射辐照对异体神经移植组织学改变的影响（论文文献综述）

张冰,唐林俊^[1]（2014）在《同种异体神经移植的研究进展》文中研究指明一直以来,自体神经移植被公认为是修复周围神经缺损伤的标准方法[1],但是自体神经移植存在二次创伤,供区功能障碍、感觉缺失、瘢痕形成及术后神经瘤性疼痛等缺点;而且来源受限,常常难以找到与损伤神经相匹配的供移植神经,尤其是长段、多条、粗大的神经缺损修复。各国学者纷纷致力于寻求理想的周围神经替代物移植来提高周围神经的再生与愈合及重建肢体功能,除了移植自体神经,修复神经缺损的替代物一般分为三大类:1人工合成材料,如硅胶管、聚羟基

刘华蔚^[2]（2014）在《面神经缺损修复及神经周瘢痕预防的相关研究》文中研究表明第一部分、壳聚糖导管预防周围神经瘢痕的实验研究实验一壳聚糖导管预防兔面神经周瘢痕的实验研究目的：周围神经解剖性损伤后，神经周瘢痕的形成会压迫神经，阻碍轴突的再生，影响神经功能的恢复。应用可生物降解的壳聚糖导管作为物理屏障，观察其对兔面神经周瘢痕及神经内血运的影响。方法：新西兰大白兔36只，行腮腺大部切除，面神经解剖性损伤造模。随机分为覆盖组、包裹组、自体对照组。于术后4、12周采用Petersen分级评估面神经与周围组织粘连情况，采用组织学染色方法检测面神经周瘢痕及神经内血管密度，并采用触须运动、透射电镜、神经电生理等方法对面神经功能进行评估。结果：术后4周时petersen评分无明显差异（P>0.05），12周时瘢痕粘连较明显，覆盖组与包裹组解剖时较自体对照组容易（P<0.01）；术后4周覆盖组有髓神经纤维直径、髓鞘厚度、神经纤维数量均优于包裹组及对照组，具有统计学意义（p<0.05）；术后4、12周对照组胶原厚度大于覆盖组与包裹组，差异有统计学意义（P<0.01）；术后12周覆盖组与自体对照组两者纤维直径较接近，排列均整齐，髓鞘壁较厚，两组间无明显差异（P>0.05），包裹组纤维直径、髓鞘壁厚度、神经内血管密度均较小，与前两者存在显着性差异，具有统计学意义（p<0.05）。结论：壳聚糖导管作为物理屏障覆盖于面神经表面可有效减少神经周瘢痕的形成、减轻瘢痕对面神经功能的影响。实验二、壳聚糖导管复合透明质酸预防大鼠坐骨神经瘢痕的实验研究目的：观察将壳聚糖导管与透明质酸联合应用对大鼠坐骨神经1cm钳夹性损伤后神经功能的影响。方法：选用清洁级健康成年SD大鼠60只，坐骨神经钳夹损伤造模，随机分为覆盖组、覆盖+透明质酸组、钳夹组、钳夹+透明质酸组，每组15只。于术后4、8、12周对坐骨神经与周围组织粘连、神经周瘢痕增生情况进行观察，并对神经功能进行坐骨神经功能指数、组织学和神经电生理检测。结果：术后4周时坐骨神经功能指数、petersen评分、神经纤维计数、髓鞘厚度、有髓神经纤维平均直径各组间均无明显差异；术后8周、12周时，钳夹+透明质酸组其坐骨神经功能指数、petersen评分、神经纤维计数、髓鞘厚度、有髓神经纤维平均直径等各项指标均优于对照组。术后4、8、12周时神经外膜胶原厚度检测各组均明显低于对照组，差异有统计学意义（p<0.01），12周时HA组神经外膜胶原厚度要厚于壳聚糖组及壳聚糖+HA组，差异有统计学意义（p<0.05）。结论：壳聚糖导管复合透明质酸可以促进鼠坐骨神经钳夹损伤的恢复，减少其神经周瘢痕的产生。实验三、壳聚糖导管植入对腮腺术后面神经功能恢复的临床效果观察目的：观察并比较壳聚糖导管应用于腮腺手术后对术后患者面神经功能恢复的影响。方法：75例腮腺肿瘤患者接受腮腺浅叶摘除术或腮腺全切手术，分为两组，一组应用壳聚糖导管覆盖面神经总干及各分支，一组为常规手术作为对照。在手术后7天、1月、3月、6月和9月分别进行超声检查和血常规检查并按HB标准观察面神经功能。结果：随访时间9月-50月，平均21.7月，75名患者中50名行腮腺浅叶摘除，25名行腮腺全切术，手术后不同时间的血常规检及超声查显示无论是应用壳聚糖组还对照组，患者均无异常，表明壳聚糖导管植入体内后不会引起不良反应。术后7天即刻面瘫发生率壳聚糖组（29/32，90.6%），对照组（39/43,90.7%）；永久性面瘫发生率面瘫发生率壳聚糖组（0/32，0%），对照组（2/43,4.7%）均无统计学差异（P>0.05）。术后7天对两组患者面神经功能行HB评分，结果两组患者面神经麻痹严重程度无显着性差异（P>0.05）。对患者面神经恢复速度进行检测，发现壳聚糖组神经恢复速度快于对照组，差异有显着性意义（P<0.01）。结论：壳聚糖导管具有良好的生物相容性，植入体内无不良反应，在腮腺手术后应用壳聚糖导管覆盖面神经对其功能恢复有一定促进作用。第二部分GDNF基因慢病毒载体的构建、病毒的包装及MSCs细胞的转染目的：构建携带EGFP和GDNF的慢病毒载体，利用其转染MSCs并对其进行鉴定，获得可稳定过表达GDNF的MSCs。