一、NGF对小鼠骨髓基质细胞体外诱导分化作用（论文文献综述）
詹吉恒[1]（2020）在《虎杖苷上调Nrf2/ARE促进神经分化在骨髓干细胞移植治疗脊髓损伤中的应用》文中认为目的:1.分离、培养小鼠BMSCs,探讨虎杖苷对BMSCs向神经元样细胞定向分化潜能的影响,并筛选虎杖苷在体外实验的工作浓度,为进一步实验奠定基础。2.建立小鼠脊髓损伤动物模型,通过分组干预,探讨虎杖苷对移植BMSCs在体内脊髓伤区中向神经分化的作用。3.应用小鼠BMSCs神经诱导分化体系和脊髓损伤动物模型,探讨虎杖苷-Nrf2/ARE轴在BMSCs向神经分化中的调控机制。4.对比虎杖苷灌胃、BMSCs定点移植、虎杖苷灌胃联合BMSCs移植在小鼠脊髓损伤模型中的治疗效果,通过行为学评价、神经功能检查、组织病理学检测等加以明确。方法:1.虎杖苷对BMSCs在体外向神经分化的影响（1）BMSCs的分离、培养、传代及鉴定从C57BL/6小鼠肱骨、股骨、胫骨中提取原代BMSCs,并进行培养、传代。通过成骨诱导、成软骨诱导及相关特异性染色检测细胞的多向分化潜能;流式细胞术检测小鼠BMSCs表面标记物。（2）虎杖苷对BMSCs活性及向神经分化潜能的影响CCK-8检测不同浓度虎杖苷对BMSCs活性的影响,筛选虎杖苷工作浓度用于神经诱导分化实验,并在镜下动态观察各组细胞形态变化。（3）虎杖苷对神经诱导分化BMSCs中神经标志物表达的影响①WB、RT-qPCR和免疫荧光染色分别检测对照组、标准诱导组和各虎杖苷组（3、10、30μmol/1）中 MAP-2、NeuN、NF-M 和 NSE 的蛋白、mRNA 及荧光表达;②WB检测对照组和30μmol/1虎杖苷组中DBH、ChAT、GAD65和TH的蛋白表达。2.虎杖苷对移植BMSCs在体内向神经分化的影响（1）BMSCs的标记复苏冻存的BMSCs,待细胞汇合度达70%时,加入BrdU标记48h,免疫荧光染色检测细胞标记率。（2）动物分组、造模、干预及取材①125只8周龄C57BL/6小鼠随机分为5组（每组25只）:假手术组（Sham组）、模型组（SCI组）、虎杖苷组（PD组）、干细胞移植组（BMSCs组）、虎杖苷联合干细胞移植组（PD+BMSCs组）;②建立T10节段脊髓损伤动物模型,根据分组情况进行干预:③分别在造模后第7、10及28天取下含损伤节段的新鲜脊髓组织,保存于-80℃备用;造模后第28天取脊髓组织,固定24h,梯度脱水后行冰冻切片。（3）脊髓组织样品检测①免疫荧光染色检测脊髓伤区BrdU/Nestin、BrdU/NeuN和BrdU/NSE双阳性表达情况,WB检测造模28天后脊髓伤区中Nestin、NeuN和NSE蛋白表达;②WB检测造模7天后脊髓组织iNOS、NF-κB蛋白表达,采用ELISA检测IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白表达;③分别检测造模7、10天后脊髓组织中SOD、MDA含量。3.虎杖苷-Nrf2/ARE轴在BMSCs向神经分化中的调控机制（1）细胞实验①细胞分组干预;第一部分实验,分为5组:对照组、标准诱导组、虎杖苷组（3、10、30μmol/1）;第二部分实验,分为5组:对照组、标准诱导组、抑制剂组（100nmol/1鸦胆子苦醇）、虎杖苷组（30μmol/1）、虎杖苷+抑制剂组。②探讨虎杖苷促进BMSCs在体外向神经元样细胞分化的潜在调控通路;WB检测第一部分实验各组细胞PI3K-AKT、MAPK及Nrf2/ARE信号通路相关蛋白的表达,RT-qPCR检测Notch、Wnt、BMP/Smad及Nrf2/ARE信号通路相关基因的mRNA表达。③探讨虎杖苷-Nrf2/ARE轴对BMSCs在体外向神经分化的影响。WB、RT-qPCR和免疫荧光染色分别检测中第二部分实验各组细胞MAP-2、NeuN、NF-M和NSE的蛋白、mRNA及荧光表达。（2）动物实验①动物分组及干预;第一部分实验,共5组（每组7只）,分组情况同上述2.;第二部分实验,共4组（每组7只）:假手术组（Sham组）、模型组（SCI组）、虎杖苷联合干细胞移植组（PD+BMSCs组）、联合治疗+抑制剂组（PD+BMSCs+Bru组）。造模后根据分组情况进行干预,在造模28天后取材。②探讨不同干预方式对体内Nrf2/ARE通路表达的影响;免疫荧光染色检测第一部分实验各组脊髓组织中Nrf2的荧光表达,WB检测Nrf2/ARE通路相关蛋白的表达。③探讨虎杖苷-Nrf2/ARE轴对BMSCs在体内向神经分化的影响。免疫荧光染色检测PD+BMSCs组和PD+BMSCs+Bru组脊髓伤区BrdU/Nestin、BrdU/NeuN和BrdU/NSE双阳性表达情况,WB检测第二部分实验各组脊髓中Nestin、NeuN和NSE蛋白表达。4.虎杖苷联合BMSCs移植在脊髓损伤中的疗效探讨（1）动物分组、造模、干预及取材参照上述2.进行动物分组、造模及干预,在造模28天后取材。（2）行为学评价通过BBB评分标准和斜板实验对各组小鼠后肢运动功能恢复情况进行评估。（3）神经电生理检查造模28天后,进行脊髓诱发电位检测,测量SCEP的波幅和潜伏期。（4）组织学评价①计算脊髓组织损伤表面积,通过HE染色和Nissl染色观察脊髓组织损伤程度;②免疫荧光染色、WB和RT-qPCR分别检测各组脊髓组织MAP-2的荧光、蛋白及mRNA表达,通过透射电镜观察脊髓轴突和髓鞘的超微结构;③GAP43/Tuj1免疫荧光双标记染色观察脊髓组织中轴突新生情况;④免疫荧光染色观察各组脊髓中胶质瘢痕形成情况,WB检测GFAP蛋白表达,GFAP/NF-200免疫荧光双标记染色观察胶质瘢痕和神经丝生长的关系。结果:1.虎杖苷对BMSCs在体外向神经分化的影响提取的BMSCs具有多向分化潜能,且纯度较高。根据CCK-8结果,虎杖苷在3、10、30μmol/1浓度时对细胞活性较好,故选取该浓度范围用于神经诱导分化实验。显微镜下观察发现,虎杖苷组细胞在诱导中后期的神经样细胞数目明显多于标准诱导组。WB和PCR结果显示,与标准诱导组相比,虎杖苷在体外呈浓度依赖性上调细胞中神经标志物MAP-2、NeuN、NF-M和NSE的蛋白和mRNA表达（P<0.05）。且虎杖苷对NF-M和ChAT的荧光表达强度、MAP-2和NeuN的荧光阳性表达率也有促进作用（P<0.05）,在30μmol/1浓度时效果最为显着（P<0.05）。2.虎杖苷对移植BMSCs在体内向神经分化的影响本研究建立的脊髓损伤小鼠模型具有较高的稳定性和可复制性。免疫荧光染色结果显示,造模4周后可在体内检测到BrdU标记的外源性BMSCs,部分细胞同时共表达Nestin、NeuN或NSE。与BMSCs组相比,PD+BMSCs组小鼠脊髓中能检测到更多BrdU/神经标志物双阳性的移植细胞（P<0.05）。WB结果表明各种治疗方式均能上调脊髓中Nestin、NeuN和NSE的蛋白表达,但PD+BMSCs组表达更高（P<0.05）,接近于Sham组水平。各治疗组小鼠脊髓中炎症相关因子表达量、氧化应激相关指标含量比较均无统计学差异（P>0.05）。3.虎杖苷-Nrf2/ARE轴在BMSCs向神经分化中的调控机制（1）细胞实验中,与标准诱导组相比,虎杖苷组细胞中PI3K-AKT和MAPK信号通路相关蛋白的表达及Notch、Wnt和BMP/Smad信号通路相关基因的mRNA表达差异均无统计学意义（P>0.05）。但虎杖苷组中Nrf2、NQO-1和HO-1的蛋白和mRNA表达较标准诱导组显着上调（P<0.05）。在阻断Nrf2/ARE信号通路后,虎杖苷上调细胞中神经标志物蛋白及mRNA表达的作用被抑制,表达水平明显低于虎杖苷组（P<0.05）,免疫荧光实验结果的趋势与之相类似。（2）动物实验中,与SCI组相比,各治疗组中Nrf2的荧光表达强度及Nrf2/ARE信号通路相关蛋白的表达均显着提高（P<0.05）,PD+BMSCs组水平高于其余治疗组（P<0.05）。与 PD+BMSCs 组相比,在阻断 Nrf2/ARE 信号通路后,PD+BMSCs+Bru 组小鼠体内移植BMSCs向神经分化的效率显着降低（P<0.05）,且Nestin、NeuN和NSE的蛋白表达亦明显下调（P<0.05）。4.虎杖苷联合BMSCs移植在脊髓损伤中的疗效探讨在造模后14～28天期间,与其余治疗组相比,PD+BMSCs组小鼠BBB评分及斜板实验临界角度更高（P<0.05）。神经电生理检查表明,治疗后小鼠的SCEP较SCI组有明显恢复（P<0.05）,而PD+BMSCs组波幅更大、潜伏期更短（P<0.05）。组织病理学实验中,PD+BMSCs组小鼠脊髓组织损伤表面积明显小于其余治疗组和SCI组（P<0.05）,HE染色和Niss1染色也表明该组脊髓损伤程度更轻（P<0.05）。与其余脊髓损伤小鼠相比,PD+BMSCs组轴突髓鞘修复及轴突新生相关的指标表达增高（P<0.05）,而胶质瘢痕形成相关的指标则表达降低（P<0.05）。结论:1.在神经诱导分化培养液基础上,虎杖苷呈浓度依赖性地促进BMSCs在体外分化为（胆碱能）神经元样细胞,其中30μmol/1浓度时效果最显着,并且虎杖苷还能促进移植BMSCs在体内向神经元样细胞分化。而上述效应可能是通过Nrf2/ARE通路的激活而实现的。2.虎杖苷灌胃联合BMSCs移植能有效改善脊髓损伤小鼠后肢运动功能障碍,并促进脊髓神经功能恢复,这可能是基于其促进脊髓伤区轴突髓鞘修复,加速轴突新生,并减缓胶质瘢痕对神经纤维生长的遮挡效应而发挥作用的。
