一、卡介苗诱导人肺腺上皮细胞Fall-39mRNA表达及其抗菌活性的增强（论文文献综述）
胡秀娟[1]（2012）在《人鼻黏膜上皮细胞的培养及hBD-2的诱导》文中指出目的：以正常鼻咽上皮细胞NP69作参照,建立人鼻黏膜原代上皮细胞模型,探索脂多糖（LPS）和肿瘤坏死因子a（TNF-a）对人鼻黏膜上皮细胞诱导hBD-2的可表达性和差异性,以及不同浓度与诱导hBD-2表达的强弱和持续时间的关系。方法：1.采用人下鼻甲黏膜,以工型胶原酶加胰酶消化法分离上皮细胞,用添加了生长因子和牛下丘脑提取物的Keratinocyte-SFM培基,在体外培养原代鼻黏膜上皮细胞,并通过免疫细胞化学法对培养的鼻黏膜上皮细胞和复苏的NP69细胞进行细胞角蛋白鉴定。2.应用PCR和免疫细胞化学技术检测脂多糖（LPS）和肿瘤坏死因子a（TNF-a）诱导鼻黏膜上皮细胞和NP69细胞中hBD-2的表达量。结果：1.体外培养的人鼻黏膜原代细胞经细胞角蛋白AE1/AE3鉴定为上皮细胞,阳性率高达92.97%,较NP69细胞高；2.不同质量浓度的LPS（1、10mg/L）、TNF-a（0.1、1、10、100ng/ml）刺激人鼻黏膜上皮细胞4h后,hBD-2mRNA表达呈剂量依赖性升高,两两比较差异显着（p<0.05）。3.不同质量浓度的LPS（0.01、0.1、1、10mg/L）、TNF-a（0.1、1、10、100ng/ml）刺激人鼻咽上皮细胞（NP69）4h后,hBD-2mRNA表达均较对照组（未刺激组）降低,两两比较差异显着（p<0.05）。4.一定浓度的LPS（10ug/ml）刺激培养的鼻黏膜上皮细胞,hBD-2mRNA的表达量0-4h逐渐升高,4-24h逐渐下降,两两比较差异显着（p<0.05）；一定浓度的LPS（10ug-ml）刺激培养的NP69不同时间后,hBD-2mRNA的表达量无明显增加,两两比较无明显差异（p>0.05）5.一定浓度的LPS（10ug/ml）.TNF-a（100ng/ml）刺激培养的鼻黏膜上皮细胞和NP69细胞4h后,免疫细胞化学证实鼻黏膜上皮细胞胞浆中hBD-2蛋白表达；NP69细胞胞浆基本无hBD-2蛋白表达。结论：1.本实验用K-SFM培基成功培养了人鼻黏膜上皮细胞。2.脂多糖（LPS）和肿瘤坏死因子a（TNF-a）两种不同的诱导因素均可诱导人鼻黏膜上皮细胞中hBD-2的表达,这种表达不仅具有差异性,而且具有剂量依赖性和时间依赖性。3.相同剂量的LPS诱导鼻黏膜上皮细胞和NP69细胞两种不同细胞hBD-2的表达时,其时效性不同。
张敏,孙丽蓉[2]（2010）在《人β防御素-1与呼吸系统疾病的研究进展》文中研究表明人β防御素-1（human beta-defensin 1,HBD1）是一类在人类上皮细胞内广泛表达的抗微生物肽,在呼吸系统防御中发挥重要作用。本文就HBD-1的分子结构、生物学活性、表达调控及其在呼吸系统疾病中的研究进展进行综述。
唐博[3]（2007）在《蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素（sBD-1）表达的研究》文中研究表明内源性抗微生物肽是生物体内先天性免疫的重要组成成分,防御素（defensins）是其中一大家族。β-防御素是防御素家族中的的重要成员,它主要分布于哺乳动物和鸟类的粘膜上皮组织内,已被确认为黏膜表面抗微生物屏障的组成成分。因目前未见有关羊雌性生殖道防御素的研究报道。也未见生殖道防御素表达和雌激素、孕激素关系的研究报道。本文系统研究了蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素（sBD-1）的表达情况,并系统研究了生殖道β-防御素的表达和雌激素、孕激素的关系。结果如下:1运用RT-PCR技术,首次从蒙古绵羊雌性生殖道各器官中证实,β-防御素（sBD-1）在蒙古绵羊输卵管、子宫、子宫颈、阴道粘膜上皮内均有表达。并且发现,sBD-1在雌性生殖道的各个器官内的表达量不同。其中在子宫颈的表达量最高,子宫和输卵管内的表达量次之,阴道内的表达量最少。2将蒙古绵羊输卵管组织sBD-1的RT-PCR产物回收、地高辛探针标记,应用原位杂交技术,检测sBD-1 mRNA在输卵管组织中的定位。结果显示:sBD-1 mRNA在蒙古绵羊输卵管粘膜层上皮细胞游离面的胞质内表达。sBD-1在固有层、肌层、结缔组织中无表达。符合β-防御素主要表达于黏膜表面细胞的规律。3用0.25%胰蛋白酶消化方法,成功获得了原代培养、传代培养的蒙古绵羊输卵管上皮细胞。经形态学、免疫组化方法鉴定,证实所培养细胞为上皮细胞。传三代细胞经染色体核型分析表明,传代培养细胞健康正常。可以作为研究输卵管上皮细胞sBD-1表达与激素关系的研究模型细胞。4为了探讨蒙古绵羊雌性生殖道sBD-1的表达量是否与雌激素、孕激素有关,本实验对培养的蒙古绵羊输卵管上皮细胞进行激素添加实验。传代细胞培养4d,更换无血清培养液10h,添加激素培养,运用荧光定量RT-PCR方法检测sBD-1的表达情况。结果显示:（1）添加10-8 M,10-9 M ,10-10 M 17-β-雌二醇组均与对照组有极显着差异,而10-11 M17-β-雌二醇组与对照组无显着性差异。添加17-β-雌二醇情况下,不同培养时间对sBD-1的表达量无显着性影响。一定浓度的17-β-雌二醇对sBD-1表达有促进作用。（2）添加10-6 M,10-7 M孕酮组与对照组有显着性差异,10-8 M,10-9 M孕酮组与对照组差异极显着,10-11 M孕酮组与对照组无显着性差异。一定浓度的孕酮对培养的输卵管上皮细胞sBD-1的表达有促进作用。