方法：通过PCR扩增，BamHI和AscI双酶酶切目的基因片段， T4DNA连接酶连接,将目的基因GDNF插入慢病毒载体pLenti6.3MCSIRES2-EGFP,构建重组慢病毒。在lipofectamine2000介导下将构建成功的慢病毒转染人胚肾细胞系（293T），包装生产慢病毒,并测定病毒滴度。将包装好的慢病毒感染BMSCs,并对转染的细胞行病毒转染复数（MOI值）测定，筛选最佳感染复数。Western、RT-PCR分别检测转然后GDNF蛋白和mRNA的表达情况，流式细胞仪观察转染效率。结果：成功构建携带EGFP和GDNF的慢病毒，慢病毒转染MSCs后96小时强荧光表达，当MOI值为25时细胞荧光表达强且活性较好。Western和RT-PCR检测证实GDNF在MSCs中成功表达，流式细胞仪观察转染效率为94.2%。结论：成功将携带EGFP和GDNF的慢病毒转染MSCs，获得过表达GDNF基因的MSCs，为后期实验提供基础。第三部分、脱细胞神经复合GDNF转染的间充质干细胞修复兔面神经缺损的实验研究实验一、周围神经脱细胞方法的筛选目的：采用不同的方法对兔面神经进行脱细胞处理，对脱细胞神经组织学及体内植入进行检测，为面神经脱细胞方法的选择提供实验依据。方法：分别采用冻融法、化学法及冻融+酶消化法处理兔面神经，对处理的神经进行HE染色、扫描电镜观察和透射电镜观察其组织学结构；并将不同方法处理的神经进行兔背部皮下植入，于2、4周处死动物，行大体观察及组织学观察。结果：组织学观察见化学法（Hudson法）、冻融+酶消化法处理的神经其髓鞘清除较彻底，只有部分区域可见极少量髓鞘残留，冻融法处理的神经内可见髓鞘皱缩、变形但有较多残留。皮下埋植实验观察见单纯冻融法处理的神经内淋巴细胞浸润稍多，主要分布在神经束周边的基底膜间隙中，Hudson法、冻融+酶消化法处理的神经未见明显的炎性细胞浸润。结论：冻融+酶消化法处理方法简单、神经支架结构保存完整，神经内髓鞘等抗原成分去除较彻底，是一种良好的去细胞方法，为后期实验提供基础。实验二、脱细胞神经复合GDNF转染的MSCs修复兔面神经缺损目的：以脱细胞面神经为支架，复合GDNF转染的MSCs修复兔面神经多分支缺损，观察其对面神经再生及对面神经元存活的作用。方法：新西兰大白兔60只，面神经解剖性损伤造模。完全随机分为：脱细胞同种异体神经移植组（ANA），脱细胞异体神经+间充质干细胞组（AN-MSCs），脱细胞异体神经+GDNF转染的间充质干细胞（AN-G-MSCs），自体神经移植组（Control）。于术后4、12、24周时取材，对动物行大体观察并采用触须运动、神经电生理等方法对面神经功能进行评估，分别对移植神经的近端及远端行甲苯暗蓝染色、透射电镜观察其再生轴突的变化。结果：对面神经总干处神经轴突形态计量学分析发现，术后4周时脱细胞神经移植组其神经轴突计数、髓鞘厚度、髓鞘直径均明显低于其他三组，差异有统计学意义（P<0.05）；术后12、24周时检测发现各组间无明显差异（P>0.05）。面神经移植物远端术后12周时面神经各分支检测脱细胞神经移植与MSCs组神经轴突计数、髓鞘厚度、髓鞘直径均明显低于GDNF组与自体神经移植组，差异有统计学意义（P<0.05）。术后24周时脱细胞神经移植各项指标均低于其他三组.结论：将脱细胞神经与GDNF转染的MSCs联合应用可成功修复兔面神经多分支缺损，其修复效果优于单纯应用脱细胞神经，且可以一定程度上保护面神经元的存活。实验三同种异体神经移植修复面神经缺损的长期随访观察目的：临床应用脱细胞神经移植修复面神经缺损，并进行长期的随访，观察其修复效果及安全性。方法：2004年7月至2013年7月，因外伤或腮腺恶性肿瘤侵袭术中切除导致的面神经缺损44例，最终共有35例神经缺损修复患者完成随访观察，其中自体神经移植20例，脱细胞神经移植15例。术后最短随访时间为9个月，随访时分别进行局部超声检查和血常规检查，并按HB标准观察面神经功能。结果：随访时间9月-9年，面神经缺损长度10mm-50mm，其中术中一期缺损修复26例，二期手术移植9例，二期手术距损伤时间2天-3个月。术后随访时的血常规检及超声查均未发现无异常，表明脱细胞神经植入体内后未引起明显的不良反应。最终自体神经移植组与脱细胞神经移植组有意义的功能恢复分别为85%（17/20）和80%（12/15），无统计学差异（P>0.05）；术后HB分级比较发现脱细胞神经移植神经功能恢复情况稍弱于自体神经移植，但差异无统计学意义（P>0.05）。结论：采用脱细胞神经在临床上修复面神经缺损并进行长期的随访观察，结果发现脱细胞神经可以修复面神经缺损，长期随访未发现明显的不良反应，其修复与自体神经移植接近。脱细胞神经移植可成为临床面神经缺损修复的一种选择。