唐乙[2]（2012）在《体外诱导小鼠肌源干细胞向类雪旺细胞分化的条件和机制研究》文中提出【研究背景】周围神经损伤是常见的外科疾病，临床医生和科学工作者长期致力于提高外科技术和手术方法以促进周围神经损伤的修复，取得了一定效果，但其术后功能恢复仍不满意。自体神经移植会造成供区感觉、运动功能障碍，且可供移植的神经极其有限；供体神经多细小，与缺损的神经常难以匹配；异体神经移植又面临免疫排斥问题。组织工程学的发展为此提供了一种新的解决途径，其中雪旺细胞是周围神经组织工程中研究较多并且有效的种子细胞，在神经再生中发挥重要的作用。移植的雪旺细胞可在周围神经内存活、增殖、迁移和分化，并分泌多种神经营养因子、细胞黏附分子和细胞外基质，促进轴突的再生和髓鞘形成，从而促进周围神经的修复。但是作为种子细胞，雪旺细胞的分化能力较低，是一种终末期细胞，来源有限，并且存在移植排斥问题，所以需要一种更为年轻化的细胞，通过其诱导分化成为雪旺细胞。已报道成功诱导分化为雪旺细胞的干细胞包括：骨髓间充质千细胞、脂肪源性干细胞、神经干细胞、皮肤源性祖细胞等。但关于肌源干细胞诱导分化为雪旺细胞的研究却鲜有报道。肌源干细胞是新近发现的干细胞，具有较好的自我更新和多分化潜能，可以分化成肌肉细胞、造血细胞、成骨细胞、软骨细胞、内皮细胞、脂肪细胞、肝细胞和神经细胞等。如果能成功诱导肌源干细胞分化为雪旺细胞，将具有组织来源多，获取较容易，对机体损伤相对较小，具有免疫优越性，较容易获取和扩增等优点，能为临床治疗周围神经损伤提供一种新的思路和选择。本课题在应用雪旺细胞条件培养液诱导小鼠肌源干细胞分化为类雪旺细胞的基础上，进一步研究其诱导机制。雪旺细胞能分泌多种神经营养因子，并且与其有密切的相互作用，在周围神经再生中发挥重要作用。因此我们确定以神经营养因子作为研究因素，在成功分离、培养小鼠肌源干细胞，以雪旺细胞条件培养液诱导其分化为类雪旺细胞的基础上，进一步以神经营养因子作为诱导因素，用其体外诱导小鼠肌源干细胞，观察诱导效果，从而进一步明确神经营养因子在小鼠肌源干细胞的诱导和分化中的作用。【目的】（1）掌握小鼠肌源干细胞的分离、纯化、培养及鉴定技术。尤其是利用显微镜和显微手术器械分离获取较纯净的肌肉组织，提高分离纯度，减少组织损伤；摸索并掌握差速贴壁法的贴壁时间，从而提高培养效率；（2）获取小鼠雪旺细胞条件培养液并以其诱导小鼠肌源干细胞，确定其诱导效果；（3）对小鼠雪旺细胞条件培养液中的神经营养因子成分有选择的进行检测，挑选表达较高的神经营养因子作为诱导条件进行研究；（4）神经营养因子诱导小鼠肌源干细胞，观察细胞形态学变化并检测其特异性标记物的表达以确定诱导效果，从而进一步明确小鼠肌源干细胞诱导分化为类雪旺细胞的机制，为肌源干细胞诱导为类雪旺细胞并治疗周围神经损伤提供实验室基础。【方法】（1）显微镜下获取较纯净的新生小鼠骨骼肌肌组织，应用酶消化法和改良的pre-plating差速贴壁法，消化、分离、纯化出小鼠原代肌源干细胞；用台盼蓝染色法鉴定所获小鼠肌源干细胞的活性；倒置相差显微镜下观察历次贴壁细胞和肌源干细胞的细胞形态改变和生长状态；以Sca-1（干细胞表面标记物）和Desmin（肌源性标记物）进行western、免疫组织化学荧光染色及流式细胞检测进行鉴定；（2）显微镜下取小鼠坐骨神经和背根神经节经消化、培养获得小鼠雪旺细胞，并获得小鼠雪旺细胞条件培养液；以小鼠雪旺细胞条件培养液诱导小鼠肌源干细胞，倒置显微镜下观察细胞形态改变，并以S100，GFAP和p75等雪旺细胞表面标记物进行western bolt、免疫组织化学荧光染色及流式细胞学检测进行鉴定；（3）用ELISA方法检测雪旺细胞条件培养液中相关神经营养因子的表达情况，选取表达量相对较高的神经营养因子作为进一步诱导MDSCs向雪旺细胞方向分化的的诱导因子加以研究；（4）将选择的神经营养因子加入干细胞培养液对小鼠肌源干细胞进行体外诱导，倒置显微镜下观察细胞的形态学改变，并以S100，GFAP和p75等雪旺细胞表面标记物进行western blot、免疫组织化学荧光染色及流式细胞学检测进行鉴定。【结果】（1）台盼蓝染色法显示分离、纯化所得小鼠肌源干细胞的活性为95%；倒置显微镜下观察历次贴壁细胞和肌源干细胞的细胞形态和生长状态，发现细胞呈小圆形或短梭形的形态特征，未发生分化，增殖速度快， Sca-1和Desmin的细胞免疫组织化学荧光染色均呈现阳性；流式细胞检测结果亦显示Sca-1和Desmin阳性表达，阳性率分别为93.23±0.93%和94.18±0.38%，双阳性率为90.1±1.28%；（2）小鼠雪旺细胞条件培养液成功诱导小鼠肌源干细胞向类雪旺细胞分化，发现小鼠肌源干细胞诱导72h后细胞形态发生改变，成梭形或条索形，两端有突起形成，成片聚集，诱导后细胞免疫组织化学荧光检测特异性标记物S100的表达，结果显示为阳性；流式细胞检测结果亦显示雪旺细胞特异性标记物S100，GFAP和p75阳性表达，阳性率分别为65.48±6.20%、39.84±1.66%和41.08±0.78%，三阳性率约为25.86±5.37%；（3）用ELISA方法检测小鼠雪旺细胞条件培养液中神经营养因子的表达情况，发现除FGF、GDNF基本检测不到外，神经生长因子（NGF）、脑源性神经生长因子（BDNF）、神经营养素-3（NT-3）、血小板源性生长因（PDGF）、胰岛素样生长因子-2（IGF-2）均有不同量的表达，因此确定以上述有表达的神经营养因子为研究对象；（4）5种NTFs单独诱导小鼠肌源干细胞，结果无作用；尝试5种NTFs两两组合，共10组进行诱导，结果也未发现明显效果；尝试5种NTFs三三组合，共9组进行诱导小鼠肌源干细胞，结果神经营养素-3（NT-3）（500pg/ml）、血小板源性生长因（PDGF）（1000pg/ml）、胰岛素样生长因子-2（IGF-2）（200pg/ml）组成功诱导其分化为类雪旺细胞，其余组无效。诱导72h后小鼠肌源性干细胞细胞形态发生改变，成梭形或条索形，两端有突触形成，成片聚集，分布较散乱；诱导后细胞免疫荧光检查雪旺细胞特异性标记物S100的表达为阳性；流式细胞检测结果亦显示雪旺细胞特异性标记物S100，GFAP和p75阳性表达，阳性率分别为58.64±4.38%、47.38±0.84%和44.33±2.39%；三阳性百分比约为27.89±5.98%。【结论】对传统的pre-plating差速贴壁法加以改良，应用显微外科技术，从小鼠骨骼肌组织中分离、纯化获得活性良好、纯度较高的肌源干细胞；在明确小鼠雪旺细胞条件培养液能成功诱导小鼠肌源干细胞分化为类雪旺细胞的前提下，进一步明确小鼠肌源干细胞分化为类雪旺细胞的分子机制，从而更准确的探讨肌源干细胞的分化条件；为雪旺细胞作为种子细胞提供更广阔的选择空间；为周围神经损伤修复的临床治疗和实验室研究提供更多的参考。
许世刚[3]（2010）在《左归丸体外诱导MSCs分化及移植治疗鼠痉挛型脑瘫的研究》文中研究指明研究目的婴幼儿期是脑组织发育的关键时期,采取有效措施促进脑组织发育,修复脑组织缺损才能从根本上治愈脑瘫。本实验利用补肾益髓中药左归丸和鼠神经生长因子干预骨髓间充质干细胞体外分化,提高神经干细胞转化率,探索脑瘫早期治疗的新途径和补肾益髓中药作用机制。研究方法实验一：大鼠MSCs提取和体外培养扩增的研究。本研究采用密度梯度离心法分离培养鼠MSCs。实验二：左归丸和mNGF对鼠MSCs体外诱导分化的影响。诱导分化阶段按照干预因素不同分组如下：对照组,MSCs组,mNGF组和MSCs+mNGF组。各干预组均按照不同剂量设置多个样本,分化完成后进行转化率统计和免疫组化检测NSCs标志蛋白,确认NSCs属性。实验三：大鼠脑瘫偏瘫模型制作和行为学评估。采取直流电毁坏单侧锥体束方法,共55只SD大鼠,分4组。每组12只,7只备用。实验四：选择实验二各组最优转化结果获得的NSCs植入偏瘫模型大鼠脑部损害区进行疗效观察研究。分组同实验二。分批于0,1,2,4,6进行BBB运动行为评估和处死取脑组织行HE染色,观察脑损害区修复和神经元分裂增殖情况。研究结果实验一：MSCs易于体外扩增,传代细胞4-5d可增殖1倍,培养细胞可稳定生长传代,具有较强的自我更新和多系分化能力。流式细胞仪分析细胞表面抗原,结果表明本实验中分离扩增的MSCs具有均一的细胞表型,表明细胞纯度较高、生物学特性稳定；MSCs作为组织工程的种子细胞具有极大的潜力。实验二：诱导分化阶段按照干预因素不同分组如下对照组（单纯MSCs培养）,左归丸组,mNGF组和左归丸+mNGF组。不使用DMSO,β-巯基乙醇等化学合成抗氧化剂。分化完成后检测NSCs标志蛋白,确认NSCs属性。体外分组干预试验显示左归丸有促进MSCs转化为NSCs作用,但不及mNGF影响明显,二者同时应用则强于单纯使用mNGF干预,说明有协同作用,且分化的神经细胞中胶质细胞少。实验三：大鼠痉挛性脑瘫模型的制作。大鼠痉挛型脑瘫偏瘫模型制备采取直流电毁坏SD大鼠单侧锥体束方法,能够使大鼠出现脑瘫偏瘫型运动障碍,模型可靠稳定。本实验结束时7只死亡,共获得48只偏瘫模型大鼠。实验四：NSCs植入痉挛型脑瘫大鼠模型在体观察。分组同实验二。对照组手术时只进行露骨钻孔,微量注射器插入,不加MSCs或任何干预药物。各实验组用微量注射器缓慢注入实验二诱导后获得的NSCs。动物实验证实,NSCs移植治疗脑瘫和脑损伤可明显改善肢体功能。脑组织切片观察到神经元分裂增殖和修复现象。BBB运动行为评估表明移植后3周实验组后肢运动评分逐步提高,对照组无明显改变。对照组与其余三组在NSCs植入后7d无显着差异（p>0.05）。其后各时间点对照组与其余三组间有显着差异（p<0.01）。左归丸组、mNGF组之间比较无显着差别（p>0.05）,左归丸+mNGF组与左归丸组、mNGF组之间有显着差异（p<0.01）。实验表明左归丸能够促进MSCs转化为NSCs,结合其它多项补益类中药类似结果,说明补肾益髓中药与干细胞有着密切联系,“肾精与髓”很有可能就是具有多项分化潜能的干细胞。通过补肾益髓激活干细胞,进而分化为具有特定机能的细胞群,修复凋亡的细胞组织,满足机体需要,改善机体功能。我们期待经过进一步深入研究,特别是能够应用灵长类动物模型进行实验,成功后将干细胞治疗技术应用于脑瘫临床,造福广大患者。本课题在深入文献研究的基础上,针对脑瘫治疗中的难题,选择中药干预MSCs体外定向诱导分化及移植治疗鼠痉挛型脑瘫作为突破口,发挥中医药补肾益髓理论优势,积极探讨脑瘫早期治疗的新途径,探索补肾益髓理论的作用机制和细胞学基础。结论●大鼠MSCs易于获得,体外扩增快。在不使用抗氧化剂的情况下左归丸对MSCs体外诱导分化有明显促进作用；●本研究首次应用mNGF干预MSCs分化,证实mNGF能够促进MSCs的分化和NSCs成熟,左归丸+mNGF同时干预MSCs分化效果最好；●在体移植实验表明MSCs诱导获得的NSCs能够部分修复脑组织缺损,移植3周后大鼠脑瘫模型运动功能逐步改善。