（3）模拟发情期激素浓度组（添加10-8 M 17-β-雌二醇,10-9 M孕酮）与对照组有极显着差异,模拟妊娠期激素浓度组（添加10-10 M 17-β-雌二醇, 10-7 M孕酮）与对照组有显着差异。17-β-雌二醇和孕酮混合添加对sBD-1表达也有促进作用;因此雌性生殖道防御素的表达与雌性动物的生理周期有关。由此说明,雌激素和孕激素是防御素表达的促进因素之一,但是不是防御素表达的必需因素。5为了进一步探讨雌激素、孕激素对雌性生殖道β-防御素表达的促进作用机理,培养的输卵管上皮细胞在添加雌激素拮抗剂他莫昔芬和孕激素拮抗剂米非司酮处理后,继续添加相应浓度的雌激素、孕激素,运用荧光定量RT-PCR方法检测sBD-1表达情况。结果显示,添加10-6 M他莫昔芬作用一定时间之后,再添加10-8 M 17-β-雌二醇对sBD-1表达没有促进作用;而添加10-6 M米非司酮一定时间之后,再添加10-8 M孕酮对sBD-1表达也不产生影响。雌激素、孕激素对β-防御素表达的促进作用是通过与相应的雌激素受体和孕激素受体结合实现的。
朱黎明,陈平[4]（2006）在《防御素与肺部疾病的研究进展》文中研究表明防御素是先天性免疫和获得性免疫系统的重要组成部分,已成为生物医学研究的热点。本文主要总结防御素与肺部疾病相关的内容,对防御素在呼吸系统的表达与肺部感染、肺损伤、肺结核、肺纤维化、COPD、支气管哮喘的关系进行简述。
侯松萍[5]（2006）在《卡介苗多糖核酸或卡介苗吸入对呼吸道Toll样受体、β-防御素的mRNA表达的影响》文中研究表明TLR是近年来新发现的一种同源于果蝇Toll的蛋白分子,在宿主天然免疫中具有重要作用。Toll样受体是一类负责信号传递的跨膜受体。可以识别病原微生物细胞壁成分,并启动细胞自身的抗感染免疫。呼吸道上皮细胞分泌抗菌肽在天然免疫防御微生物入侵方面起重要的作用,尤其β-防御素,体外实验显示其有很强的抗细菌、真菌、病毒作用,并且不产生获得性耐药性,在体内则参与抵抗微生物的早期宿主防御反应。本文首次通过卡介苗多糖核酸或卡介苗雾化吸入,研究对呼吸道炎症时大鼠活体内肺组织TLR2、TLR4、RBD-1、RBD-2的mRNA表达的影响,发现卡介苗多糖核酸或卡介苗雾化吸入能增强机体表达内源性TLR2、RBD-2的mRNA,协助治疗呼吸道感染,此结果为呼吸道炎症时用免疫调节剂提高机体表达内源性TLR2、RBD-2的mRNA,开辟抗感染治疗的新途径提供了理论基础。
王国兴[6]（2005）在《双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2基因表达及其信号转导机制》文中认为消化道中定植有大量菌群,消化道上皮细胞与这些菌群直接接触,是肠道粘膜免疫的第一道防线,其分泌的抗菌肽分子在维持肠道微生态平衡、抵抗病原菌感染中占有重要地位。人β-防御素-2（hBD-2）是一重要的抗菌肽分子,广泛表达于皮肤、呼吸道、消化道、泌尿生殖道等粘膜上皮细胞中,具有重要的抗感染功能。hBD-2具有诱导表达的特点,通常情况下肠道上皮细胞不表达hBD-2,但在受到致病因子刺激时,hBD-2的表达量迅速提高,进而发挥粘膜保护功能。 以往的研究显示病原菌如肠炎性沙门氏菌,侵袭性大肠杆菌等能够诱导人肠道上皮细胞hBD-2表达,但是益生菌与抗菌肽之间的关系还没有相关研究,而且hBD-2诱导表达的调控及其信号转导机制十分复杂,目前尚不完全清楚。双歧杆菌作为人体主要益生菌之一,参与了宿主的消化、营养、代谢、吸收、免疫及抗感染过程。因此通过探讨双歧杆菌与hBD-2表达之间的关系,寻找诱导hBD-2基因表达的有效刺激因子,不仅能够通过提高粘膜局部hBD-2浓度而达到杀灭病原菌的目的,而且有助于在分子水平上揭示机体抗感染免疫防御机制。 本项研究目的是检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞hBD-2基因的激活作用并分离其活性组分,进一步探讨其受体及其胞内信号传导通路。 首先,我们研究了双歧杆菌对人肠腺上皮细胞hBD-2基因的激活作用并分离其活性组分。厌氧培养长双歧杆菌,采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取方法获得双歧杆菌胞壁蛋白质成份,分别利用活菌,热灭活全菌,全
王伯瑶,吴琦,黄宁[7]（2004）在《炎症反应相关基因诱导表达的信号转导与新药研发的展望》文中进行了进一步梳理
侯松萍,董震[8]（2004）在《人β-防御素与下呼吸道黏膜免疫》文中指出细菌耐药现象日益严重 ,如何降低耐药菌产生和怎样治疗耐药菌感染是一个世界性难题。近 10年来人们发现了 β 防御素 ,它具有广谱抗微生物作用 ,除了极个别病原体对其天然耐药外 ,未发现获得性耐药菌 ,下面主要对人 β 防御素 1、β 防御素 2、β 防御素 3的分子结构、生物学活性、基因表达调控、β 防御素在下呼吸道抗感染中的作用及展望进行综述。