池昊天,阳运康^[3]（2014）在《干细胞与脱细胞异体神经支架在周围神经长段缺损中的应用》文中认为背景:将种子细胞植入合适的载体支架可以构建具有生物活性及相应功能的组织工程神经桥接物,干细胞与脱细胞异体神经构成的组织工程移植物正成为周围神经长段缺损研究领域的重要移植材料,并已初步显示出良好的应用前景。目的:综述近年来干细胞与脱细胞异体神经支架在周围神经长段缺损中的应用。方法:第一、二作者应用计算机检索1998年1月至2014年2月PubMed数据库、中国期刊全文数据库有关干细胞与脱细胞异体神经支架在周围神经长段缺损中应用的文章,英文检索词"stem cells,peripheral nerve defect,acellular allogeneic nerves";中文检索词"干细胞,周围神经缺损,脱细胞异体神经"。共检索到1 013篇相关文献,其中97篇文献符合纳入标准。结果与结论:干细胞因组织损伤后释放的各种趋化因子吸引以及其自身趋化作用聚集到损伤部位,分泌大量的营养物质,促进机体损伤神经功能的修复。干细胞可以在周围环境的诱导和内在分化偏向共同作用下分化并代替人体内损伤或死亡的神经细胞。此外,干细胞联合组织工程材料移植,减少胶质瘢痕的形成也是促进周围神经损伤修复的因素。干细胞可以增强神经突触之间的联系,建立新的神经环路。神经干细胞具有分化为其他神经细胞的潜力,但其分化与调控的确切机制尚不明了。对于如何改善微环境,使更多的干细胞分化为神经元与少突胶质细胞并维持细胞活性尚缺乏有效的方法。故有效的抑制移植早期的免疫排斥反应,应成为研究的重点所在。神经移植后如何提高神经再生速度和质量,维持靶器官的组织结构与功能更需要长期的摸索。