沈凌[4]（2010）在《黄芪对低氧环境下血管内皮细胞生长因子/基质细胞衍生因子-1诱导人骨髓间充质干细胞分化、迁移的干预作用的研究》文中认为目的自体骨髓干细胞移植是将外周血或骨髓中的干细胞移植到缺血的肢体肌肉或闭塞的血管中,使其分化、形成新生毛细血管,改善甚至恢复下肢血流以达到治疗下肢缺血的目的。如何在下肢缺血缺氧的环境中,提高干细胞向VECs分化和迁移能力,成为研究的重点。目前以黄芪为代表的益气活血中药在中西医结合治疗下肢PAOD方面,发挥了重要作用。本研究模拟人体内低氧环境,研究黄芪和VEGF、SDF-1重要细胞因子对hBMSCs向VECs分化及迁移能力的影响,探讨中药干预的主要靶点、作用时机等关键因素,为临床运用提供科学依据。方法1黄芪对低氧环境下VEGF诱导hBMSCs分化的干预作用的研究随机将hBMSCs分为七组,分别为VEGF+常氧组、黄芪+常氧组、VEGF+黄芪+常氧组、低氧对照组、VEGF+低氧组、黄芪+低氧组、VEGF+黄芪+低氧组。将常氧三组置于普通C02细胞培养箱（21%02）中；低氧四组置于三气培养箱（5%O2）中培养。培养7天后,免疫细胞化学法检测CD34、CD31、vWF、VEGFR-2. HIF-la标记物。2 AMI对低氧条件下SDF-1诱导hBMSCs迁移的干预作用的研究随机分为7组,分别为SDF+常氧组、黄芪+常氧组、SDF+黄芪+常氧组、低氧对照组、SDF+低氧组、黄芪+低氧组、SDF+黄芪+低氧组共七组。将hBMSCs细胞悬液放入Transwell系统的上室,将含不同药物的细胞培养液加入到Transwell系统的下室中。将常氧三组Transwell系统置于普通CO2细胞培养箱（21%02）中；低氧四组Transwell系统置于三气培养箱（5%O2）中培养。培养48h后,取上室,酒精棉球擦掉上室膜上未迁移的细胞,95%酒精固定10min,苏木素染色5min,随机选择3个连续显微镜视野（×200）计数迁移到上室膜下的细胞,取平均数。结果1黄芪对低氧条件下VEGF诱导hBMSCs分化的干预作用的研究（1）CD34阳性率（%）1)在常氧培养三组中,VEGF+黄芪+常氧组与其他两组相比较,显着升高（p<0.01,p<0.05）。2)在低氧培养四组中,VEGF+黄芪+低氧组与其他三组相比较,显着升高（p<0.01,p<0.05）；低氧对照组与其他三组相比较,显着降低（p<0.01）。3)常氧和低氧相对应组间比较,低氧各组显着升高（p<0.01）。（2）CD31阳性率（%）1)在常氧培养三组中,VEGF+黄芪+常氧组与其他两组相比较,显着升高（p<0.01）。2)在低氧培养四组中,VEGF+黄芪+低氧组组与其他三组相比较,显着升高（p<0.01）；低氧对照组组与其他三组相比较,显着降低（p<0.01,p<0.05）。3)常氧和低氧相对应组间比较,低氧各组显着升高（p<0.01,p<0.05）（3）vWF阳性率（%）1)在常氧培养三组中,VEGF+黄芪+常氧组与其他两组相比较,显着升高（p<0.01）。2)在低氧培养四组中,VEGF+黄芪+低氧组与其他三组相比较,显着升高（p<0.01）；低氧对照组组与其他三组相比较,显着降低（p<0.01）。3)常氧和低氧相对应组间比较,低氧各组显着升高（p<0.01）。（4） VEGFR-2阳性率（%）1)在常氧培养三组中,VEGF+黄芪+常氧组与其他两组相比较,显着升高（p<0.01）。2)在低氧培养四组中,VEGF+黄芪+低氧组与其他三组相比较,显着升高（p<0.01）；低氧对照组与其他三组相比较,显着升高（p<0.01）。3)与VEGF+常氧组相比较,VEGF+低氧组显着升高（p<0.05）；与黄芪+常氧组相比较,黄芪+低氧组显着升高（p<0.01）；VEGF+黄芪+常氧组与VEGF+黄芪+低氧组组间无统计学意义（p>0.05）。（5）HIF-1α阳性率（%）1)在常氧培养三组中,各组间无统计学意义（p>0.05）。2)在低氧培养四组中,各组间无统计学意义（p>0.05）。3)常氧和低氧相对应组间比较,低氧各组显着升高（p<0.01）。2黄芪对低氧条件下SDF-1诱导hBMSCs迁移的干预作用的研究（1）在常氧培养三组中,SDF+黄芪+常氧组与其他两组相比较,显着升高（p<0.01,p<0.05）。（2）在低氧培养四组中,SDF+黄芪+低氧组与其他三组相比较,显着升高（p<.01）；与SDF+低氧组相比较,低氧对照组显着升高（p<0.01）；低氧对照组与黄芪+低氧组无统计学意义（p>0.05）。（3）与SDF+黄芪+常氧组相比较,SDF+黄芪+低氧组组间显着升高（p<0.05）；SDF+常氧组与SDF+低氧组、黄芪+常氧组与黄芪+低氧组组间无统计学意义（p>0.05）。结论1低氧环境下黄芪可能对BMSCs向VECs分化有促进作用,可能与对HIF-1α和VEGF的影响有关。2在常氧和低氧环境中黄芪与SDF-1联合使用可促进BMSCs迁移：而在低氧环境中,单独应用黄芪没有明显的促进作用。
高博[5]（2009）在《生长因子诱导骨髓基质干细胞向胆碱能神经元分化及其信号转导机制研究》文中研究表明近年来,对骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells, BMSCs）可塑性的研究进展迅速,BMSCs能够分化形成包括造血组织在内的多种组织细胞,特别是中胚层和神经外胚层来源的组织细胞,如骨、软骨、脂肪、纤维组织、上皮组织和骨髓支持基质等多种间充质组织,使人们看到了用细胞移植方法治疗神经退行性疾病的新希望。2000年Brazelton和Mezey异体移植BMSCs成功,其后才证明BMSCs可向神经细胞分化,近年来对BMSCs的促分化因子进行了大量的研究,β-巯基乙醇（beta-mercaptoethanol, BME）、二甲基亚砜（dimethylsulfoxide, DMSO）、4-羟基茴香醚（butylated hydroxyanisole, BHA）、五氮杂胞苷（5-azacytidine）、维甲酸（retinoic acid, RA）等相继被证实可以诱导BMSCs分化为神经元样细胞。一些生长因子如表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）、脑源性神经营养因子（Brain derived neurotrophic factor, BDNF）,和视黄酸、胎鼠中脑或纹状体细胞悬液共同作用后,在体外也成功诱导成年大鼠和人的BMSCs分化为幼稚的神经元和胶质细胞。BMSCs还可被诱导分化为特征类型的神经元,如5-HT敏感神经元,多巴胺能神经元,但胆碱能神经元的分化一直是个难题。BMSCs分化为神经细胞的机制十分复杂,除了表达中胚层mRNA以外,还表达生殖细胞以及内、外胚层基因。其向神经元的分化受神经特异性基因表达量的调控,而并非由相应基因表达的开放与关闭控制。Sox、Pax、Notch、delta、frizzled、erbB基因以及RB、RB2/P130基因在BMSCs分化中起重要作用,最新研究表明其分化和MAPK信号通路有关。虽然有关BMSCs分化为神经元的研究进展迅速,但仍有很多问题未得到解决:首先,诱导骨髓基质干细胞分化为神经元的方案中,都存在一些缺陷,如由于化学诱导剂的毒性而不适合临床应用,某些生长因子虽然能诱导分化,但不能定向分化为特定类型等。虽然诱导BMSCs分化为多巴胺能神经元和5-HT敏感神经元已经成功,但向胆碱能神经元的分化至今未见报道。其次,诱导分化的机理研究尚不充分,尤其是分化信号的转导过程不明。以往的研究提示,在不同的细胞类型中,同一个信号传递过程可能表现出截然相反的结果,尤其是PI3K-Akt-mTOR通路和MAPK通路在BMSCs向神经元分化过程中的作用,仅见两篇报道。另外,细胞分化过程涉及到结构重建、细胞器重组、凋亡和自噬等复杂的过程,但与BMSCs向神经分化相关的自噬研究尚属空白,针对上述问题,本课题开展了一系列的研究。研究目的:筛选建立生长因子体外诱导BMSCs分化为胆碱能神经元的有效方法;通过采用特异性抑制剂,观察生长因子诱导BMSCs向胆碱能神经元分化的分化率和生存率的变化;通过检测PI3K-Akt-mTOR通路和MAPK通路蛋白以及p53表达和自噬水平的改变,初步阐明生长因子诱导BMSCs分化的信号转导机制。研究方法:（1）建立BMSCs培养和扩增方法,用不同浓度NGF诱导BMSCs分化,光镜观察分化细胞情况,从中筛选出合适的浓度;用NGF、NGF+bFGF和NGF+EGF+bFGF三种处理方式诱导BMSCs,光镜观察分化情况,免疫荧光鉴定MAP-2表达,以筛选有效组合;（2）用LY294002抑制PI3K活性,光镜观察其对生长因子诱导分化的影响,免疫荧光鉴定MAP-2和ChAT表达并计算ChAT阳性细胞率,MTT法测定分化细胞死亡率;（3）Western blot检测生长因子单独诱导、LY294002单独作用和两者共同作用时Akt、ERK激活的变化,p53表达量的变化,以及Cathepsin-B、LC3检测自噬水平,结合ChAT阳性细胞率,细胞生存率的结果,分析诱导分化的信号传导机制。实验结果:（1）NGF 100 ng/mL有很好的诱导分化作用,NGF+EGF+bFGF联合应用能诱导BMSCs分化为ChAT阳性神经细胞,分化率达6070%。