杨银凤[9]（2004）在《骆驼β-防御素-1（caBD-1）的分子克隆和组织表达》文中研究说明内源性抗微生物肽是生物体内先天性免疫的重要组成成分，防御素（defensins）是广泛分布于动物和植物界的一类富含半胱氨酸的阳离子内源性抗微生物肽，是内源性抗微生物肽中的一个大家族。根据防御素分子内半胱氨酸的位置和连接方式、前体性质及表达位置的差异可分为α-防御素、β-防御素、θ-防御素、昆虫防御素和植物防御素五种类型。β-防御素主要分布于哺乳动物的黏膜上皮细胞内，所以，β-防御素被确认为黏膜表面抗微生物屏障的组成成分。已有研究报道在哺乳动物—牛、羊、猪、鼠、猴体内有β-防御素的表达。本研究中我们在骆驼体内又发现了一种新的β-防御素，命名为骆驼β-防御素-1（camelβ-defensin-1，caBD-1）。从骆驼舌黏膜上皮组织中提取总RNA，根据反刍动物—牛和羊β-防御素cDNA的保守序列设计了一对引物，采用RT-PCR技术扩增出caBD-1的cDNA,并重组到pBlueselect T载体，经限制性内切酶图谱分析后进行DNA序列测定, 测序结果证实所克隆的caBD-1的cDNA为β-防御素，因为该cDNA包含一个由192个碱基组成的开放读码框（Open Reading Frame，ORF），该ORF编码64个氨基酸残基的前原防御素肽，该前原防御素肽含有β-防御素的特征性结构，即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。获得全长cDNA序列是研究基因结构、基因表达和基因功能的重要前提。我们根据已获得的骆驼β-防御素caBD-1 cDNA的已知序列设计了一条序列特异性引物作为上游引物，反转录引物中的部分序列即3ˊ接合器引物作为下游引物，成功地克隆了骆驼β-防御素caBD-1 cDNA的3ˊ末端序列。另外，采用反向嵌套 PCR 5ˊRACE法，根据caBD-1 cDNA 的已知序列，设计了一条5ˊ末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR 引物，首先进行反转录（Reverse Transcription，RT）, 然后将mRNA反转录成的cDNA进行环化，最后进行反向嵌套巢式PCR，成功地克隆了骆驼β-防御素caBD-1 cDNA的5ˊ末端序列。与锚定PCR法相比，反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点，是一种有效扩增cDNA 5ˊ末端序列的方法。caBD-1 cDNA 序列全长322bp，其中192bp组成的ORF编码64个氨基酸残基的前原caBD-1肽，通过计算机软件预测该前原肽包含20个氨基酸残基的信号肽、6个氨基酸残基的前片段和38个氨基酸残基的成熟肽。在预测的38个氨基酸残基的成熟肽中有6个在特定位置上的不变的半胱氨酸残基，9个带正电荷的氨基酸残基（2个精氨酸Arginine－R，7个赖氨酸Lysine－K），没有带负电荷的氨基酸残基，因此caBD-1是一个阳离子肽。其分子量为4007.94Da , 等电点pI为9.71。通过计算机软件将caBD-1和其他哺乳动物、人及禽类的β-防御素进行cDNA碱基序列和前原肽氨基酸序列的同源性比较分析，结果显示：caBD-1与猪的β-防御素pBD-1<WP=8>的同源性最高（78.1%，76.6%），与牛和羊的β-防御素之间的同源性次之（67.7%～74.9%，51.6%～60.9%），与人、猴、鼠和禽类的β-防御素的同源性最低（大部分在30%以下）。由此可以看出caBD-1无论是cDNA序列还是前原肽序列与猪的β-防御素pBD-1的亲缘关系比与其他反刍动物—牛、羊的β-防御素近，这说明防御素进化的多样性。为了检测caBD-1 mRNA在骆驼体内的可能表达器官，我们又根据已知的caBD-1 cDNA序列设计了一对预计扩增产物为203bp的引物，通过RT-PCR检测了骆驼的整个消化管（舌、食管、前胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、结肠前段、结肠后段、直肠）黏膜、肝脏、胰腺、气管黏膜、肺脏、肾脏、膀胱黏膜、卵巢、子宫内膜、脾脏、淋巴结、心脏等器官内caBD-1 mRNA的表达。结果显示：caBD-1 mRNA在整个消化道、气管、膀胱、子宫等管状器官内的黏膜层内有表达，而在实质性器官如心脏、肝脏、胰腺、肺脏、脾脏、淋巴结、卵巢、肾脏中无caBD-1 mRNA表达。caBD-1 mRNA的这种表达形式提示我们骆驼体内的这种内源性抗微生物肽有助于骆驼的黏膜宿主防御。为了进一步确定caBD-1在消化道内的表达部位，我们选择了被覆有复层扁平上皮的舌和被覆有单层柱状上皮的回肠作为组织代表，根据已克隆的骆驼β-防御素caBD-1 cDNA的序列设计并合成了长为42bp的反意核酸探针，探针经地高辛标记后应用原位杂交技术检测了caBD-1 mRNA的表达部位。结果表明：caBD-1 mRNA表达于骆驼回肠隐窝的柱状上皮以及舌背表面复层扁平上皮的中层和深层上皮内，而在舌的表层角化上皮中不表达。caBD-1的发现为我们更好地理解骆驼黏膜防御机制提供了有力的依据。
常薪霞[10]（2004）在《23价肺炎球菌多糖疫苗刺激大鼠肺组织β-防御素-2的表达研究》文中研究指明研究背景和目的:老年人由于各种器官、组织生理功能衰退,导致全身和局部免疫力下降,易患各种感染性疾病,其中最常见的是易患呼吸系统的感染,抗菌药物的广泛使用已经导致耐药菌株的出现及蔓延,尤其老年人由于病程长,合并基础疾病多,由感染所致的病死率显着增加。细菌对传统抗菌药物的耐药性是一严重的全球性问题,因此发展新的抗感染战略十分迫切。生物防御素是天然免疫的内源性关键成分,是一种富含半胱氨酸、通过破坏病原微生物膜的完整性而发挥抗菌作用的阳离子低分子多肽。具有效杀灭细菌、病毒、真菌和螺旋体等,其中β-防御素-2是具有强大杀菌活性的内源性抗菌肽,主要在肺部表达,在保持肺部无菌、抵御细菌入侵中起着重要的作用。除了杀菌作用外,β-防御素在获得性抗微生物免疫中有着调节作用。体外研究表明绿脓杆菌、脂多糖（lipopolys accharide、LPS）及炎症介质可以刺激β-防御素-2的表达增加。动物实验研究表明,防御素的表达和孕龄有关,且从足月到成年不同发育阶段均有β-defnesin-2的表达,但是表达量有无差异及老年群体能否刺激表达,尚没有这一方面的研究。脏器和免疫功能方面逐渐走向衰退,肺部表达防御素在青年和老年之间有无差别,目前没有这一方面的研究。23价肺炎球菌多糖疫苗含有23种血清型肺炎链球菌的荚膜多糖,能有效预