阳运康^[4]（2014）在《川芎嗪对组织工程神经修复周围神经缺损作用的实验研究》文中研究说明第一部分川芎嗪对基因修饰或缺血缺氧损伤鼠胚神经干细胞的保护作用目的：构建SD乳鼠神经干细胞体外缺血缺氧损伤及基因修饰模型；探讨TMP对神经干细胞基因修饰与缺血缺氧损伤的保护作用，以及TMP促进神经损伤修复，发挥神经保护作用的可能机制，为TMP作为神经干细胞保护剂提供细胞生物学理论依据。方法：（1）分离SD乳鼠海马神经干细胞（NSCs）进行原代培养，将二代NSCs行神经巢蛋白（Nestin）及诱导分化后的神经丝蛋白（NF-200）与胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光鉴定。取二代神经干细胞行携带EGFP基因的逆转录病毒转染并更换完全培养基，然后按TMP实验组、基因修饰对照组（GM control）、溶媒对照组（Vehicle control）分组，同时设正常对照组（Normal control）。其中TMP实验组在DMEM/F12培养基中分别加入工作浓度为50、100、200和300μg/ml的TMP，溶媒对照组在DMEM/F12培养基中加入0.1%DMSO作为溶剂对照，正常对照组为未行基因修饰的二代神经干细胞。各组均在常规条件培养箱中培养72h。通过MTT比色法、锥虫蓝染色计数及流式细胞仪检测神经干细胞活力和损伤凋亡情况，Quantitative real-time PCR和Westernblotting方法检测凋亡相关因子Bax，Bcl-2和Caspase-3的表达。另取二代NSCs分为TMP实验组（TMP group）、缺血缺氧对照组（OGDcontrol）、溶媒对照组（Vehicle control）和正常对照组（Normalcontrol）分别培养6h。其中缺血缺氧对照组、溶媒对照组和TMP实验组均采用OGD（oxygen-glucose-deprivation）法构建体外缺血缺氧损伤模型，溶媒对照组在缺血缺氧造模前即给予0.1%DMSO作为溶剂对照，TMP实验组则在造模前即刻分别加入工作浓度为50、100、200和300μg/ml的TMP，直至造模结束。正常对照组则不作任何处理在常规条件下培养6h。通过MTT比色法、锥虫蓝染色计数及流式细胞仪检测神经干细胞活力和损伤凋亡情况，Quantitative real-time PCR和Western blotting方法检测凋亡相关因子Bax，Bcl-2和Caspase-3的表达。结果：（1）与正常对照组比较，溶媒对照组和基因修饰对照组NSCs活力均显着降低，细胞死亡率及细胞凋亡率均显着增高（均P＜0.05），而抑凋亡基因Bcl-2mRNA和蛋白表达下调，促凋亡基因Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表达上调（均P＜0.05）；但基因修饰对照组与溶媒对照组组间比较上述指标无明显差异（均P＞0.05）；与基因修饰对照组比较，TMP实验组呈一定浓度依赖性，能浓度依赖地减少细胞死亡率及凋亡率，增强细胞增殖活性，且TMP可显着上调基因修饰后NSCs中Bcl-2mRNA和蛋白表达水平，下调Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表达水平，但基因修饰对照组和50、100μg/mlTMP组间无明显统计学差异（P＞0.05），200μg/mlTMP组与300μg/mlTMP组间未见明显统计学差异（P＞0.05）。（2）与正常对照组比较，溶媒对照组和缺血缺氧对照组NSCs活力均显着降低，细胞死亡率及细胞凋亡率均显着增高（均P＜0.05），而抑凋亡基因Bcl-2mRNA和蛋白表达下调，促凋亡基因Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表达上调（均P＜0.05）；但缺血缺氧对照组与溶媒对照组组间比较上述指标无明显差异（均P＞0.05）；与缺血缺氧对照组比较，TMP实验组呈一定浓度依赖性，能浓度依赖地减少细胞死亡率及凋亡率，增强细胞增殖活性，且TMP可显着上调基因修饰后NSCs中Bcl-2mRNA和蛋白表达水平，下调Bax、Caspase-3mRNA和蛋白表达水平，但缺血缺氧对照组和50、100μg/mlTMP组间无明显统计学差异（P＞0.05），200μg/mlTMP组与300μg/mlTMP组间未见明显统计学差异（P＞0.05）。结论：TMP能够浓度依赖性地对基因修饰后或缺血缺氧损伤的NSCs发挥保护作用，且该作用与其调控凋亡相关因子Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达，抑制细胞凋亡有关，这可能是TMP对周围神经系统发挥保护作用的相关机制之一。第二部分含川芎嗪培养液对组织工程化神经桥接物生物学特性的影响目的：化学法萃取Wistar大鼠脱细胞坐骨神经，构建种植基因修饰神经干细胞的组织工程化神经桥接物，探讨含TMP培养基对桥接物生物学特性的影响，为移植修复周围神经缺损提供理想的桥接体。方法：（1）12只成年健康Wistar雄性大鼠，切取双侧坐骨神经（共24条），每条长约2cm，其中20条按下列顺序进行化学处理:剥除外覆结缔组织，无菌蒸馏水清洗3次。放入3%TritonX-100中震荡24h后无菌蒸馏水清洗3次。放入4%脱氧胆酸钠中室温下震荡24h后无菌蒸馏水清洗3次。④重复23步骤，直至形成的去细胞神经呈乳白色、半透明样。HE染色、透射电镜扫描观察化学去细胞神经组织结构。⑤将化学去细胞神经放入DMEM/F12液中4℃保存备用。（2）取12条去细胞神经水化后在显微镜下用微量加样器注入10ul基因修饰神经干细胞悬液（2106/ml）后分I、II、III三组，I、II组各5条，III组2条，其中I、II组分别在常规DMEM/F12完全培养基和添加有200μg/mlTMP的完全培养基中继续培养1周；取I、II、III三组各2条切片行荧光显微镜、HE染色与免疫组化（Nestin、NF-200、GFAP）染色观察细胞分布与支架结构。（3）另取SD大鼠24只分A、B、C、D4组，每组6只，分别将4℃保存1周Wistar大鼠坐骨神经、I组组织工程化神经、II组组织工程化神经及同种异体SD大鼠坐骨神经依次包埋于皮下，7天后取出各组移植神经行HE染色光镜观察及CD4+和CD8+淋巴细胞侵润数量检测。另取SD大鼠24只分A、B、C、D4组，每组6只，分别将4℃保存1周Wistar大鼠坐骨神经、I组组织工程化神经、II组组织工程化神经及同种异体SD大鼠坐骨神经依次包埋于皮下，7天后取出各组移植神经行HE染色光镜观察及CD4+和CD8+淋巴细胞侵润数量检测。结果：去细胞神经的横切片上可见神经外膜和神经束膜形成的圆形结构,其内部为松散的胶原成分髓鞘及细胞成分基本消失。神经外膜和细胞基底膜结构均较完整。纵切片上可见较多整，齐排列的管道样结构，基本无细胞成分。注射神经干细胞后纵切片上可见神经外膜下和束膜间有较多细胞成份，分布不均。培养1周后两组均有较多增殖与分化神经细胞，基因修饰神经干细胞在去细胞桥神经中生长良好，并且有迁移成行的特性，但II组更明显，与I组差异有显着性（P＜0.05）。皮下包埋后光镜下见蓝色淋巴细胞浸润依次减少，A、B、C组间均有显着差异。C、D组间无显着差异。神经内CD4+和CD8+淋巴细胞侵润数A组最多，D组最少，A、B、C组间均有显着差异。C、D组间无显着差异。结论：异体神经化学萃取法可去除神经中的细胞和髓鞘而保留完整的神经基底膜管和纤维支架结构，并且对神经基底膜主要成分-层粘连蛋白无明显影响。种植神经干细胞并在含TMP培养基中培养后制作的组织工程化神经具有较低免疫原性及正常神经的三维结构，可能成为一种理想的组织工程化人工神经，作为修复周围神经缺损的桥接物。第三部分川芎嗪预处理组织工程化神经桥接物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究目的：研究川芎嗪预处理对组织工程化神经桥接物修复大鼠1.5cm坐骨神经缺损的效果。方法：分别按前述方法制作基因修饰的SD大鼠神经干细胞、脱细胞的Wistar大鼠坐骨神经、种植神经干细胞并在含川芎嗪培养基中共培养1周的组织工程化神经。将55只200-250克成年雌性SD大鼠分为A、B、C、D共4组，A、B、C组各15只，D组10只，实验侧均为右后肢坐骨神经。1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,显露坐骨神经,从梨状肌下缘0.5cm处切除神经1.5cm,分别用4种移植物桥接大鼠1.5cm坐骨神经缺损:含川芎嗪的组织工程化神经组（A组）、脱细胞异体神经组（B组）、异体神经组（C组）、自体神经组（D组）。术后A组术侧小腿三头肌内注射TMP液（16mg/kg/日），其余各组（B、C、D组）注射相同体积0.9%NS，连续注射12周至实验结束。术后2周、12周通过大体观察、神经电生理检测、肌肉湿重称重、荧光显微镜观察、辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果：术后12周大体观察发现A、D组实验侧足趾明显散开，足趾印迹分散，恢复足爪着地行走，右后肢蹬力良好，明显优于B、C组；A组坐骨神经功能指数测定、运动神经传导速度和肌肉湿重恢复均优于B、C组（P<0.05），略差于D组（P>0.05）；荧光显微镜与免疫组化染色检测发现，NSCs能在体内存活、迁移并分化为神经元和胶质细胞，A组优于B、C组；术后12周辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪检测提示A组脊神经节中HRP标记的细胞数较B、C组多（P<0.05），甲苯胺蓝染色发现A组移植段再生神经纤维较多,以有髓神经纤维为主，明显优于B、C组（P<0.05）。结论：种植神经干细胞并在含川芎嗪培养液中培养1周的脱细胞异体神经构成的组织工程化神经桥接物能有效修复大鼠坐骨神经缺损，促进周围神经再生及下肢运动功能的恢复。