ChAT阳性细胞率有一定的时间相关性,诱导后3 h、5 h明显高于1 h,但3 h后阳性率不再升高（P>0.05,与5 h相比）;单纯抑制PI3K（LY294002组）也能诱导BMSCs分化为ChAT阳性细胞,然而其阳性细胞率在每一个时间点都明显低于生长因子诱导组;在生长因子与LY294002联合处理组,ChAT阳性细胞率明显高于单纯生长因子组。（2）生长因子诱导BMSCs分化为ChAT阳性神经元后,随着时间延长细胞生存率并无明显下降,PI3K抑制使分化细胞大量死亡,生存率降低,并明显抑制生长因子诱导BMSCs分化的胆碱能神经元的生存率。（3）生长因子诱导BMSCs分化后,Akt磷酸化蛋白显着增多并持续至5 h;抑制PI3K活性后,Akt有一定的磷酸化激活,但5 h后显着下降,与对照组相比已无差别。LY294002阻断PI3K活性后,生长因子对Akt的磷酸化水平在处理后1 h没有明显改变,3 h后磷酸化水平明显增高,至5 h后仍然维持在高水平。（4）生长因子诱导后1 h ERK1/2明显激活,显着高于对照组,3 h和5 h后明显下降,PI3K抑制可明显阻滞ERK1/2的激活,但与生长因子联合作用后1 h,可增加ERK1/2的水平,3h、5h则明显低于未抑制组。（5）生长因子诱导分化后,p53表达上调,PI3K抑制后p53表达量进一步增加,同时生长因子可明显降低BMSCs诱导分化后的自噬水平,并与PI3K抑制有协同作用。结论:1.首次发现NGF、EGF和bFGF联合处理可有效诱导BMSCs分化为ChAT阳性的胆碱能神经元。2.生长因子通过激活Akt诱导BMSCs分化为胆碱能神经元,Akt激活需至一定水平才能诱导分化,存在一个“诱导阈值”。3. ERK1/2的激活是分化细胞生存的重要条件之一,高度激活的Akt诱导信号可引起ERK1/2的激活抑制,从而降低分化细胞的生存率,两者之间的平衡可维持分化神经元的高生存率。4. p53表达上调不是降低由BMSCs分化的胆碱能神经元生存率的主要因素,但可以协同ERK1/2激活抑制所致的分化细胞的生存率降低。自噬可能不参与诱导BMSCs向胆碱能神经元的分化过程。
胡向阳[6]（2008）在《丹参、藜芦对大鼠MSCs分化为神经元样细胞及SMNmRNA表达的影响》文中提出目的:体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）,研究MSCs生物学特性。观察丹参、藜芦水煎液诱导MSCs向神经元样细胞分化的作用,研究丹参、藜芦水煎液对分化后神经元样细胞SMNmRNA表达的影响;并采用血清药理学方法,研究丹参、藜芦含药血清诱导MSCs分化为神经元样细胞的作用。探索提高MSCs向神经元样细胞分化和上调分化后神经元样细胞SMNmRNA表达的干预因素,为进行神经元样细胞移植治疗脊髓。性肌萎缩症提供基础。方法:1.采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs;通过形态学观察、绘制生长曲线、流式细胞仪进行MSCs表面抗原鉴定和检测MSCs生长周期来鉴定MSCs;建立体外培养的稳定MSCs细胞株系。2.观察丹参、藜芦水煎液诱导MSCs向神经元样细胞分化的作用,免疫组化法检测神经元样细胞Nestin、NSE、GFAP,摸索β-巯基乙醇、丹参水煎液、藜芦水煎液、丹参+藜芦水煎液的最佳诱导浓度,观察各组最佳浓度诱导MSCs向神经元样细胞分化的作用。3.观察丹参、藜芦水煎液对分化后神经元样细胞SMNmRNA表达的影响,FQ-PCR法检测空白组、β-巯基乙醇诱导组、丹参水煎液组、藜芦丹参水煎液组、丹参+藜芦水煎液组对分化后神经元样细胞SMNmRNA表达的影响。4.观察丹参、藜芦含药血清诱导MSCs向神经元样细胞分化的作用,免疫组化法检测神经元样细胞Nestin、NSE、GFAP,摸索丹参含药血清、藜芦含药血清、丹参+藜芦含药血清的最佳诱导浓度,观察各组最佳浓度诱导MSCs向神经元样细胞分化的作用。结果:1.全骨髓贴壁法分离培养的MSCs具有均质性好、增殖活力强、传代生长快的特点。本实验培养的MSCs经流式细胞仪检测,表达整合素家族成员的CD29和粘附分子CD44,不表达泛白细胞标志CD45;MSCs处于G0-G1期的细胞为87.63%,G2-M期的细胞为3.57%,S期的细胞为8.80%:生长曲线均呈S形,接种1-3 d细胞的OD值变化不大,到第3 d细胞数目明显增加,第8 d到达顶点,之后减少;证实已成功建立稳定的MSCs株系。2.β-巯基乙醇、丹参水煎液、藜芦水煎液和丹参+藜芦水煎液最佳诱导MSCs向神经元样细胞分化浓度分别是β-巯基乙醇1mmol/L的无血清L-DMEM培养液、丹参水煎液120μl/ml10%胎牛血清L-DMEM培养液、藜芦水煎液140μl/ml 10%胎牛血清L-DMEM培养液和丹参+藜芦80μl/ml 10%胎牛血清L-DMEM培养液。空白组Nestin、NSE和GFAP表达均为阴性。丹参+藜芦水煎液组Ncstin阳性细胞率高于β-巯基乙醇组,P＜0.01;丹参+藜芦水煎液组NSE阳性细胞率高于β-巯基乙醇诱导组,P＜0.05;丹参+藜芦水煎液组Nestin、NSE阳性细胞率分别高于丹参水煎液和藜芦水煎液,P＜0.05;各实验组GFAP表达均为阴性。3.β-巯基乙醇组、丹参水煎液组、藜芦水煎液组、丹参+藜芦水煎液组分化后神经元样细胞SMNmRNA表达丰度值均高于空白组,P＜0.01;丹参+藜芦水煎液组SMNmRNA表达丰度值高于β-巯基乙醇组,P＜0.05:丹参+藜芦水煎液组SMNmRNA表达丰度值高于丹参水煎液组、藜芦水煎液组,P＜0.01;β-巯基乙醇组SMNmRNA表达丰度值高于丹参水煎液组、藜芦水煎液组,P＜0.05。4.丹参含药血清组、藜芦含药血清和丹参+藜芦含药血清最佳诱导MSCs向神经元样细胞分化浓度分别是丹参含药血清20μl/ml 10%胎牛血清L-DMEM培养液、藜芦含药血清25μl/ml 10%胎牛血清L-DMEM培养液和丹参+藜芦含药血清15μl/ml 10%胎牛血清L-DMEM培养液。空白组Ncstin、NSE和GFAP表达均为阴性。丹参+藜芦含药血清诱导组Nestin阳性细胞率高于β-巯基乙醇诱导组,P＜0.05;丹参+藜芦诱导组NSE阳性细胞率高于β-巯基乙醇诱导组,P＜0.01;各实验组GFAP表达均为阴性。结论:1.运用全骨髓贴壁法,可以建立体外稳定培养的MSCs株系。2.丹参水煎液、丹参+藜芦水煎液可以诱导体外培养的MSCs向神经元样细胞分化,藜芦水煎液诱导MSCs向神经元样细胞分化作用不明显,丹参+藜芦水煎液诱导MSCs向神经元.样细胞分化作用高于其它诱导组,MSCs没有诱导因素的作用不会向神经元样细胞分化。3.丹参、藜芦水煎液可以促进分化后神经元样细胞表达SMNmRNA,丹参+藜芦水煎液对神经元样细胞SMNmRNA表达作用强于丹参水煎液或藜芦水煎液,分化后的神经元样细胞在丹参+藜芦水煎液干预下有向运动神经元细胞进一步分化的趋向。4.丹参+藜芦含药血清组促MSCs向神经元样细胞分化作用弱于丹参+藜芦水煎液组,原因可能是丹参+藜芦组水煎液经过大鼠机体代谢,含药血清中促MSCs向神经元样细胞分化作用的有效组份（群）降低所致。
刘敬霞[7]（2007）在《脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经细胞再生的影响》文中研究表明背景与目的缺血性脑血管疾病的高致残率严重影响患者的生存质量，脑缺血损伤引起的神经元结构破坏和缺失是引起功能障碍的病理关键。针对脑缺血损伤引起的生化、代谢改变，保护神经元免于受损，或促进脑缺血损伤后神经细胞再生成为干预损伤、恢复功能的重要策略。目前药物性的神经保护研究和临床应用仍欠理想。骨髓间充质干细胞（bone marrow stromal stem cells，BMSCs）具有较强的增殖能力和多向分化潜能，可以分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞等神经细胞，成为脑缺血损伤后神经细胞再生理想的种子来源。鉴于骨髓间充质干细胞体外诱导剂的毒副作用和体外分化后移植脑内较弱的存活能力，近年来，对体外纯化、扩增培养的骨髓间充质干细胞移植脑内以治疗脑缺血损伤成为研究的热点。因此，开展骨髓间充质干细胞移植在神经细胞再生和神经功能修复方面的研究对脑缺血损伤具有重要意义。近年来渐有中医药在骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤的报道，但研究多集中于对其体外的诱导分化方面，所选药物以单味中药或提取物为主，而中药复方对BMSCs移植后在活体内影响其存活、分化方面的研究少见。脑梗死属中医“中风”范畴，其病机复杂，以浊毒、血瘀和气虚表现尤为突出：气虚血瘀、毒损脑络为脑梗死的主要病机。解毒降浊、益气化瘀为脑梗死的主要治法。据此研制的中药复方脑脉通（大黄川芎人参葛根）具有解毒降浊、益气活血通络功效，可对脑缺血损伤发挥保护作用。动物实验和临床观察表明，脑脉通治疗脑梗死的效果肯定，可显着改善患者的生存质量。鉴于上述，开展中医药联合骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤研究具有重要意义。本研究从脑缺血再灌注大鼠神经细胞再生方面评价脑脉通、BMSCs移植及其联合的脑保护作用，并从脑脉通对BMSCs移植后脑组织神经营养因子水平、向神经细胞分化的比率及对促神经元突触重建的生长相关蛋白表达的影响方面探讨其可能的作用机制。方法本研究以SD大鼠为研究对象，体外全骨髓贴壁筛选培养法获取骨髓间充质干细胞；移植前48 h用Brdu对骨髓间充质干细胞进行体外标记；栓线阻塞大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血再灌注动物模型；脑缺血3 h再灌注24 h由颈内动脉移植骨髓间充质干细胞悬液。