二、卡介苗诱导人肺腺上皮细胞Fall-39mRNA表达及其抗菌活性的增强（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、卡介苗诱导人肺腺上皮细胞Fall-39mRNA表达及其抗菌活性的增强（论文提纲范文）
（1）人鼻黏膜上皮细胞的培养及hBD-2的诱导（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 标本来源 |
| 2.1.2 实验试剂及耗材 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要溶液的配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞来源 |
| 2.2.2 细胞的分离与培养 |
| 2.2.3 细胞传代 |
| 2.2.4 细胞活力检测 |
| 2.2.5 上皮细胞鉴定及纯度检测 |
| 2.2.6 PCR-多重聚合酶链式反应 |
| 2.2.7 免疫细胞化学 |
| 2.3 结果观察判定 |
| 2.3.1 荧光定量PCR结果判定 |
| 2.3.2 RT—PCR结果判定方法 |
| 2.3.3 免疫组织化学结果判定方法 |
| 2.4 统计分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 细胞形态特征及生长状态 |
| 3.1.1 鼻黏膜上皮细胞 |
| 3.1.2 正常鼻咽上皮细胞(NP69) |
| 3.2 上皮细胞免疫细胞化学鉴定结果 |
| 3.3 细胞成活率及纯度比较 |
| 3.4 总RNA完整性检测 |
| 3.5 荧光定量PCR检测刺激因子诱导hBD-2mRNA的表达 |
| 3.6 RT-PCR检测刺激因子诱导hBD-2mRNA的表达 |
| 3.6.1 LPS刺激上皮细胞对hBD-2mRNA表达的作用 |
| 3.6.2 TNF-a刺激上皮细胞对hBD-2mRNA表达的作用 |
| 3.6.3 一定浓度LPS不同时间点刺激上皮细胞对hBD-2mRNA表达的作用 |
| 3.7 免疫细胞化学检测hBD-2的表达 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 原代上皮细胞的培养 |
| 4.2 hBD-2的诱导 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 |
（3）蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素（sBD-1）表达的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 防御素的研究进展 |
| 1.1.1 防御素分子家族的发现简况 |
| 1.1.2 防御素的分类 |
| 1.1.3 防御素的生物合成 |
| 1.1.4 防御素的分子特征 |
| 1.1.5 防御素的分布 |
| 1.1.6 防御素的基因结构及表达调节 |
| 1.1.7 防御素的生物学活性 |
| 1.1.8 防御素的应用前景 |
| 1.1.9 今后防御素的研究方向 |
| 1.2 雌激素、孕激素及其受体和受体抑制剂 |
| 1.2.1 雌激素、孕激素来源 |
| 1.2.2 雌激素和孕激素的生理作用 |
| 1.2.3 雌激素受体 |
| 1.2.4 孕激素受体 |
| 1.2.5 雌激素和孕激素的抑制剂及抑制剂机理 |
| 1.3 本研究的目的、意义 |
| 2 实验一 蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素（sBD-1）的组织表达 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物及组织 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 |
| 2.1.3 PCR 引物的设计及合成 |
| 2.1.4 蒙古绵羊雌性生殖道各组织总 RNA 的提取及检测 |
| 2.1.5 RT-PCR 反应 |
| 2.1.6 sBD-1 基因cDNA 的克隆及重组质粒的筛选和鉴定 |
| 2.1.7 RT-PCR 产物cDNA 的序列测定 |
| 2.1.8 序列分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 蒙古绵羊雌性生殖道各组织总 RNA 的检测结果 |
| 2.2.2 蒙古绵羊雌性生殖道各组织 RT-PCR 扩增结果 |
| 2.2.3 蒙古绵羊输卵管组织PCR 产物的克隆、筛选及鉴定 |
| 2.2.4 蒙古绵羊输卵管组织PCR 产物的序列分析结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 β-防御素的分布范围 |
| 2.3.2 蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素的表达情况 |
| 2.4 小结 |
| 3 实验二 蒙古绵羊输卵管β-防御素（sBD-1）的表达定位 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验动物及其组织 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂 |
| 3.1.3 输卵管sBD-1 RT-PCR 产物的合成、回收与核酸探针的合成 |
| 3.1.4 原位杂交 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 输卵管sBD-1 RT-PCR 产物的回收 |
| 3.2.2 输卵管原位杂交检测结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 β–防御素的定位 |
| 3.3.2 原位杂交方法 |
| 3.4 小结 |
| 4 实验三 蒙古绵羊输卵管上皮细胞培养及特征鉴定 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 仪器设备 |
| 4.1.3 实验药品 |
| 4.1.4 输卵管上皮细胞培养方法的建立 |
| 4.1.5 细胞形态学鉴定 |
| 4.1.6 培养细胞的染色体核型分析 |
| 4.1.7 细胞免疫组化法鉴定 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 细胞培养结果 |
| 4.2.2 传代输卵管上皮细胞吉姆萨染色形态 |
| 4.2.3 染色体核型分析结果 |
| 4.2.4 免疫组化结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 上皮细胞的培养 |
| 4.3.2 上皮细胞的鉴定 |
| 4.4 小结 |
| 5 实验四 17-β-雌二醇和孕酮对培养的输卵管上皮细胞sBD-1 表达的影响 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 实验材料处理同本论文4.1.1 |
| 5.1.2 实验材料 |
| 5.1.3 仪器及试剂 |
| 5.1.4 PCR 引物的设计及合成 |
| 5.1.5 实验设计 |
| 5.1.6 细胞总 RNA 的提取 |
| 5.1.7 荧光定量RT-PCR 检测培养的输卵管上皮细胞sBD-1 表达的定量方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 荧光定量RT-PCR 检测培养的输卵管上皮细胞sBD-1 表达定量方法的确定 |
| 5.2.2 添加17-β-雌二醇对培养的输卵管上皮细胞β-防御素表达的影响 |
| 5.2.3 添加孕酮对培养的输卵管上皮细胞β-防御素表达的影响 |
| 5.2.4 模拟妊娠期、发情期处理结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 生理状态下雌激素、孕激素浓度的变化和实验中17-β-雌二醇、孕酮的浓度确定 |
| 5.3.2 17-β-雌二醇对sBD-1 表达的影响 |
| 5.3.3 孕酮对sBD-1 表达的影响 |
| 5.3.4 孕酮和17-β-雌二醇综合添加对防御素表达的影响 |
| 5.4 小结 |
| 6 实验五 17-β-雌二醇、孕酮二者拮抗剂对培养的输卵管上皮细胞sBD-1 表达的影响 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 实验材料处理同本论文4.1.1 |
| 6.1.2 实验材料实验材料为蒙古绵羊输卵管上皮细胞的第一代传代细胞。处理方法同本论文4.1.4 |
| 6.1.3 仪器及试剂实验仪器及试剂同本论文5.1.3 |
| 6.1.4 PCR 引物的设计及合成 |
| 6.1.5 实验设计 |
| 6.1.6 细胞总RNA 的提取同本论文5.1.6 |
| 6.1.7 荧光定量RT-PCR 检测培养的输卵管上皮细胞sBD-1 表达的定量方法 |
| 6.1.8 荧光定量RT-PCR 同本论文5.1.7.2 和5.1.7.3 |
| 6.1.9 实验数据处理 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 添加17-β雌二醇拮抗剂他莫昔芬对培养的输卵管上皮细胞β-防御素表达的影响 |
| 6.2.2 添加孕酮拮抗剂米非司酮对培养的输卵管上皮细胞β-防御素表达的影响 |
| 6.3 讨论 |
| 6.3.1 雌激素受体、孕激素受体、他莫昔芬和米非司酮在本研究中的意义 |
| 6.3.2 添加17-β雌二醇拮抗剂他莫昔芬与防御素表达相关性 |
| 6.3.3 添加孕酮拮抗剂米非司酮与防御素表达相关性 |
| 6.4 小结 |
| 7 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
（4）防御素与肺部疾病的研究进展（论文提纲范文）
| 1 防御素的组织分布及蛋白结构 |
| 1.1 在组织中的分布 |
| 1.2 基因定位及蛋白质结构 |
| 2 防御素与肺疾病的关系 |
| 2.1 防御素与肺部细菌、病毒感染 |
| 2.2 防御素与急性肺损伤 |
| 2.3 防御素与肺结核 |
| 2.4 防御素与肺纤维化 |
| 2.5 防御素与COPD |
| 2.6 防御素与支气管哮喘 |
| 3 防御素与肺部疾病的研究展望及临床应用前景 |
（5）卡介苗多糖核酸或卡介苗吸入对呼吸道Toll样受体、β-防御素的mRNA表达的影响（论文提纲范文）
| 英文缩写词表 |
| 前言 |
| 第一部分 制作大鼠支气管肺炎模型 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 方法 |
| 1.4.1 大鼠支气管肺炎模型的制作方法 |