张勇^[5]（2014）在《不同剂量X线辐照对大鼠周围神经损伤后神经再生影响的实验研究》文中提出背景和目的：周围神经损伤后的治疗与康复，是医学界长期以来较为棘手的一个难题。近年来医学界一直在积极探索促进周围神经再生及加速功能恢复的治疗方法。物理因子疗法广泛而有效的治疗与康复作用，已被多年的临床实践所证实。电离辐照作为物理因子家族中的一员，其治疗作用的报导越来越多，但关于X线电离辐照对周围神经损伤后神经再生及功能恢复影响的研究报导较少。本研究拟通过不同剂量X线辐照干预周围神经断裂损伤动物模型，观察不同剂量X线辐照对大鼠坐骨神经损伤后的神经再生和功能恢复的影响，以期为周围神经再生修复提供新的方法及理论依据。方法：选取两月龄Sprague-Dawley大鼠80只，体重200g～250g左右，随机分为5组，每组16只。暴露大鼠左侧坐骨神经，显微剪刀横断神经后，采用神经外膜端端吻合法修复断裂神经，恢复神经的连续性。造模成功后24h，分别给予0Gy、0.2Gy、1Gy、7Gy、14Gy5个不同剂量的X线单次局部辐照。辐照后每周观察大鼠足部溃疡、步态、足部感觉、展爪反射等大体情况；辐照后第4、8、12周测定大鼠坐骨神经功能指数；辐照后第12周测定神经电生理从而评价神经功能恢复情况；辐照后第12周显微镜下观察神经吻合处局部形态；辐照后第12周行组织学和免疫组织学观察；辐照后第12周行透射电镜检查观察神经超微结构变化，从形态学和功能学两方面评估不同剂量X线辐照对大鼠周围神经损伤后神经再生及功能恢复影响。结果：1、大体形态观察：（1）足部溃疡：第1～2周，各组大鼠左后足均出现足跟部溃疡；1Gy组溃疡愈合早于其他各组；0Gy组、0.2Gy组、7Gy组及14Gy组溃疡愈合时间基本一致。（2）足态：第1周各组均出现造模侧肢体的小腿和足部肌肉完全瘫痪，跖下垂、趾屈曲，行走时造模侧的下肢在地上呈拖行状，足趾完全并拢；1Gy组足态恢复早于且快于其他各组；0Gy组、0.2Gy组及7Gy组足态恢复时间基本一致，至12周时，14Gy组大鼠足态恢复不明显。（3）足部感觉恢复及展爪反射：术后第1～2周，针刺所有大鼠左后肢均无肢体回缩及展爪反射形成。1Gy组肢体回缩及展爪反射开始恢复时间早于其他各组，且相对其他各组较早恢复正常；7Gy组肢体回缩及展爪反射开始恢复时间早于0Gy组、0.2Gy组及14Gy组，且相对这三组较早恢复正常；0Gy组、0.2Gy组及14Gy组肢体回缩及展爪反射开始恢复时间基本一致，但至第12周时，0Gy组、0.2Gy组肢体回缩及展爪反射恢复均较14Gy组好。2、坐骨神经功能指数（SFI）：术后第2周，由于各组大鼠均出现患足跖下垂、趾屈曲，各组SFI值无法测量计算。术后第4周到12周SFI逐渐恢复，经统计学分析，术后第4、8周，各组SFI较前均有所好转，1Gy、7Gy组SFI恢复率均优于0Gy组、0.2Gy组、14Gy组（P <0.05），1Gy组、7Gy组之间SFI恢复率差异无统计学意义（P>0.05）。0Gy组、0.2Gy组及14Gy组之间SFI恢复率差异无统计学意义（P>0.05）；术后第12周，SFI较前均有所好转，0Gy组、0.2Gy组、1Gy、7Gy组之间差异无统计学意义（P>0.05），但各组SFI恢复均优于14G组（P <0.05）。3、神经电生理检测：1Gy组、7Gy组运动神经的波幅及传导速度高于0Gy组、0.2Gy组及14Gy组（P <0.05）；1Gy组运动神经的波幅及传导速度高于7Gy组（P <0.05）；0Gy组、0.2Gy组运动神经的波幅及传导速度高于14Gy组（P <0.05）；0Gy组与0.2Gy组之间差异无显着性意义（P>0.05）。4、显微镜下吻合处局部神经形态：1Gy组神经损伤处与周围组织粘连较其他各组轻；7Gy组神经损伤处与周围组织粘连程度轻于0Gy组、0.2Gy组及14Gy组；0Gy组、0.2Gy组及14Gy组神经损伤处与周围组织粘连程度相当。5、组织学和免疫组织学观察：1Gy组轴突肿胀、髓鞘结构与周围组织粘连程度及S-100蛋白表达分布均优于其他各组；7Gy组轴突肿胀、髓鞘结构与周围组织粘连程度及S-100蛋白表达分布均优于0Gy组、0.2Gy组及14Gy组；0Gy组和0.2Gy组组织学和免疫组织学观察结果基本一致且均优于14Gy组。6、透射电镜观察：1Gy组每高倍镜视野下神经纤维数量、轴突直径、髓鞘形态、神经纤维形态结构均优于其他各组；7Gy组每高倍镜视野下神经纤维数量、轴突直径、髓鞘厚度均优于0Gy组、0.2Gy组及14Gy组，但7Gy组、14Gy组与0Gy组、0.2Gy组相比均出现明显板层分离及空泡化，结构不清晰；0Gy组、0.2Gy组透射电镜观察结果基本一致且均优于14Gy组。结论：1Gy剂量的X线辐照能够促进周围神经损伤后神经再生及肢体功能恢复，从而提高神经修复的疗效。7Gy剂量辐照虽然一定程度上可以促进神经传导速度及肢体功能的恢复，但在神经的超微结构上却显示轻微的损伤作用。随着辐照剂量的增加，这种损伤作用越来越明显，使得肢体功能恢复减慢，并且剂量过低对于神经再生及功能恢复无明显影响。但其机制及长期效应仍待进一步研究。