动态观察移植后早期（7 d）、中期（14 d）、后期（28 d）大鼠的神经功能和生存状况变化；采用病理形态学、免疫组织化学法以及免疫组织化学双标法，从神经功能综合评分、脑组织含水量、脑梗塞灶、神经细胞超微结构变化方面观察脑脉通对骨髓间充质干细胞移植保护脑缺血损伤的影响；从神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白以及与之相关的神经营养因子表达的变化方面探讨脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对神经细胞的保护作用及可能的作用机制；观察骨髓间充质干细胞移植后在脑内的存活、迁移和分化特点以及脑脉通对其的影响；进一步从神经元突触标志性蛋白表达的变化方面观察骨髓间充质干细胞移植后对神经元突触重建的作用以及脑脉通对其作用的影响。主要研究结果如下：结果1．脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用1．1体外全骨髓贴壁筛选培养法纯化骨髓的效果理想，可在短期内获取移植所需的骨髓间充质干细胞；颈动脉移植骨髓间充质干细胞操作易行，细胞悬液少有外漏，移植途径可取。1．2脑缺血再灌注损伤后大鼠体重变化呈现由减轻到增加的趋势，且体重的变化与大鼠全身状况一致；大鼠神经功能随脑缺血再灌注时间的延长逐渐恢复；脑组织水肿程度、梗塞灶的大小及神经细胞超微结构的改变随脑缺血再灌注时间的延长出现由加重到减轻的改变。1．3骨髓间充质干细胞由颈内动脉移植对脑缺血损伤的保护作用与其移植脑内后的时间相关，BMSCs移植后早期未显出明显的保护作用；移植中期的神经功能恢复，脑组织水肿、梗塞灶大小和神经细胞超微结构有改善趋势；移植后期的神经功能恢复和神经细胞超微结构的改善明显。1．4脑脉通对脑缺血再灌注损伤不同时间的均有不同程度的改善作用；BMSCs移植联合脑脉通对脑缺血再灌注损伤的保护作用较单纯BMSCs移植的作用提前，联合应用对神经功能的修复和对神经细胞病理损伤的改善作用明显增强，且随移植后BMSCs在脑内时间的延长，联合应用的保护作用更为显着。2脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞再生及神经营养因子的影响2．1随着脑缺血再灌注时间的延长，脑组织神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白的表达减弱；神经生长因子和胶质源性神经营养因子的变化随脑缺血再灌注时间的延长呈现先增高再降低特点。2．2 BMSCs移植后早期神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白无明显增高；随BMSCs移植脑内时间的延长，神经元和神经胶质细胞特异性标志蛋白的表达增强，其中神经元特异性烯醇化酶的增强较胶质纤维酸性蛋白明显，以移植后期的增强更为显着。BMSCs移植后早期对神经生长因子和胶质源性神经营养因子的水平变化无明显影响，随移植后时间的延长，其上调神经营养因子的作用增强。2．3脑脉通联合BMSCs移植后早期神经元特异性烯醇化酶的表达较单纯移植组增强；联合组后期的神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达均有增强。脑脉通联合BMSCs可明显提高移植中期胶质源性神经营养因子水平，并使移植后期神经生长因子的表达明显增强。3．脑脉通对脑缺血再灌注损伤大鼠骨髓间充质干细胞移植后向神经细胞分化的影响3．1 BMSCs移植后在脑实质内和血管腔内的分布比例随移植后时间的延长而增加。移植后早期，大多BMSCs位于血管腔内，黏附血管内皮呈丛簇样聚集，脑实质内有少量散在的BMSCs，分布未见明显规律；移植后中期，BMSCs大多从血管壁通过血脑屏障进入脑实质内，并向缺血侧部位迁移，血管腔内可见到少数标记的BMSCs；移植后期，血管腔内未见Brdu细胞，存活的BMSCs全部由血管进入脑实质，并迁移至缺血侧，对侧少有Brdu细胞；联合脑脉通可使OBMSCs移植后在脑实质内存活的数量明显增多，但脑实质和血管腔内BMSCs的比例及进入脑实质后的迁移方向未见明显改变。3．2 BMSCs移植后向神经细胞的分化随植入时间的延长出现分化率和分化方向的改变。BMSCs移植后早期在脑实质内的分化率低，未显示出分化方向的差异性；移植后中期的分化率明显增高，以向神经胶质细胞的分化明显；移植后期，BMSCs向神经元细胞的分化明显增强，而向神经胶质细胞的分化相对减弱；脑脉通对BMSCs移植后不同阶段在促进BMSCs向神经细胞分化方面的作用具有差异性，表现为在移植中期促进神经胶质细胞分化，而移植后期则使BMSCs向神经元方向的分化增强。4．脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤神经元突触重建的影响4．1脑缺血再灌注损伤后神经元结构破坏，神经丝排列紊乱，变短，数量减少，稀疏，分布不均匀，且随脑缺血再灌注时间的延长而加重；促进受损后神经元突触重建的生长相关蛋白-43和标志神经元突触重建的蛋白表达减弱，且随脑缺血再灌注时间的延长呈现递减趋势。脑脉通对脑缺血再灌注早期的神经元结构受损具有保护作用，神经元突触素蛋白的表达增强，但对生长相关蛋白-43的表达无显着影响。4．2 BMSCs移植后早期对神经元结构受损未显出明显的保护作用；移植后中期，神经元突触重建特异性标志蛋白显示增加趋势；移植后期神经丝蛋白、促突触重建的生长相关蛋白-43和神经元突触素蛋白的表达增强。BMSCs对脑缺血再灌注损伤神经元突触重建的促进作用与移植脑内存活的时间相关，该作用随移植后时间的延长而增强。4．3脑脉通联合BMSCs移植可使早期神经丝蛋白表达增强、神经元结构破坏减轻；神经生长相关蛋白-43的表达提前，并增强其后期的表达；移植后期神经元突触素蛋白的表达增强。结论综合上述研究，结果提示，①体外全骨髓贴壁筛选纯化、培养和扩增BMSCs的方法可行，Brdu标记BMSCs的效果理想，由颈内动脉移植BMSCs悬液易于操作，移植后的BMSCs可在脑内存活、迁移，对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。②脑缺血再灌注损伤后神经功能、脑组织水肿、梗塞灶大小和神经细胞超微结构改变可随脑缺血再灌注时间延长有不同程度恢复；脑脉通对脑缺血再灌注损伤不同阶段具有不同程度的保护作用，以早期的作用明显；BMSCs对脑缺血再灌注损伤的保护作用与其移植后的时间相关，移植后早期未显出明显的脑保护作用，但随着BMSCs移植脑内时间的延长，其保护作用逐渐增强。③神经细胞随脑缺血再灌注损伤时间的延长持续受损、数量减少，神经营养因子出现先增高再降低特点，其在早期的升高对神经细胞受损具有保护作用，后期水平降低则不利于神经细胞的再生和修复；脑脉通对神经细胞的保护作用与其早期和中期上调胶质源性神经营养因子、后期上调神经生长因子表达有关；BMSCs移植对保护神经细胞和上调神经营养因子表达的作用随移植后时间的延长而增强；脑脉通联合BMSCs移植可使其对神经细胞的保护作用提前，并使后期的作用增强，以对神经元的作用尤为明显，这可能与脑脉通促进BMSCs移植后上调神经营养因子表达的作用有关。④随移植后时间的延长，BMSCs逐渐从血管壁通过血脑屏障进入脑实质内存活、向缺血侧迁移，出现神经细胞分化，但未显示出分化方向的差异性；脑脉通可使移植后BMSCs在脑内的存活增强，并在促进其向神经细胞分化方面显示出差异性，表现为促进中期BMSCs向神经胶质细胞分化和后期向神经元细胞分化。⑤神经元突触重塑是其结构重建与功能修复的基础，神经元突触重塑功能随脑缺血再灌注时间的延长有减弱趋势，这可能与促进神经元突触重建生长相关蛋白的表达下调有关；脑脉通在脑缺血再灌注早期可保护神经元结构受损，后期可增强神经元突触重建；BMSCs对神经元突触重建作用随移植后时间的延长逐渐增强；脑脉通联合BMSCs可使脑缺血再灌注损伤后早期神经元突触重建提前，并可增强中期与后期的神经元突触重建，其作用可能是通过上调促神经元突触重建的生长相关蛋白-43的表达实现。因此认为，脑脉通联合BMSCs移植对脑缺血再灌注神经细胞再生具有促进作用，其作用与脑脉通使BMSCs移植后上调神经营养因子、促进向神经细胞分化及增强促神经元突触重建的生长相关蛋白表达的作用在早期提前和在后期增强有关。研究可为BMSCs移植治疗脑缺血损伤以及相关领域中药的深入研究提供科学依据，并对进一步中医药学及其与细胞治疗学应用的研究具有重要价值。