| 1.4.2 支气管肺泡灌洗(BAL)方法 |
| 1.4.3 统计方法 |
| 1.5 结果 |
| 1.5.1 LPS 对大鼠临床表现的影响 |
| 1.5.2 LPS 对大鼠外周血白细胞计数及分类的影响 |
| 1.5.3 LPS 对大鼠BALF 白细胞计数及分类的影响 |
| 1.5.4 LPS 对大鼠支气管及肺组织病理表现的影响 |
| 1.6 讨论 |
| 第二部分 卡介苗多糖核酸样受体MRNA 表达的影响 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 主要试剂 |
| 2.4 方法 |
| 2.4.1 卡介苗多糖核酸、卡介苗雾化吸入的分组、吸入方法和标本留取 |
| 2.4.2 大鼠肺组织TLR2、TLR4 mRNA 水平的测定 |
| 2.4.3 统计方法 |
| 2.5 结果 |
| 2.5.1 吸入卡介苗多糖核酸、卡介苗对肺炎大鼠肺组织的TLR2表达的影响 |
| 2.5.2 吸入卡介苗多糖核酸、卡介苗对肺炎大鼠肺组织的TLR4表达的影响 |
| 2.6 讨论 |
| 2.6.1 LPS 对肺组织TLR2 /4 m RNA 表达的调节作用 |
| 2.6.2 卡介苗或卡介苗多糖核酸对肺组织TLR2用 |
| 第三部分卡介苗多糖核酸-2 的MRNA 表达的影响 |
| 3.1 实验动物:同第二部分 |
| 3.2 主要仪器:同第二部分 |
| 3.3 主要试剂:同第二部分 |
| 3.4 方法 |
| 3.4.1 卡介苗多糖核酸、卡介苗雾化吸入的分组、吸入方法和标本留取 |
| 3.4.2 大鼠肺组织RBD-1、RBD-2mRNA 水平的测定 |
| 3.4.3 统计方法 |
| 3.5 结果 |
| 3.5.1 肺组织的RBD-1、RBD-2mRNA 表达的变化 |
| 3.5.2 模型组大鼠吸入卡介苗多糖核酸、卡介苗、生理盐水对临床表现的影响 |
| 3.6 讨论 |
| 3.6.1 吸入卡介苗、卡介苗多糖核酸对肺炎大鼠肺组织β-防御素-1、β防御素-2 的mRNA 表达的影响 |
| 3.6.2 吸入卡介苗、卡介苗多糖核酸对肺炎大鼠临床表现的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述:人Β-防御素与下呼吸道粘膜免疫 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 |
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
（6）双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2基因表达及其信号转导机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞hBD-2基因表达 |
| 一 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 二 结果 |
| 三 讨论 |
| 四 结论 |
| 第二部分 双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞hBD-2基因表达调控及其信号转导机制研究 |
| 一 材料及方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 二 结果 |
| 三 讨论 |
| 四 结论 |
| 第三部分 TLR-2受体信号通路在双歧杆菌胞壁蛋白诱导肠腺上皮细胞hBD-2表达中的作用 |
| 一 材料及方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 二 结果 |
| 三 讨论 |
| 四 结论 |
| 第四部分 人抗菌肽hBD-2大肠杆菌原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定 |
| 一 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 二 结果 |
| 三 讨论 |
| 四 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述一：胃肠道抗菌肽研究进展 |
| 文献综述二：Toll样受体及其信号转导 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
| 声明 |
（7）炎症反应相关基因诱导表达的信号转导与新药研发的展望（论文提纲范文）
| 一、上皮细胞内源性抗菌肽基因的诱导表达及其信号转导 |
| 1.人肺上皮细胞β-防御素1 (hBD-1) 基因可对卡介苗 (BCG) 起反应 |
| 2.细菌LPS通过Toll/NF-κB信号转导诱导哺乳动物防御素基因的表达 |
| 3.双岐杆菌可诱导人肠上皮细胞抗菌肽基因的表达 |
| 二、层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因表达及其信号转导 |
| 三 |
| 四、上皮细胞炎症反应的负相调节及其分子机制 |
| 1.大肠杆菌抑制肺组织β-防御素-2基因的表达 |
| 2.绿脓杆菌培养上清可诱导气管上皮细胞IL-8基因和相关转录因子的激活与耐受 |
（8）人β-防御素与下呼吸道黏膜免疫（论文提纲范文）
| 1 β-防御素的分子结构 |
| 1.1 基因定位 |
| 1.2 蛋白结构 |
| 2 生物学活性 |
| 2.1 抗微生物活性及其作用机制 |
| 2.2 β-防御素的抗微生物活性与阳离子强度的关系 |