胡艳^[6]（2012）在《膝关节前交叉韧带损伤修复重建的替代材料》文中研究表明背景:前交叉韧带是膝关节内重要的韧带组织,对维持膝关节的稳定有重要的作用。前交叉韧带的损伤在体育运动中最为常见,前交叉韧带断裂引起的膝关节不稳称前交叉韧带缺损膝,如果处理不当,将极大的影响患者以后的运动能力,并对患者的日常生活和工作产生影响。随着诊疗技术的进步和对前交叉韧带认识的深入,关于前交叉韧带的修复重建越来越受到重视。由于前交叉韧带修复重建效果与替代材料密切相关,因此在生物工程和组织材料学领域对替代材料的研究也日益加强。目的:根据目前膝关节前交叉韧带替代材料的选择有着多样化的特点,对替代材料的选择进行深入的探讨,为寻求修复重建膝关节前交叉韧带损伤更为理想的前交叉韧带替代材料提出了多种不同的观点。方法:通过分析前交叉韧带的解剖、诊断、损伤机制、损伤程度及其损伤后磁共振成像表现与镜下所见的特点,可见前交叉韧带是维持膝关节稳定的重要结构,其损伤后对替代材料的要求更高。前交叉韧带重建中替代材料的选择,至今仍存在争议。分别对自体材料、同种异体材料、人工合成材料以及组织工程前交叉韧带4种前交叉韧带修复重建替代材料的应用进行实验数据分析。结果与结论:4种替代材料重建前交叉韧带的选择涉及到其稳定性及术后并发症多方面因素。自体材料取材方便、无免疫排斥反应而成为重建前交叉韧带的标准治疗方法,但因自体供区有限以及供区功能丧失的缺点受到限制;同种异体材料在不增加新创伤的前提下因其来源广泛,有创伤小、时间短等优点,但同种异体材料重塑过程比较慢,并且面临免疫排斥反应问题;人工合成材料在力学性能等相关指标上均逐步满足重建前交叉韧带条件,但费用高,腱骨愈合缓慢,并且其重建前交叉韧带远期疗效还存在争议,限制其临床应用;组织工程前交叉韧带在某些方面取得了一定的进展,但组织工程前交叉韧带使用寿命的不确定性是目前其应用的最大缺陷,组织工程前交叉韧带修复重建的远期效果还有待进一步研究和探索。

周胜虎,甄平,高明暄,田琦,李旭升^[7]（2012）在《辐照和绿茶多酚处理同种异体神经移植体的实验研究》文中提出[目的]比较经绿茶多酚溶液及辐照预处理的同种异体神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果。[方法]48只成年雄性Wista大鼠,将坐骨神经在梨状肌孔下5 mm处切除1.0 cm,随机分为4组,每组12只,神经缺损分别用4种移植物桥接。A组:自体神经移植;B组:新鲜异体神经移植;C组:经辐照处理的异体神经移植;D组:绿茶多酚溶液保存的异体神经移植。术后6、12周通过大体、电生理学、组织学、透射电镜观察评价各组修复神经缺损的效果。[结果]A、D组间差异无统计学意义,A、D组的各项指标均优于B、C组。[结论]大鼠坐骨神经缺损模型中,绿茶多酚溶液保存的同种异体神经是良好的神经移植替代材料,移植后神经再生情况优于辐照预处理的异体神经。

尹华伟^[8]（2012）在《CO/O2混合气体干燥保存法在同种异体神经移植中应用的实验研究》文中认为目的将F344到Lewis大鼠实验模型配对方式用于同种异体神经移植研究,并检验该模型是否可同时评估异体神经移植后的免疫排斥反应强烈程度和神经再生功能恢复程度。方法36只受体Lewis大鼠随机分为两组,实验组E和对照粗C,制成右侧坐骨神经10mm神经缺损模型。E组受体鼠以F344大鼠新鲜坐骨神经段15mm移植修复；C组受体鼠以Lewis大鼠新鲜坐骨神经段15mm移植修复。移植术后1周、4周、12周观测取材,分别检测行为学、电生理学、神经肌肉组织病理学、免疫学等指标。结果在移植术后1周、术后4周,E组的免疫学指标血清IL-2、血清IL-6浓度、CD4+/CD8+T细胞比例较C组有明显的升高,差异有统计学意义；在术后4周、术后12周,E组的坐骨神经指数、CAMP的波幅、神经纤维计数、肌纤维截面积较C组指标有明显下降,差异有统计学意义。结论F344到Lewis配对方式可作为于神经异体移植模型,进行行为学、电生理、组织形态学及免疫学研究。目的将CO/O2混合气体干燥保存法用于同种异体神经移植大鼠实验模型中异体神经的保存处理,探索该方法可否降低异体神经的免疫原性、提高功能恢复。方法72只受体Lewis大鼠随机分配至A、B、C、D组,制作成右侧坐骨神经10mm神经缺损模型。A组受体鼠以Lewis大鼠新鲜坐骨神经段15mm移植修复；B组受体鼠以F344大鼠新鲜坐骨神经段移植修复；C组受体鼠以经CO/O2混合气体保存3周的Lewis大鼠坐骨神经段移植修复；D组受体鼠以经CO/O2混合气体保存的F344大鼠坐骨神经段移植修复。移植术后1周、4周、12周观测取材,分别检测行为学、电生理学、神经肌肉组织病理学、免疫学等指标。结果在移植术后1周、术后4周,D组的免疫学指标血清IL-2、血清IL-6浓度、CD4+/CD8+T细胞比例较B组有明显的降低,差异有统计学意义；在术后4周、术后12周,D组的坐骨神经指数、CAMP的波幅、神经纤维计数、肌纤维截面积较B组指标有明显提高,差异有统计学意义。结论CO/O2混合气体干燥保存法运用于大鼠同种异体神经移植,可以达到减弱其免疫性、提高功能恢复的效果。异体神经移植是自体神经移植的一种替代方式,用于修复神经损伤造成的神经缺损。异体神经移植同其他器官移植一样,会导致免疫排斥,限制了神经轴突的生长和功能的恢复。为了减弱免疫排斥反应,提高神经恢复效果,国内外学者进行了广泛研究。现将国内外关于异体神经移植的相关研究综述如下。