张力[8]（2007）在《电针和BMSC移植联合应用对脊髓损伤再生修复的基因调控机制研究》文中认为目的：探索电针促进骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）分化为神经细胞的可行性；通过把现代BMSC移植技术与传统针刺疗法相结合，为临床中枢神经系统疾病的治疗及损伤修复开创一种新型、安全、有效的治疗方法，并揭示其基因调控机制。实验动物：SD健康幼鼠8只，体重约100g左右，雌雄不限，用来进行BMSCs原代培养。SD健康成年大鼠81只，体重250±20g，雌雄不限，随机分为五组：（1）假手术组：9只，仅咬除T11、12棘突和椎板；（2） PBS组：18只，脊髓ALLEN’S打击伤后在损伤临近区注射PBS；（3） BMSC组：18只，脊髓ALLEN’S打击伤后在损伤临近区注射5-溴脱氧核苷尿嘧啶（BrdU）标记的BMSCs；（4）电针组：18只，脊髓ALLEN’S打击伤后24h进行电针治疗；（5）电针BMSC组（电针与BMSC移植联合应用）：18只，受损脊髓移植BrdU标记过的BMSCs后24h进行电针治疗；以上各组分为移植后3d、7d、14d三个时相点。实验方法：1．体外分离培养BMSCs，镜下进行细胞形态学观察；2．移植后3天、7天、14天，应用CBS评分法评价治疗前后损伤大鼠神经功能改善状况。3．应用光镜观察损伤脊髓组织形态学变化；应用免疫组化技术检测BrdU标记的BMSCs在体内存活情况。4．于移植后第14天应用免疫组化技术检测BrdU标记的BMSCs的神经元烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达情况。5．移植后3天、7天、14天，应用原位杂交方法检测损伤大鼠脊髓BDNF、NGFmRNA表达变化情况。结果：1．BMSCs的原代和传代培养：原代细胞呈集落趋势贴壁生长，分布不均匀。接种10天左右，细胞融合达90％以上，此时进行传代培养。传代后细胞增殖迅速，7天左右细胞即融合。传代后的细胞生长均匀，大部分呈长梭形。2．各时相点的各组动物神经功能均有不同程度的恢复。BMSC组、电针组与PBS组比较神经功能评分有显着性差异（P＜0.05）；电针BMSC组与PBS组比较有非常显着性差异（P＜0.01）；而电针BMSC组与单纯BMSC组和单纯电针组比较，神经功能恢复的更好，评分亦有显着性差异（P＜0.05）；而BMSC组和电针组比较无显着性差异（P＞0.05）。3．BMSC组、电针组损伤区的脊髓结构与PBS组相比，相对较完整，而电针BMSC组的脊髓结构明显优于单纯BMSC组和单纯电针组；进行了BMSCs移植的组织内可见BrdU标记的细胞在损伤区及其周边区明显聚集并存活。4．BMSCs移植14d后，BrdU标记的阳性细胞表达NSE和GFAP的百分率分别为：BMSC组为7.2％和1.5％；电针BMSC组为7.9％和2.1％。5．BMSC组与电针组损伤脊髓BDNF、NGFmRNA表达较PBS组有明显增加（P＜0.05）；电针BMSC组较PBS组表达增加更为明显（P＜0.01）；电针BMSC组与单纯BMSC组和单纯电针组比较BDNF、NGFmRNA的表达亦有明显增加（P＜0.05）；电针组与BMSC组比较无显着性差异（P＞0.05）。结论：BMSCs移植后可在宿主体内存活并分化为神经细胞；电针可以促进骨髓基质细胞分化为神经细胞；电针与骨髓基质细胞移植联合应用可以明显促进脊髓损伤大鼠的运动及感觉功能恢复；电针与骨髓基质细胞移植联合应用，可以改变脊髓损伤区的微环境，上调损伤脊髓局部的BDNF、NGFmRNA的表达，这可能是减少脊髓继发性损伤，促进损伤大鼠脊髓结构修复及其功能恢复的机制之一。
李春雨[9]（2007）在《电针并BMSCs移植对大鼠脊髓损伤组织NGFmRNA表达的影响》文中研究表明目的：本研究的目的是探索电针促进骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）分化为神经细胞的可行性；通过观察电针联合BMSCs移植对大鼠急性脊髓损伤神经功能恢复的影响，探讨其作用的可能机制。方法：1．实验动物及分组SD健康幼鼠8只，体重约100g左右，雌雄不限，用来进行BMSCs原代培养。SD健康成年大鼠72只，体重250～350g，雌雄不限，随机分为四组：（1）PBS组：18只，脊髓ALLEN’S打击伤后在损伤临近区注射PBS；（2）BMSC组：18只，脊髓ALLEN’S打击伤后在损伤临近区注射5一溴脱氧核苷尿嘧啶（BrdU）标记的BMSCs；（3）电针组：18只，脊髓ALLEN’S打击伤后24h进行电针治疗；（4）电针BMSC组（电针与BMSC移植联合应用）：18只，受损脊髓移植BrdU标记过的BMSCs后24h进行电针治疗。以上各组分为3d、7d、14d三个时相点。2．指标检测（1）体外分离培养BMSCs，镜下进行细胞形态学观察；（2）移植后3天、7天、14天，应用CBS评分法评价治疗前后损伤大鼠神经功能改善状况。（3）移植后3天、7天、14天，应用原位杂交方法检测损伤大鼠脊髓NGFmRNA表达变化情况。（4）于移植后第14天应用免疫组化技术检测BrdU标记的BMSCs的神经元烯醇化酶（NSE）表达情况。结果：1．BMSCs的原代和传代培养：原代细胞呈集落趋势贴壁生长，分布不均匀。接种10天左右，细胞融合达90％以上，此时进行传代培养。传代后细胞增殖迅速，7天左右细胞即融合。传代后的细胞生长均匀，大部分呈长梭形。2．各时相点的各组动物神经功能均有不同程度的恢复。BMSC组、电针组与PBS组比较神经功能评分有显着性差异（P＜0.05）；电针BMSC组与PBS组比较有非常显着性差异（P＜0.01）；而电针BMSC组与单纯BMSC组和单纯电针组比较，神经功能恢复的更好，评分亦有显着性差异（P＜0.05）；而BMSC组和电针组比较无显着性差异（P＞0.05）。3．BMSC组与电针组损伤脊髓NGFmRNA表达较PBS组有明显增加（P＜0.05）；电针BMSC组较PBS组表达增加更为明显（P＜0.01）；电针BMSC组与单纯BMSC组和单纯电针组比较NGFmRNA的表达亦有明显增加（P＜0.05）；电针组与BMSC组比较无显着性差异（P＞0.05）。4．BMSCs移植14d后，BrdU标记的阳性细胞表达NSE的百分率分别为：BMSC组为7.2％；电针BMSC组为7.9％。结论：BMSCs移植后可在宿主体内存活并分化为神经细胞；电针促进移植的BMSCs在体内分化为神经细胞，以及电针与BMSCs移植联合应用，改变脊髓损伤区的微环境，是减少脊髓继发性损伤，促进其功能恢复的可能机制。
王焕明[10]（2007）在《大鼠骨髓基质细胞源性神经干细胞诱导分化及自体移植治疗颞叶癫痫实验研究》文中研究指明神经干细胞是指具有分化为神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞的能力，能自我更新并提供大量脑组织细胞的细胞。它主要存在于胚胎和成年中枢神经系统脑室周围的广泛区域，但最近的研究显示骨髓基质细胞在一定条件下能诱导分化成神经干细胞，从而为神经干细胞的应用提供了无限制的来源。骨髓基质细胞源性神经干细胞的开发和应用，既克服了从脑组织获取神经干细胞的危险性和局限性，也避免了胎儿组织移植中存在的伦理、免疫排斥、来源有限等问题，其在治疗中枢神经系统损伤和神经退行性疾病领域将会有广阔的应用前景。癫痫为神经系统常见病之一，其患病率占人群的5‰左右，国内统计约占全部居民的7‰。癫痫为一非特异性慢性脑疾病，它是由先天的或后天的不同原因导致的慢性脑功能失调所引起的一种临床症候群，其特征是由于大脑某些神经元突然过度高频放电所引起的具有各种临床（或实验室）表现的反复发作。颞叶癫痫为局灶性癫痫的主要类型之一，常有较特殊的嗅觉异常，意识障碍和醉梦状表现。其常见的病理学改变是海马硬化，即海马结构的一些区域神经元丢失和胶质增生。尽管前颞叶切除或选择性海马杏仁核切除可使部分颞叶癫痫病人得以痊愈，但手术本身有一定的危险性，可能会引起偏瘫、偏盲、记忆损害等，且对双侧颞叶的致痫灶不宜作双侧切除。因此，通过神经干细胞移植进行海马功能的修复重建实验研究，可以从一个新的角度来探索治疗、改善颞叶癫痫发作频率和程度的途径，具有潜在的临床意义。第一部分大鼠骨髓基质细胞体外诱导分化为神经干细胞实验研究一、目的探讨大鼠骨髓基质细胞在体外培养并诱导分化为神经干细胞的可行性，并确立骨髓基质细胞诱导分化为神经干细胞的适当培养方法及条件，为其在组织工程学研究和临床医学中的广泛应用奠定基础。二、材料与方法以SD大鼠为实验对象，无菌穿刺大鼠股骨骨髓腔抽取骨髓，梯度密度离心获得有核细胞，粘附法提取骨髓基质细胞。向提取的骨髓基质细胞悬液加入神经干细胞培养液，调整细胞浓度到106个／ml后，接种于多孔培养板中，再分别加胎牛血清（1％终浓度）、LIF（10ng／ml）及bFGF（10ng／ml）。在37℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养骨髓基质细胞，48h后换液以去除非黏附细胞，以后每周换液2次。原代培养一周后进行细胞传代培养，传代培养的细胞加入胎牛血清以及RA（0.5ug／ml），以诱导骨髓基质细胞向神经干细胞分化。然后在CK2型倒置光学显微镜下追踪观察培养的活细胞生长情况并拍照。采用SABC法进行免疫细胞化学检测，将不同阶段培养细胞经4％多聚甲醛固定，0.01MPBS冲洗，一抗37℃，孵育60min，生物素化二抗室温孵育10min，最后在链霉亲和素-生物素-过氧化酶复合物室温孵育10min，经DAB显色5～15 min，并在OLYMPUS光学显微镜下观察拍照。三、结果贴壁细胞培养48h后有分裂增殖，然后逐渐形成岛屿状细胞克隆团，给予适当的分化条件10～20d后，这些细胞能分化成具有细长突起、多种形态的细胞。经免疫细胞化学鉴定发现早期的培养细胞在没有给予诱导分化时可阳性表达Nestin，表明其具有神经干细胞的特性；培养细胞经诱导后有NeuN、NSE和GFAP阳性表达的细胞出现，且随着诱导时间的延长阳性表达的细胞逐渐增强，提示有分化为神经元样或神经胶质细胞样细胞的趋向。四、结论SD大鼠骨髓基质细胞在合适的体外培养条件下能够转化为神经干细胞，并保持增殖分化的能力。骨髓基质细胞源性神经干细胞能分化成具有神经系细胞特征的细胞，且能阳性表达NeuN、NSE和GFAP。第二部分大鼠骨髓源性神经干细胞自体移植治疗颞叶癫痫实验研究一、目的探讨骨髓源性神经干细胞自体移植至KA大鼠海马后与宿主细胞的整合及其对损伤宿主的修复作用，从而为神经干细胞移植治疗颞叶癫痫提供理论依据。二、材料与方法首先分离大鼠骨髓基质细胞，并在特定的条件下培养使其诱导分化为神经干细胞，使用Feridex对干细胞进行标记。将60只雄性SD大鼠随机分为三组：对照组、移植组及未移植组，每组20只。然后建立大鼠颞叶癫痫模型，将Feridex标记的神经干细胞自体移植到癫痫模型鼠的右侧海马CA3区，对KA未移植和对照组大鼠在相同的靶点注入等量的生理盐水。观察移植后1周、2周、4周、8周和16周大鼠海马的脑电图、MRI和病理学改变情况。三、结果KA注射大鼠均出现典型癫痫发作症状，且经过一段静止时间后大鼠均再次出现反复的自发性癫痫发作，发作类似杏仁核点燃；与KA未移植组相比，移植组大鼠海马脑电图的波幅明显降低，至移植8周后最高降低达40％以上；MRI检查发现在神经干细胞移植后1周和2周时低信号改变区比较局限，但移植4周、8周和16周后低信号改变明显增大，且随着时间的推移低信号改变区逐渐增大；病理学检查显示，KA移植组的CA3区锥体细胞数与未移植组和对照组相比较有统计学差异（P＜0.01）；在移植组内，各时间段之间相比也有统计学差异（P＜0.01），至移植后8周时细胞数最大，此后又开始下降；在KA未移植组，随着时间的推移，CA3区锥体细胞计数则呈现明显下降趋势；KA移植组海马损伤侧的Timm染色与未移植组和对照组相比有统计学差异（P＜0.01）；在移植组内，各时间段相比也有统计学差异（P＜0.01），至移植后第8周时Timm染色记分最小，但此后又开始增加；电镜超微结构检查显示移植组海马CA3区锥体神经元核仁明显，胞质内可见较多的脂褐素，线粒体肿胀，突触小泡数量较少。而未移植组海马CA3区锥体神经元游离核蛋白体减少，突触膜融合，突触小泡明显增多。四、结论骨髓源性神经干细胞自体移植至KA大鼠海马后对癫痫鼠的癫痫发作有一定的抑制作用，且能与宿主细胞进行整合，并对宿主海马具有显着的修复作用，但其具体的作用机理尚待进一步研究。