| 2.3 β-防御素与获得性免疫 |
| 3 β-防御素基因表达调控及Toll样受体在调控中的作用 |
| 3.1 β-防御素基因表达调控 |
| 3.2 Toll样受体 (TLR) 的分布及在β-防御素基因调控中的作用 |
| 4 β-防御素在下呼吸道抗感染中的作用 |
| 4.1 β-防御素与肺囊性纤维化 |
| 4.2 β-防御素与泛细支气管炎 |
| 4.3 β-防御素与结核分枝杆菌引起的呼吸道感染 |
| 5 展望 |
（9）骆驼β-防御素-1（caBD-1）的分子克隆和组织表达（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 文献综述 |
| 第一章 防御素的研究进展 |
| 1.1 防御素分子家族的发现简况 |
| 1.2 防御素的分类 |
| 1.3 防御素的生物合成 |
| 1.4 防御素的分子特征 |
| 1.4.1 α-防御素和β-防御素 |
| 1.4.1.1 α-防御素 |
| 1.4.1.2 β-防御素 |
| 1.4.1.3 α-防御素与β-防御素差别 |
| 1.4.2 θ-防御素 |
| 1.4.3 昆虫防御素 |
| 1.4.4 植物防御素 |
| 1.5 防御素的分布 |
| 1.5.1 α-防御素 |
| 1.5.2 β防御素 |
| 1.5.3 θ-防御素 |
| 1.5.4 昆虫防御素 |
| 1.5.5 植物防御素 |
| 1.6 防御素的基因结构及表达调节 |
| 1.6.1 α-防御素 |
| 1.6.2 β-防御素 |
| 1.6.3 θ-防御素 |
| 1.6.4 昆虫防御素 |
| 1.6.5 植物防御素 |
| 1.7 防御素的生物学活性 |
| 1.7.1 抗细菌作用 |
| 1.7.1.1 抗菌谱 |
| 1.7.1.2 抗菌机制 |
| 1.7.1.3 影响因素 |
| 1.7.2 抗真菌作用 |
| 1.7.3 抗病毒作用 |
| 1.7.4 细胞毒作用 |
| 1.7.5 其他生物活性 |
| 1.8 防御素的应用前景 |
| 1.8.1 替代抗生素解决细菌耐药性问题 |
| 1.8.2 结合转基因技术赋予细胞自身抗感染能力 |
| 1.8.3 用于调动机体获得性免疫 |
| 1.8.4 指导抗微生物短肽类药物的设计和开发 |
| 1.8.5 其他方面的应用 |
| 1.9 结束语 |
| 1.9.1 本研究的目的、意义及研究方法 |
| 1.9.2 今后防御素的研究方向 |
| 试验研究 |
| 第二章 骆驼β-防御素caBD-1 cDNA的克隆及序列分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物及其组织 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 |
| 2.1.3 PCR引物的设计及合成 |
| 2.1.4 骆驼舌黏膜上皮组织总RNA的提取及检测 |
| 2.1.4.1 骆驼舌黏膜上皮组织总RNA的提取 |
| 2.1.4.2 骆驼舌黏膜上皮组织总RNA的检测 |
| 2.1.5 RT-PCR反应 |
| 2.1.6 caBD-1基因cDNA的克隆及重组质粒的筛选和鉴定 |
| 2.1.6.1 RT-PCR产物的纯化 |
| 2.1.6.2 载体 |
| 2.1.6.3 连接反应 |
| 2.1.6.4 连接产物转化JM109大肠杆菌 |
| 2.1.6.5 重组质粒的筛选 |
| 2.1.6.6 质粒DNA的小量制备 |
| 2.1.6.7 质粒DNA的酶切鉴定 |
| 2.1.7 RT-PCR 产物cDNA 的序列测定 |
| 2.1.8 序列分析 |
| 2.1.9 引用序列号 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 总RNA的检测结果 |
| 2.2.2 RT-PCR扩增结果 |
| 2.2.3 caBD-1基因cDNA的克隆及重组质粒的筛选和鉴定 |
| 2.2.4 RT-PCR产物的测序及序列分析结果 |
| 2.2.5 caBD-1与牛、羊、猪β-防御素氨基酸序列的比较 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 关于模板RNA和RNA酶(RNase) |
| 2.3.2 内源性抗微生物肽与β-防御素 |
| 2.3.3 骆驼β-防御素的克隆 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 骆驼β-防御素caBD-1 全长cDNA的扩增 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验动物及其组织 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂 |
| 3.1.3 引物的设计及合成 |
| 3.1.4 骆驼舌黏膜上皮组织总RNA的提取及检测 |
| 3.1.5 5ˊRACE |
| 3.1.5.1 5ˊRACE原理(图 |
| 3.1.5.2 cDNA第一条链的合成 |
| 3.1.5.3 Ｈybrid RNA的分解 |
| 3.1.5.4 1st Strand cDNA的纯化 |
| 3.1.5.5 单链cDNA环化 |
| 3.1.5.6 巢式PCR反应 |
| 3.1.6 3ˊRACE |
| 3.1.6.1 3ˊRACE原理(图 |
| 3.1.6.2 cDNA第一条链的合成 |
| 3.1.6.3 PCR反应 |
| 3.1.7 RACE产物的克隆、筛选及鉴定 |