腾飞^[9]（2010）在《二氧化碳氧气混合气干燥保存周围神经的实验研究》文中研究说明目的：通过对大鼠坐骨神经在CO2/O2中干燥保存的效果和移植后神经再生的情况的研究,探索CO2/O2中干燥保存法在周围神经保存中的应用价值。方法：将F344大鼠坐骨神经15mm分别通过不同方式处理后移植到F344大鼠坐骨神经12mm缺损处。分组：A：将供体神经不做任何处理,取出后即刻移植；B（干燥保存组）：将供体神经保存在CO2/O2混合气（P CO2=100hPa,P 02=900hPa）中；C：将供体神经置于UW液中；D（干燥保存组）：将供体神经保存在纯02（PO2=1000hPa）中,B、C、D组4℃保存3周后移植。移植前,电镜评估移植段神经纤维横断面结构；移植后12周,通过电生理、肌肉湿重、肌纤维横截面积、神经免疫荧光染色、神经纤维计数、神经纤维圆当量直径计算、神经横截面电镜形态学观察、统计学分析等方法评估神经再生情况。结果：移植前电镜形态学观察移植段神经显示B组Schwann细胞和髓鞘仅轻度变性,接近于A组正常神经纤维结构,明显优于C、D组。移植术后12周,通过以上指标评估神经纤维再生效果,B组与A组相近,并显着优于C、D组。结论：CO2/O2干燥保存法可成功应用于周围神经组织的保存,CO2在保存过程中发挥了重要作用。

征华勇^[10]（2009）在《复合FK506/NGF/RGD多肽接枝聚（羟基乙酸-L-赖氨酸—乳酸）缓释膜应用于同种异体神经移植的实验研究》文中指出一、研究背景与目的由于创伤、肿瘤等致大段周围神经缺损、变性、坏死等临床上较为常见。治疗上往往需要移植物来桥接、促进和引导神经再生。一直以来自体神经移植是修复周围神经缺损最理想的手术方法,在临床上已广泛应用,也是衡量各种神经桥接材料的“金标准”。但往往会造成供体神经支配区感觉、功能障碍,且自体神经来源有限。同种异体神经移植可以解决上述问题,但如何降低或消除免疫排斥反应并加速神经生长是临床工作者和基础科研人员所面临的难题。本实验针对上述两个难题,用RGD（精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸Arg-Gly-Asp）高分子材料并加入FK506（免疫抑制剂）、NGF（神经生长因子）合成缓释膜外用于移植段神经周围,探讨其促进神经再生的效果。二、方法1、选取8只健康成年SD雄性大鼠,体重180～200g,在显微镜下分离并切取双侧坐骨神经,制成10mm神经段,用干燥无菌试管分装置于—196℃液氮中,保存3周,术前取出后常温复温。2、选取体重180～200g,雄性SD大鼠40只为受体,随机分为4组,每组10只。A组:单纯冷冻异体神经移植组;B组:冷冻异体神经联合应用FK506/RGD复合缓释膜移植组;C组:自体神经移植组;D组:冷冻异体神经联合应用FK506/NGF/RGD复合缓释膜移植组。用浓度为0.4%的戊巴比妥钠（40mg/kg）注入腹腔麻醉大鼠。麻醉满意后,将大鼠俯卧固定于手术板上。左股后外侧区备皮,常规术野消毒、铺巾。沿左大腿后外侧作纵行切口,切开皮肤及皮下组织。钝性分离股二头肌与半腱肌、半膜肌,充分暴露坐骨神经,在距梨状肌下缘下5mm处切断并切除坐骨神经10mm,然后移植已处理的供体神经。B组移植段神经外用FK506/RGD复合缓释膜包裹,D组外用FK506/NGF/RGD复合缓释膜包裹,缓释膜两端分别固定于神经外膜上。术后分笼喂养12周。3、术后对各组大鼠进行大体观察,于术后12周先进行神经电生理学检测,然后取双侧小腿三头肌进行恢复率测定、最后分别在光镜和电镜下对移植段神经进行组织形态学观察及超微结构测定。三、结果1、大体观察:术后1周内各组大鼠行动困难,精神萎靡,进食少,各组动物手术切口均未发生感染。术后第2周各组大鼠均不同程度地出现术侧小腿及部分足趾出现红肿甚至溃疡,第8周时所有大鼠足底的红肿和溃疡均消退。术后4周时各组大鼠术侧腿部肌肉出现不同程度的萎缩。术后8周时B、C、D组大鼠术侧萎缩的肌肉开始恢复,其中D组大鼠恢复最为明显。术后12周术取材时显露移植段神经,除A组与周围组织有粘连外,其余各组与周围组织界限清晰,且神经吻合口光滑,连续性良好,粗细均匀,质地柔软,显微镜下可清楚地观察到神经外膜丰富的新鲜血管。缓释膜已明显变脆、变薄。2、电生理检测:各组运动神经传导速度的测定结果经统计分析显示:四组之间有统计学差异（F=26.190,P=0.000）,D组优于A、B、C组（P<0.05,差异有统计学意义）;B、C组优于A组（P<0.05,差异有统计学意义）;B、C两组相比较无显着性差异（P=0.348>0.05,差异无统计学意义）。3、小腿三头肌湿重恢复率测定结果:术后12周,所有大鼠术侧即左侧小腿三头肌均有萎缩,小腿三头肌恢复率测定结果经统计分析显示:四组之间有统计学差异（F=19.132,P=0.000）,D组优于A、B、C组（P<0.05,差异有统计学意义）;B、C组优于A组（P<0.05,差异有统计学意义）;B、C两组相比较无显着性差异（P=0.351>0.05,差异无统计学意义）。4、HE染色:术后12周移植段神经制作切片,HE染色显示:A组神经神经束膜比较模糊,再生神经纤维数目较少、轴突排列分布零散,走向紊乱;B、C两组神经神经束膜比较清晰,再生神经纤维数目较多、轴突排列分布比较均匀,走向基本一致;D组神经神经束膜清晰,再生神经纤维数目最多、且清晰可见,轴突排列整齐规则,分布均匀,走向一致。5、亚甲蓝髓鞘染色:术后12周,移植段神经行半薄切片,亚甲蓝髓鞘染色显示:A组神经纤维密度稀疏,大小不均匀,髓鞘厚度薄,形状各异;B、C两组神经纤维密度较大,大小相对均匀,有髓神经多;D组神经纤维密度最大,有髓神经较多,髓鞘较厚,多呈圆形。6、图像分析:术后12周,图像分析显示:四组之间的有髓神经纤维数目、轴突直径、髓鞘厚度差异均有统计学差异（F=194.918,P=0.000;F=54.342,P=0.000;F=109.294,P=0.000;）,D组有髓神经纤维数目、轴突直径、髓鞘厚度均大于A、B、C组（P<0.05,差异有统计学意义）;B、C组有髓神经纤维数目、轴突直径、髓鞘厚度均大于A组（P<0.05,差异有统计学意义）;B、C两组有髓神经纤维数目、轴突直径、髓鞘厚度相比较均无显着性差异（P=0.058>0.05;P=0.412>0.05 P=0.219>0.05差异均无统计学意义）。7、S-100免疫组化染色:术后12周移植段神经制作切片,S-100免疫组化染色显示:A组、B组、C组、D组再生神经S-100免疫组化染色均呈阳性。其中D组阳性反应最强,B组、C组阳性反应较强,A组阳性反应最弱。8、透射电子显微镜下超微结构:术后12周,移植段神经行超薄切片,铀—铅复染色显示:A组图片视野里可见结蒂组织无定形结构中夹杂着变性神经纤维,其髓鞘厚薄不一,雪旺氏细胞器及有髓轴突稀少,部分再生轴突髓鞘馈变;B、C组图片视野里可见较多神经纤维髓鞘增厚和比较丰富的雪旺氏细胞器,正常成熟神经纤维与变性神经纤维共存,比例相当;D组图片视野里可见大量神经纤维髓鞘增厚和丰富的雪旺氏细胞器,且正常成熟神经纤维居多。四、结论通过移植段神经局部运用含有免疫抑制剂（FK506）、神经生长因子（NGF）、RGD多肽接枝聚的缓释膜,不仅能够起到抗免疫排斥反应的效果,而且在很大程度上提高了神经生长速度,其各项检测结果好于其它各实验组,甚至有些指标已经超过了自体移植组。