二、NGF对小鼠骨髓基质细胞体外诱导分化作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、NGF对小鼠骨髓基质细胞体外诱导分化作用（论文提纲范文）
（1）虎杖苷上调Nrf2/ARE促进神经分化在骨髓干细胞移植治疗脊髓损伤中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 第一节 脊髓损伤的中西医治疗进展 |
| 一、脊髓损伤的概述、流行病学及病理机制 |
| 二、脊髓损伤的治疗进展 |
| 三、中医对脊髓损伤的认识 |
| 四、中医药在脊髓损伤的治疗进展 |
| 五、中医药联合BMSCs移植在脊髓损伤的治疗进展 |
| 第二节 Nrf2/ARE信号通路在脊髓损伤中的研究进展 |
| 一、Nrf2/ARE信号通路的起源及其调控 |
| 二、Nrf2/ARE信号通路在脊髓损伤中的调控作用 |
| 三、Nrf2/ARE信号通路在BMSCs向神经分化及脊髓损伤治疗中的应用前景 |
| 第二章 虎杖苷对BMSCs在体外向神经分化的影响 |
| 第一节 研究背景 |
| 第二节 实验材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 第三节 实验结果 |
| 一、细胞形态观察与鉴定 |
| 二、CCK-8检测细胞活性结果 |
| 三、神经诱导分化后细胞形态观察 |
| 四、Western blot检测结果 |
| 五、RT-qPCR检测结果 |
| 六、细胞免疫荧光检测结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第三章 虎杖苷对移植BMSCs在体内向神经分化的影响 |
| 第一节 研究背景 |
| 第二节 实验材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 第三节 实验结果 |
| 一、BrdU标记BMSCs |
| 二、脊髓损伤模型造模后小鼠的一般情况 |
| 三、脊髓组织免疫荧光检测结果 |
| 四、Wetern blot检测结果 |
| 五、ELISA检测结果 |
| 六、氧化应激指标检测结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第四章 虎杖苷-Nrf2/ARE轴在BMSCs向神经分化中的调控机制 |
| 第一节 研究背景 |
| 第二节 实验材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 第三节 实验结果 |
| 一、细胞实验结果 |
| 二、动物实验结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五章 虎杖苷联合BMSCs移植在脊髓损伤中的疗效探讨 |
| 第一节 研究背景 |
| 第二节 实验材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 第三节 实验结果 |
| 一、行为学评价 |
| 二、神经电生理检测结果 |
| 三、组织形态学结果 |
| 四、脊髓组织神经结构恢复结果 |
| 第四节 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（2）体外诱导小鼠肌源干细胞向类雪旺细胞分化的条件和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写对照表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分：小鼠肌源干细胞的分离、制备和鉴定 |
| 材料 |
| 实验方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分：小鼠雪旺细胞条件培养液体外诱导小鼠 MDSCs 向类雪旺细胞的分化 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分：神经营养因子体外诱导小鼠 MDSCs 向类血旺细胞分化的条件和机制 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 小结 |
| 文献综述 |
| 经营养因子与神经再生 |
| 参考文献 |
| 雪旺细胞与神经生长 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）左归丸体外诱导MSCs分化及移植治疗鼠痉挛型脑瘫的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 综述一 中药干预MSCs体外定向分化及移植治疗痉挛型脑瘫研究进展 |
| 1 神经干细胞移植研究进展 |
| 2 MSCs定向分化移植研究进展 |
| 3 神经生长因子研究进展 |
| 4 中医药对MSCs分化的影响 |
| 5 补肾益髓理论与脑瘫治疗 |
| 参考文献 |
| 综述二 痉挛型脑瘫动物模型研究进展 |
| 1 鼠大脑解剖 |
| 2 常用方法 |
| 3 运动行为评估方法 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 大鼠MSCs提取和体外培养扩增的研究 |
| 引言 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 左归丸和mNGF对鼠MSCs体外诱导分化的影响 |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 大鼠脑瘫偏瘫模型制作和行为学评估 |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 NSCs植入偏瘫模型大鼠疗效观察研究 |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）黄芪对低氧环境下血管内皮细胞生长因子/基质细胞衍生因子-1诱导人骨髓间充质干细胞分化、迁移的干预作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 综述一 低氧对骨髓间充质干细胞影响的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 黄芪对干细胞的影响 |
| 参考文献 |
| 综述三 中医药干预骨髓间充质干细胞的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 黄芪对低氧环境下VEGF诱导HBMSCS分化的干预作用的研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 黄芪对低氧环境下SDF-1诱导HBMSCS迁移的干预作用的研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）生长因子诱导骨髓基质干细胞向胆碱能神经元分化及其信号转导机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 一、骨髓基质细胞向神经细胞分化的研究现状 |
| 二、骨髓基质干细胞分化为神经元的可能机制 |
| 三、PI3K- Akt-mTOR 信号通路在细胞分化中的作用 |
| 四、MAPK(mitogen activated protein kinase, 丝裂原活化蛋白激酶)信号转导 途径及其功能 |
| 五、p53 途径与 Akt 和 MAPK 通路的关系及对分化的作用 |
| 六、自噬(Autophagy)与细胞内信号通路的相互作用 |
| 七、目前研究存在的问题 |
| 八、研究目标和意义 |
| 参考文献 |
| 第一部分 大鼠骨髓基质细胞培养及向神经元诱导分化的方法筛选 |
| 第一节 骨髓基质干细胞的原代培养、传代和鉴定 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二节 BMSCs 诱导分化为神经元的方法筛选 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 联合诱导BMSCs 向胆碱能神经元的分化及抑制P13K 对分化的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 信号通路蛋白在BMSCs 诱导分化为胆碱能神经元过程中的机制 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 学位论文结论 |