| 3.1.8 DNA序列测定 |
| 3.1.9 序列分析 |
| 3.1.10 引用序列号 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 5ˊRACE |
| 3.2.1.1 5ˊRACE扩增结果 |
| 3.2.1.2 5ˊRACE扩增产物的克隆及重组质粒的筛选和鉴定 |
| 3.2.1.3 5ˊRACE产物的序列分析结果 |
| 3.2.2 3ˊRACE |
| 3.2.2.1 3ˊRACE扩增结果 |
| 3.2.2.2 3ˊRACE产物的克隆及重组质粒的筛选和鉴定 |
| 3.2.2.3 3ˊRACE 产物的测序及序列分析结果 |
| 3.2.3 caBD-1 cDNA 的全序列及同源性比较 |
| 3.2.4 caBD-1肽序列分析及同源性比较 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 关于3ˊRACE和5ˊRACE |
| 3.3.2 关于caBD-1前原肽和成熟肽的特性 |
| 3.3.3 关于caBD-1与其他动物β防御素的同源性 |
| 3.3.4 关于β防御素与某些毒素的关系 |
| 3 4 小结 |
| 第四章 骆驼β-防御素caBD-1的组织表达 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验动物及其组织 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂 |
| 4.1.3 PCR引物的设计及合成 |
| 4.1.4 骆驼组织总RNA的提取及检测 |
| 4.1.5 RT-PCR反应 |
| 4.1.6 RT-PCR产物的纯化 |
| 4.1.7 DNA序列测定 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 总RNA的检测结果 |
| 4.2.2 RT-PCR扩增结果 |
| 4.2.3 RT-PCR产物的测序结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 β-防御素的分布范围 |
| 4.3.2 骆驼β-防御素的分布特点 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 骆驼β-防御素caBD-1的RNA原位杂交 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验动物 |
| 5.1.2 主要仪器和试剂 |
| 5.1.3 caBD-1核酸探针的合成 |
| 5.1.4 原位杂交 |
| 5.1.4.1 取材、固定和切片 |
| 5.1.4.2 组织切片的杂交前预处理 |
| 5.1.4.3 杂交 |
| 5.1.4.4 杂交后检测 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 上皮性β防御素 |
| 5.3.2 原位杂交 |
| 5.4 小结 |
| 结 论 |
| 参考文献 |
| 附 图 |
| 致 谢 |
| 作者简介 |
（10）23价肺炎球菌多糖疫苗刺激大鼠肺组织β-防御素-2的表达研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 论文 23价肺炎球菌多糖疫苗刺激大鼠肺组织β-防御素-2的表达研究 |
| 前言 |
| 第一部分 预实验 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 正式实验 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 β-防御素概况及其与多种疾病的关系 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、卡介苗诱导人肺腺上皮细胞Fall-39mRNA表达及其抗菌活性的增强（论文参考文献）
- [1]人鼻黏膜上皮细胞的培养及hBD-2的诱导[D]. 胡秀娟. 中南大学, 2012(02)
- [2]人β防御素-1与呼吸系统疾病的研究进展[J]. 张敏,孙丽蓉. 国际呼吸杂志, 2010(19)
- [3]蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素（sBD-1）表达的研究[D]. 唐博. 内蒙古农业大学, 2007(03)
- [4]防御素与肺部疾病的研究进展[J]. 朱黎明,陈平. 国际呼吸杂志, 2006(04)
- [5]卡介苗多糖核酸或卡介苗吸入对呼吸道Toll样受体、β-防御素的mRNA表达的影响[D]. 侯松萍. 吉林大学, 2006(10)
- [6]双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素-2基因表达及其信号转导机制[D]. 王国兴. 四川大学, 2005(01)
- [7]炎症反应相关基因诱导表达的信号转导与新药研发的展望[J]. 王伯瑶,吴琦,黄宁. 四川生理科学杂志, 2004(04)
- [8]人β-防御素与下呼吸道黏膜免疫[J]. 侯松萍,董震. 国外医学.呼吸系统分册, 2004(06)
- [9]骆驼β-防御素-1（caBD-1）的分子克隆和组织表达[D]. 杨银凤. 西北农林科技大学, 2004(04)
- [10]23价肺炎球菌多糖疫苗刺激大鼠肺组织β-防御素-2的表达研究[D]. 常薪霞. 四川大学, 2004(02)