二、放射辐照对异体神经移植组织学改变的影响（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、放射辐照对异体神经移植组织学改变的影响（论文提纲范文）

（1）同种异体神经移植的研究进展（论文提纲范文）

（2）面神经缺损修复及神经周瘢痕预防的相关研究（论文提纲范文）

（3）干细胞与脱细胞异体神经支架在周围神经长段缺损中的应用（论文提纲范文）

（4）川芎嗪对组织工程神经修复周围神经缺损作用的实验研究（论文提纲范文）

（5）不同剂量X线辐照对大鼠周围神经损伤后神经再生影响的实验研究（论文提纲范文）

（6）膝关节前交叉韧带损伤修复重建的替代材料（论文提纲范文）

（8）CO/O2混合气体干燥保存法在同种异体神经移植中应用的实验研究（论文提纲范文）

（9）二氧化碳氧气混合气干燥保存周围神经的实验研究（论文提纲范文）

（10）复合FK506/NGF/RGD多肽接枝聚（羟基乙酸-L-赖氨酸—乳酸）缓释膜应用于同种异体神经移植的实验研究（论文提纲范文）

四、放射辐照对异体神经移植组织学改变的影响（论文参考文献）

• [1]同种异体神经移植的研究进展[J]. 张冰,唐林俊. 四川医学, 2014(12)
• [2]面神经缺损修复及神经周瘢痕预防的相关研究[D]. 刘华蔚. 中国人民解放军医学院, 2014(03)
• [3]干细胞与脱细胞异体神经支架在周围神经长段缺损中的应用[J]. 池昊天,阳运康. 中国组织工程研究, 2014(21)
• [4]川芎嗪对组织工程神经修复周围神经缺损作用的实验研究[D]. 阳运康. 重庆医科大学, 2014(03)
• [5]不同剂量X线辐照对大鼠周围神经损伤后神经再生影响的实验研究[D]. 张勇. 苏州大学, 2014(10)
• [6]膝关节前交叉韧带损伤修复重建的替代材料[J]. 胡艳. 中国组织工程研究, 2012(51)
• [7]辐照和绿茶多酚处理同种异体神经移植体的实验研究[J]. 周胜虎,甄平,高明暄,田琦,李旭升. 中国矫形外科杂志, 2012(20)
• [8]CO/O2混合气体干燥保存法在同种异体神经移植中应用的实验研究[D]. 尹华伟. 复旦大学, 2012(02)
• [9]二氧化碳氧气混合气干燥保存周围神经的实验研究[D]. 腾飞. 复旦大学, 2010(03)
• [10]复合FK506/NGF/RGD多肽接枝聚（羟基乙酸-L-赖氨酸—乳酸）缓释膜应用于同种异体神经移植的实验研究[D]. 征华勇. 南方医科大学, 2009(01)

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