| 综述 |
| 中英文词语对照及缩略词表 |
| 今后研究工作设想 |
| 攻读博士学位以来发表论文、科研成果及获奖 |
| 致谢 |
（6）丹参、藜芦对大鼠MSCs分化为神经元样细胞及SMNmRNA表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1. MSCs研究进展 |
| 2. 诱导MSCs向神经样细胞分化研究进展 |
| 3. 丹参反藜芦考证 |
| 4. 脊髓性肌萎缩症研究进展 |
| 5. 本实验研究思路、内容和目的 |
| 实验一 MSCs的分离、培养及鉴定 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 实验一结论 |
| 实验二 丹参、藜芦水煎液对MSCs分化为神经元样细胞的干预研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 实验二结论 |
| 实验三 丹参、藜芦水煎液对分化后神经元样细胞SMNmRNA表达的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 实验三结论 |
| 实验四 丹参、藜芦含药血清对MSCs分化为神经元样细胞的干预研究 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 实验四结论 |
| 课题结论 |
| 创新之处 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经细胞再生的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 干细胞治疗脑缺血损伤的研究进展 |
| 2 骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤的研究概况 |
| 3 中医药影响骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤的研究述评 |
| 4 中医药促进脑缺血损伤神经元重塑的研究 |
| 第二部分 研究思路 |
| 中医药联合骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血再灌注损伤研究的思路与策略 |
| 第三部分 实验研究 |
| 前言 |
| 1 流行病学概况 |
| 2 脑缺血神经细胞损伤的级联反应机制 |
| 3 脑缺血损伤后神经细胞保护与修复策略 |
| 4 骨髓间充质干细胞移植保护神经细胞的基础和潜能 |
| 5 中医药保护脑缺血神经细胞损伤的优势 |
| 6 中医药对骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血损伤的影响 |
| 7 脑脉通对脑缺血神经细胞损伤保护作用的探索 |
| 参考文献 |
| 实验一 脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经细胞及神经营养因子的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 脑脉通对脑缺血再灌注损伤大鼠骨髓间充质干细胞移植后向神经细胞分化的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 实验四 脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注损伤神经元突触重建的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 结语 |
| 结语 |
| 第五部分 附录 |
| 病理照片 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）电针和BMSC移植联合应用对脊髓损伤再生修复的基因调控机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 一、干细胞的概念和分类 |
| 二、骨髓基质细胞的研究进展 |
| 三、中医对脊髓损伤的认识 |
| 四、针刺治疗脊髓损伤的机理研究 |
| 实验研究 |
| 实验一 电针促进骨髓基质细胞分化为神经细胞的实验研究 |
| 实验二 电针和骨髓基质细胞移植联合应用对脊髓损伤大鼠BDNF、NGFmRNA表达影响的实验研究 |
| 讨论 |
| 一、关于实验性脊髓损伤模型的建立 |
| 二、SCI模型动物运动能力评分法 |
| 三、BMSC在受损脊髓组织中的神经分化 |
| 四、神经生长因子对BMSC分化的诱导作用 |
| 五、电针与BMSCs移植联合应用对大鼠脊髓损伤组织 BDNFmRNA和NGFmRNA表达的影响 |
| 六、电针联合骨髓基质细胞移植治疗脊髓损伤的可能机制 |
| 七、电针联合骨髓基质细胞移植在脊髓损伤治疗中的优越性 |
| 八、目前骨髓基质细胞临床应用所存在的问题 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 个人简历 |
（9）电针并BMSCs移植对大鼠脊髓损伤组织NGFmRNA表达的影响（论文提纲范文）
| 目录 |
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 一、骨髓基质细胞研究进展 |
| (一) 骨髓基质细胞的概念 |
| (二) 骨髓基质细胞的生物学特性 |
| (三) 骨髓基质细胞的诱导分化 |
| (四) 骨髓基质细胞应用前景及有待解决的问题 |
| 二、中医对脊髓损伤的认识 |
| 三、针刺治疗脊髓损伤的机理研究 |
| (一) 对脊髓组织结构的影响 |
| (二) 对脊髓微循环的影响 |
| (三) 对脊髓生化的影响 |
| (四) 对脊髓干细胞的影响 |
| (五) 对脊髓神经营养活性物质的影响 |
| 实验一、电针促进骨髓基质细胞转化为神经细胞的试验研究 |
| 一、材料和方法 |
| (一) 主要仪器与试剂 |
| (二) 实验动物 |
| (三) 实验方法 |
| 二、实验结果 |
| 实验二、电针并骨髓基质细胞移植对脊髓损伤大鼠NGFmRNA表达影响的实验研究 |
| 一、材料和方法 |
| 二、实验结果 |
| 讨论 |
| 一、关于实验性脊髓损伤模型的建立 |
| 二、实验动物的选择 |
| 三、SCI模型动物运动能力评分法 |
| 四、神经生长因子对BMSC分化的诱导作用 |
| 五、电针并BMSC移植对脊髓损伤大鼠NGFmRNA表达的影响 |
| 六、电针并BMSC移植治疗脊髓损伤可能机制 |
| 七、电针并BMSC移植在脊髓损伤治疗中的优越性 |
| 八、目前BMSC临床应用所存在的问题 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 攻读硕士期间发表的论文 |
| 个人简历 |
（10）大鼠骨髓基质细胞源性神经干细胞诱导分化及自体移植治疗颞叶癫痫实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 大鼠骨髓基质细胞体外诱导分化为神经干细胞实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 大鼠骨髓源性神经干细胞自体移植治疗颞叶癫痫实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 文献综述一 中枢神经系统的细胞移植 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 神经干细胞与颞叶癫痫 |
| 参考文献 |
| 中英文名词缩写与对照 |
| 学习期间发表论文及参与编写专着 |
| 致谢 |
四、NGF对小鼠骨髓基质细胞体外诱导分化作用（论文参考文献）
- [1]虎杖苷上调Nrf2/ARE促进神经分化在骨髓干细胞移植治疗脊髓损伤中的应用[D]. 詹吉恒. 广州中医药大学, 2020
- [2]体外诱导小鼠肌源干细胞向类雪旺细胞分化的条件和机制研究[D]. 唐乙. 第二军医大学, 2012(09)
- [3]左归丸体外诱导MSCs分化及移植治疗鼠痉挛型脑瘫的研究[D]. 许世刚. 北京中医药大学, 2010(10)
- [4]黄芪对低氧环境下血管内皮细胞生长因子/基质细胞衍生因子-1诱导人骨髓间充质干细胞分化、迁移的干预作用的研究[D]. 沈凌. 北京中医药大学, 2010(10)
- [5]生长因子诱导骨髓基质干细胞向胆碱能神经元分化及其信号转导机制研究[D]. 高博. 苏州大学, 2009(11)
- [6]丹参、藜芦对大鼠MSCs分化为神经元样细胞及SMNmRNA表达的影响[D]. 胡向阳. 暨南大学, 2008(02)
- [7]脑脉通联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠神经细胞再生的影响[D]. 刘敬霞. 北京中医药大学, 2007(04)
- [8]电针和BMSC移植联合应用对脊髓损伤再生修复的基因调控机制研究[D]. 张力. 黑龙江中医药大学, 2007(05)
- [9]电针并BMSCs移植对大鼠脊髓损伤组织NGFmRNA表达的影响[D]. 李春雨. 黑龙江中医药大学, 2007(05)
- [10]大鼠骨髓基质细胞源性神经干细胞诱导分化及自体移植治疗颞叶癫痫实验研究[D]. 王焕明. 南方医科大学, 2007(04)